决明子薄层鉴别方法改进研究

郑智慧　谢鸣坤　梁华伦　徐万帮

（1广东省中医院药剂科，广州510120；2广东省食品药品检验所，广州510120）

决明子薄层鉴别方法改进研究

郑智慧1谢鸣坤1梁华伦1徐万帮2*

（1广东省中医院药剂科，广州510120；2广东省食品药品检验所，广州510120）

目的修订中国药典决明子薄层鉴别方法。方法修改提取方法，参照《中国药典》（2015版）展开条件，进行决明子薄层鉴别实验，并对修订后的方法进行了方法学验证。结果所有样品均能检出橙黄决明素、大黄酚斑点，斑点清晰，易于检测。结论决明子修订后的薄层色谱鉴别方法操作简便、专属性强、斑点清晰。

决明子；薄层色谱法；改进

决明子是我国民间应用极为广泛的常用药材之一，具有悠久的历史。《本草便》记载决明子“主青盲，目淫肤赤白膜，眼泪出，除肝家热，久服益精光。又解蛇毒。贴脑心止鼻洪”［1］。因此，在2005～2015版《中国药典》中均收录了该品种。由2005版《中国药典》对专属性不强的大黄酚和大黄素进行质量控制［2-3］，到2015版《中国药典》对专属性强的橙黄决明素和大黄酚进行质量控制，体现了对其内在质量控制的进步。

在实验中发现，采用《中国药典》（2015版）的操作对决明子薄层鉴别时，斑点不是很清晰，本实验在《中国药典》（2015版）的基础上，改进提取方式和改变溶剂，以橙黄决明素和大黄酚为指标，对决明子薄层色谱鉴别方法进行提升。获得较优的测试结果，现报道如下

1　仪器和试剂

1.1仪器全自动薄层点样仪（CAMAG AUTO MATIC TLC SAMPLER4）、薄层自动成像仪（CAMAG REPROSTAR 3）

1.2试剂甲醇、盐酸、乙醚、三氯甲烷、无水乙醇、石油醚（30～60℃）、丙酮、氨水均为分析纯，购自广州化学试剂厂；乙酸乙酯为分析纯，购自天津化学试剂厂；水为本实验室自制高纯水。

橙黄决明素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111900-201303），大黄酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110796-201017）

2　实验步骤

2.1《中国药典》［4］（2015版）实验步骤取本品粉末1g，加甲醇10m1，浸渍1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10m1使溶解，再加盐酸1m1，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1.0m1使溶解，作为供试品溶液。另取橙黄决明素对照品、大黄酚对照品，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）制成每1m1各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-丙酮（2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚）。

2.2修订后的实验步骤取经粉碎后（过2号筛）的样品2g，加甲醇20m1，加热回流2h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1m1使溶解，作为供试品溶液。另取橙黄决明素对照品、大黄酚对照品，加甲醇制成每1m1各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述供试品溶液10μ1、对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚）。

3　结果与讨论

3.1《中国药典》方法所得薄层鉴别图按照2.1所记载的步骤，照薄层色谱法（通则0502）试验，在室温（26℃，此时RH为66%）所得薄层色谱图如下，见图1

图1　决明子薄层鉴别（左：日光；右：氨蒸气熏后）（药典方法）

从图1可以看出，采用《中国药典》2015版所记载的方法所得到的薄层色谱图，斑点不是很清晰，展开不够理想。所有斑点比较集中，不利于判断。

3.2修订方法后所得薄层色谱图根据2.2所记载的方法，对修订后的方法进行薄层鉴别，所得结果如下（见图2）

图2　决明子薄层鉴别（左：日光；右：氨蒸气熏后）（修订方法）

从图2可以看出，修订后，决明子的薄层色谱图能更好的将决明子中的有效成分大黄酚、大黄素甲醚、决明素、橙黄决明素等醌类化合物［4］，同时，Rf值合理，斑点清晰。同时，减少了三氯甲烷的使用，降低了环境污染，避免了实验者的潜在伤害。

4　修订薄层鉴别方法学考察

针对《中国药典》（一部）（2015版）决明子项下的方法，采用2.2的实验步骤对其进行了修订，按照《中国药典》（四部）（2015版）中的指导原则对该方法进行方法学验证。

4.1专属性考察按照2.2的方法，分别吸取决明子供试品溶液、橙黄决明素、大黄酚对照品溶液10、2、2点样于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（2∶1）为展开剂，展开（室温：25℃，相对湿度：74%），取出，晾干，置日光下检视，置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚），实验结果见图3。

图3　决明子薄层鉴别专属性考察色谱图（左：日光；右：氨蒸气熏后）

由图3可见，决明子供试品溶液色谱中，在与橙黄决明素、大黄酚对照品色谱的相应位置显相同颜色的斑点，分离度良好，斑点清晰。

4.2不同点样量的考察吸取决明子供试品溶液（批号：407376L）不同点样量5、8、10、15μ1，橙黄决明素对照品溶液1、2、3、5μ1，大黄酚对照品溶液1、2、3、5μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，按上述色谱条件展开（室温：25℃，相对湿度：74%）、取出、晾干，置日光下检视，置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚），结果见图4～5：

图4　决明子薄层鉴别点样量考察（批号：407376L）（日光）

图5　决明子薄层鉴别点样量考察（批号：407376L）（氨蒸气熏后）

由图4～5可见，决明子点样量为10μ1、橙黄决明素对照品溶液点样量为2μ1、大黄酚对照品溶液点样量为2μ1时，斑点清晰，且不拖尾。因此，决明子点样量为10μ1、橙黄决明素、大黄酚对照品溶液点样量各为2μ1。

4.3不同温度考察分别吸取决明子供试品溶液以及橙黄决明素、大黄酚对照品溶液点于同一硅胶H板上，按上述薄层色谱条件，分别在常温（T：25℃，RH：74%）和低温（T：6℃，RH：40%）条件下展开，取出，晾干，置日光下检视，置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚），实验结果见图6～7：

图6　常温条件下决明子薄层鉴别色谱图（左：日光右：氨蒸气熏后）

图7　低温条件下决明子薄层鉴别色谱图（左：日光；右：氨蒸气熏后）

尽管由于图7中的边缘效应，导致图形有点变形，但是由图6～7可明显看出，常温和低温条件下，决明子分离效果都较好，且决明子色谱在与橙黄决明素、大黄酚对照品色谱相应的位置显相同颜色的斑点。

实验结果表明，温度对决明子薄层鉴别无显著影响，说明该薄层鉴别方法耐用性好。

4.4不同湿度考察分别吸取决明子供试品溶液和橙黄决明素、大黄酚对照品溶液点于同一硅胶H板上，按上述薄层色谱条件，分别在高湿（T：25℃，RH：75%）和低湿（T：25℃，RH：20%）条件下展开，取出，晾干，置日光下检视，置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚），实验结果见图8～9：

图8　高湿条件下决明子薄层鉴别色谱图（左：日光；右：氨蒸气熏后）

图9　低湿条件下决明子薄层鉴别色谱图（氨蒸气熏后）

图10　自制H板色谱图（左：日光；右：氨蒸气熏后）

图11　青岛海洋化工厂所制H板色谱图（左：日光；右：氨蒸气熏后）

图12　烟台市化学工业研究所所制H板色谱图（左：日光；右：氨蒸气熏后）

由图8～9可知，高湿和低湿条件下，决明子分离效果都较好，在不同条件下，斑点均清晰，分离度良好。因此，湿度对决明子薄层鉴别无显著影响，说明该薄层鉴别方法耐用性好。

4.5不同厂家薄层板的考察分别吸取决明子供试品溶液、橙黄决明素、大黄酚对照品溶液点于不同厂家硅胶H薄层板（实验室自制、青岛海洋化工厂分厂、烟台市化学工业研究所）上，按上述薄层色谱条件进行展开（T：25℃，RH：74%），取出，晾干，置日光下检视，置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色（橙黄决明素）和粉红色（大黄酚），实验结果见图10～12：由图10～12可知，三种不同H板对决明子薄层鉴别无显著影响，显色后斑点清晰，分离度良好。

此外，本实验还对展开前的饱和时间进行了考察，发现饱和时间延长，色谱斑点更清晰，建议其他实验者在实验中适当增加饱和时间，以期获得最佳的效果

5　结论

本实验在《中国药典》2015版决明子药材薄层鉴别的基础上，修改了提取方法，更换了对环境影响较大的三氯甲烷，采用相对环境友好的甲醇为溶剂进行薄层鉴别，经方法学验证，分离度良好，斑点清晰，可为更好的对决明子质量控制提供技术支撑。

［1］李心机.《本草便》校注札记［J］.山东中医药大学学报，2014，38（3）：241-243.

［2］胡软娟，万丽，张加雄，等.决明子药材薄层色谱鉴别研究［J］.时珍国医国药，2006，17（11）：2129.

［3］黄小平，钟国跃，张雪梅，等.决明子薄层鉴别方法研究［J］.中药材，2010，33（8）：1246-1247.

［4］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：145.

［5］卢金清，黎强，李肖爽，等.决明子研究进展［J］.湖北中医药大学学报，2014，16（4）：124-126.

ZHENG Zhihui1， XIE Mingkun1， LIANG Hua1un1， XU Wanbang2
（1. Department of Pharmacy， Guangdong Provincia1Hospita1of TCM Hospita1， Guangzhou 510120， China；2. Guangdong Institute of Drug Contro1， Guangzhou 510120， China）

Objective To improve the TLC method of semen cassiae in China Pharmacopoeia.Methods A new extraction method was app1ied to the TLC identification test of Semen Cassiae according to the Chinese Pharmacopoeia（2015Edition），and va1idation of the revised method was carried out.Results The spots were c1ear，and were easy to detect.Conclusion The revised TLC method of Cassia Seed is simp1e，and has strong specificity and c1ear spots.

Semen Cassiae；TLC；improvement

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.12.062

1672-2779（2016）-12-0139-04

（本文编辑：李海燕本文校对：梁伟杰2016-04-15）

wbxu@163.com