金银花注射液抗流感病毒作用的实验研究

陈　丽，顾　燕（.江苏省中医院，南京009；.江苏睿博医药有限公司，江苏南京）

金银花注射液抗流感病毒作用的实验研究

陈丽1，顾燕2（1.江苏省中医院，南京210029；2.江苏睿博医药有限公司，江苏南京211112）

目的考察金银花注射液的抗流感病毒作用。方法观察感染流感病毒的小鼠模型注射或灌胃给予不同剂量金银花注射液后的死亡情况、肺指数及肺指数抑制率。结果金银花注射液不同剂量组（6.6、13.2、26.4 g/kg）能明显降低流感病毒感染小鼠死亡率，减轻流感病毒感染小鼠肺部病变，金银花注射液注射给药3个剂量组存活时间、肺指数抑制率与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）；注射给药效果优于灌胃给药，差异有统计学意义（P＜0.05），抗流感病毒作用呈剂量依赖性，高剂量组注射给药效果优于阳性对照药双黄连注射液，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论金银花注射液具有抗流感病毒作用。

金银花；流感，人；注射剂；病毒；抗病毒药

金银花具有清热解毒、疏散风热的作用，用于臃肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等［1］。金银花富含挥发油，此外含黄酮类、三萜类及有机酸等成分，具有增强免疫力、止血、利胆、保肝、抗炎、降血脂、溶血和抗生育作用等功效［2-3］，已有银翘解毒片、银黄片、银黄注射液、双黄连注射液等多种复方制剂广泛应用于临床。本研究考察金银花注射液的抗流感病毒作用，为其临床应用提供依据。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1药物与试剂金银花注射液，规格：每瓶2mL，相当于生药材10 g，成人日用量为每60千克含40 g生药量，江苏省中医药自制，批号：040918；双黄连注射液，规格：每支20mL，河南淅川制药集团有限公司生产，批号：041029；氯化钠溶液，规格：500mL∶4.5 g，南京小营制药厂生产，批号：20040607。乙醚，上海马陆化工厂生产，批号：020216。

1.1.2动物清洁级美国癌症研究所（ICR）小鼠317只，由南京医科大学提供。

1.1.3病毒及细胞株鸡胚接种传代，鸡红细胞凝集试验测得效价均为1∶320。流感病毒鼠肺适应株，血凝效价为1∶640，由南京中医药大学温病教研室提供。

1.1.4主要仪器FA2104上皿电子天平（上海精科天平厂）、净化工作台（苏州净化设备厂）、孵箱（上海分析仪器厂）。

1.2方法

1.2.1药物制备用于小鼠的药物制备：取金银花注射液，加0.9%氯化钠注射液（NS）配成0.66、1.32、2.64 g/kg（生药量）3种质量浓度。

1.2.2金银花注射液对流感病毒鼠肺适应株感染小鼠死亡的保护作用［4-7］

1.2.2.1流感病毒鸡胚增毒试验取9日龄鸡，取出胚尿囊，将流感病毒毒株接种于胚尿囊中，37℃培养48 h后取出增毒的尿囊液。再将增毒的尿囊液接种于鸡胚尿囊中，重复4次后用于实验。实验前做血凝试验（HA）。

1.2.2.2HA取36孔血凝板，第1孔加入NS 0.9mL，其余孔加NS各0.5mL。精密吸取病毒尿囊液0.1mL加入第1孔内，混匀混合后取0.5mL加至第2孔，依次梯度稀释至第8孔。第9孔不加病毒尿囊液，作空白对照。接着每孔加入0.5%鸡红细胞0.25mL，摇匀，室温放置2 h。

1.2.2.3流感病毒感染小鼠半数致死量（LD50）测定取清洁级ICR小鼠56只，13～15 g，雌雄各半，随机分为七组，每组各8只，取增毒4次的病毒尿囊液，稀释10倍，每组滴1个病毒浓度。各组小鼠在乙醚浅麻醉下以病毒尿囊液50μL滴鼻，观察14 d内死亡数。按Reed-Muench法计算LD50。

1.2.2.4对流感病毒感染小鼠死亡的保护作用取清洁级ICR小鼠171只，体质量13～16 g，雌雄各半，随机分为九组，每组各19只。（1）空白对照组：等量NS10mL/kg静脉给药；（2）模型组：等量NS 10mL/kg静脉给药；（3）双黄连注射液组 （阳性对照药组）：10mL/kg静脉给药。金银花注射液Ⅰ组（6.6 g/kg）、Ⅱ组（13.2 g/kg）、Ⅲ组（26.4 g/kg）为静脉给药。金银花注射液Ⅳ组（6.6 g/kg）、Ⅴ组（13.2 g/kg）、Ⅵ组（26.4 g/kg）为灌胃给药，容量为10mL/kg。各组每天给药1次，连续给药5 d。末次给药1 h后除空白对照组外，其余各组在乙醚浅麻醉下，以尿囊液30μL（20个LD50）给小鼠滴鼻感染，观察14 d内不同组小鼠感染后发病及死亡情况，通过比较存活时间考察金银花注射液对流感病毒感染小鼠死亡的保护作用。

1.2.3金银花注射液对流感病毒感染小鼠肺指数的影响取清洁级ICR小鼠90只，体质量13～16 g，雌雄各半。随机分为九组，每组各10只。分组及给药方式均同1.2.2.4项。各组每天给药1次，连续给药5 d。除空白对照组外，其余各组于给药第1天，在乙醚浅麻醉下以病毒尿囊液30μL（15个LD50）滴鼻感染小鼠，继续给药4 d。末次给药后将小鼠禁食（不禁饮），第2天称质量后脱颈处死，解剖，取全肺称质量，计算各鼠肺指数值（g/10 g体质量）和肺指数抑制率［（药物组-模型组）/模型组×100%］。

1.3统计学处理应用SPSS11.0统计软件进行数据分析，计量资料以表示，采用t检验；计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

表1　金银花注射液对流感病毒感染小鼠死亡的保护作用（按生药量计算）

表2　金银花注射液对流感病毒感染小鼠肺指数的影响（按生药量计算）

2　结　果

2.1金银花注射液对流感病毒鼠肺适应株感染小鼠死亡的保护作用HA结果为1∶640。LD50测定为10.00～2.11 g/kg。模型组小鼠存活时间显著短于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。金银花注射液静脉注射给药的3个剂量组（Ⅰ～Ⅲ组）均可显著降低流感病毒感染小鼠死亡率，明显延长流感病毒感染小鼠的存活时间，其存活时间分别与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。注射给药中、高剂量组（Ⅱ、Ⅲ组）小鼠存活时间长于阳性对照药双黄连注射液组；同剂量下静脉注射给药小鼠存活时间长于灌胃给药，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2金银花注射液对流感病毒感染小鼠肺指数的影响模型组小鼠肺指数显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。金银花注射液静脉注射给药3个剂量组（Ⅰ～Ⅲ组）均可明显降低流感病毒感染小鼠的肺指数值，与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05 或0.01）；金银花注射液静脉注射给药3个剂量组（Ⅰ～Ⅲ组）肺指数抑制率分别为12.7%、22.3%和32.8%，效果优于灌胃给药高、中、低3个剂量组（Ⅳ～Ⅵ组），差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3　讨　论

金银花经提取纯化工艺后制得富含有机酸（绿原酸）和黄酮类成分的提取物。金银花注射液是由金银花提取物加适量辅料制备而成，金银花中的有机酸为抗病毒作用的有效成分之一，对常见呼吸道病毒有抑制作用［8-9］，绿原酸与神经酰胺酶的2个活性腔均有作用力发生，具有抗流感病毒H5N1的作用［10］。

本研究结果表明，金银花注射液3个剂量组（6.6、13.2、26.4 g/kg）能降低感染流感病毒小鼠的死亡率，剂量越高，作用越强，注射给药中、高剂量组作用强于对照药双黄连注射液；同剂量下注射给药的作用强于灌胃给药。表明金银花注射液静脉注射给药对流感病毒感染小鼠具有明显的保护作用。各剂量组能减轻小鼠的肺部病变，作用趋势同前。本研究为金银花提取物制成注射剂及在临床上用于病毒性感冒提供了理论支持。

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［4］陈奇.中药药理研究方法学［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2011：239-378.

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Experimentalstudy on anti-influenza viruseffectof Honeysuckle Injection

Chen Li1，Gu Yan2（1.Jiangsu ProvincialHospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjiang，Jiangsu 210029，China；2.Jiangsu Ruibo Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanjiang，Jiangsu 211112，China）

ObjectiveTo investigate the effectof the anti-influenza virusofHoneysuckle Injection.MethodsThemortality，lung index and inhibiting rate of lung index were observed in the influenza virus infected micemodel by giving different dosesofHoneysuckle Injectionwith injection orgavage.ResultsThe differentHoneysuckle Injection doses（6.6，13.2，26.4 g/kg）groups could significantly reduce themortality ofmice infected by influenza virusand alleviated the lung lesion inmice infected by influenza virus，the survival time，inhibiting rate of lung index had statisticaldifferencesbetween 3 dosesgroupsand themodel group（P＜0.05 or 0.01）；the effectof injectionwasbetter than thatof gavage，the differencewas statistically significant（P＜0.05）. The effectofanti-influenza virus showed the dose-dependence，the effectof the high dose by injection administration was superior to thatof the positive control Shuanghuanglian Injection，the differencewas statistically significant（P＜0.05）.ConclusionHoneysuckle Injection has the effectofantiinfluenza virus.

Flos lonicerae；Influenza，human；Injectio；Virus；Antiviralagents

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.02.006

A

1009-5519（2016）02-0175-03

陈丽（1982-），本科，主要从事药剂调配工作。

2015-08-26）