HPLC测定虚燥更平浓缩丸中梓醇的含量△

赵丽，姜林，李晓瑾*

(1.新疆医科大学 中医学院，新疆 乌鲁木齐 830011；2.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002)

·中药工业·

HPLC测定虚燥更平浓缩丸中梓醇的含量△

赵丽1，2，姜林1，李晓瑾1，2*

(1.新疆医科大学 中医学院，新疆 乌鲁木齐 830011；2.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002)

目的：探索建立虚燥更平浓缩丸的质量控制方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Sepax HP-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；体积流量为1.0 mL·min-1；检测波长为210 nm；柱温为30 ℃。结果：在上述条件下，梓醇进样量0.042 9～0.2145 mg·mL-1呈良好的线性关系，按照加入梓醇浓度低、中、高分别测得样品加样回收率为100.41%、99.99%、100.08%，相对应的RSD值为0.60%、0.72%0.47%，该方法精密度、重复性均良好，RSD均小于2.0%。结论：该方法简便、准确、灵敏度高、重复性好，能有效测定虚造更平浓缩丸中梓醇的含量。

虚燥更平浓缩丸；梓醇；高效液相色谱法

围绝经期综合征俗称更年期综合征，是指女性的卵巢功能逐渐衰退，雌激素水平随之下降，出现以植物神经功能紊乱为主，伴有神经心理症状的一组症候群[1-3]。中医称这一时期妇女的症状为“经断前后诸证”[4-5]。虚燥更平浓缩丸是新疆医科大学附属中医医院院内制剂，本方由生地黄、桑葚、酸枣仁、罗布麻叶等六味药材组成。其主要功能为补虚润燥、平肝安神。主要用于治疗由妇女围绝经期综合征引起的眩晕、头痛、失眠、烘热汗出、烦燥易怒、口干唇燥、胸闷、心悸、耳鸣、健忘、情志异常、记忆减退、手足麻木等[6-7]。为摆脱之前散剂的缺点，同时也为更好地服务于患者，本课题组采用现代的技术和工艺，将其制成丸剂—虚燥更平浓缩丸。遵照方剂学中君臣佐使的关系，本研究以君药生地黄中梓醇为主要评价指标，建立高效液相色谱法监控丸剂质量的方法，为虚燥更平浓缩丸的质量控制及新药研发提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

waters e2695高效液相色谱仪、waters2998PDA检测器；Metter AE163电子天平；KQ5200DA型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；UPT-Ⅱ-10型制水机(成都超纯科技有限公司，编号：T060214)。

1.2 试药

梓醇对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110808-201210，纯度≥98.1%)；生地黄、桑葚、酸枣仁等药材购自安徽亳州市中正药材饮片有限公司(批号分别为20140206，20140208，20140301)；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Sepax HP-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；检测波长为210 nm；流速为1.0 mL·min-1；柱温30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按梓醇峰计算不得低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的梓醇对照品4.29 mg，置于10 mL容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为0.429 mg·mL-1的对照品储备液。

2.3 梓醇的全波长扫描

精密吸取2.2中对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，在紫外200～400 nm进行3D全波长扫描，得到最大吸收波长为210 nm，见图1。

图1 梓醇的全波长扫描

2.4 供试品溶液的制备

取虚燥更平浓缩丸，研磨(过四号筛)，精密称取药物粉末1.0 g置于100 mL具塞锥形瓶中，加入30 mL甲醇，精密称定，超声提取30 min，取出，待冷却后，用甲醇补充减失的重量，摇匀，过滤。取续滤液10 mL至蒸发皿中，蒸至近干后用流动相溶解，转溶至10 mL容量瓶内，用流动相定容至刻度后，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm滤膜，作为供试品溶液。

2.5 阴性样品溶液的制备

取缺生地黄的处方药材，按虚燥更平浓缩丸制备工艺制成缺生地黄的阴性样品，按2.4方法制备阴性样品溶液。

2.6 线性关系考察

精密吸取2.2梓醇对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液。每次取10 μL依次进样，测定峰面积。以梓醇对照品的质量浓度(X)为横坐标，色谱峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得梓醇回归方程为Y=233 717X-4089，r=0.999 8。结果表明，梓醇在0.429～2.145 μg呈良好的线性关系。

2.7 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按2.1色谱条件进行测定，记录色谱图。见图2。从色谱图中可以看出，本测定条件的专属性强，阴性样品对梓醇的含量测定无干扰。

2.8 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液10 μL，按2.1项下色谱条件连续进样5次，记录峰面积，计算RSD为1.25%，表明本方法精密度良好。

2.9 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液(批号：20141103)，分别在制备后0、2、4、6、8、10、12、24 h进样测定，测定梓醇的峰面积RSD值为1.23%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.10 重复性试验

取同一批号供试品(批号：20141103)按2.4方法平行制备5份供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样，测定梓醇的峰面积，计算RSD为1.3%，表明本方法重复性良好。同时测得梓醇的平均质量分数为4.25 mg·g-1。

2.11 加样回收率试验

取已知含量的同一供试品(批号：20141103)9份，研细，混匀，分别取细粉1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，每份分别精密加入对照品稀释液，浓度从低、中、高分别测定梓醇的含量，余下按2.4方法操作，分别吸取供试品溶液各10 μL，按2.1色谱条件测定梓醇的含量，计算加样回收率，结果见表1。

注：A.梓醇对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.梓醇。图2 虚燥更平浓缩丸及对照品HPLC图

表1 梓醇加样回收试验

2.12 样品测定

取虚燥更平浓缩丸样品5批，分别按2.4项下制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，每个批号平行3份，每次进样2次。结果见表2。

表2 虚造更平浓缩丸5批的检测结果

3 讨论

本实验对虚燥更平浓缩丸的样品处理方法进行研究，分别采用甲醇回流提取、甲醇超声波提取等方法进行提取，发现提取效果基本一致。甲醇超声提取法的提取时间短，提取效率稍高，故选择了甲醇超声提取法。而续滤液蒸干转溶的过程中发现，流动相溶解的效果要优于甲醇和水，故最终采用上述方法进行供试品制备。

梓醇是一种环烯醚萜葡萄糖苷类化合物，通过全波长扫描法我们发现，其最大吸收波长为210 nm，故选其为本法的检测波长[8-9]。

本研究按照测定方法学研究的要求，对虚燥更平浓缩丸中梓醇含量测定过程中的色谱条件、线性关系、专属性、精密度、稳定性、重复性、加样回收率等因素条件分别进行考察。结果表明，本方法操作方便、线性关系良好、专属性强、稳定性好、重复性好、加样回收率符合要求，可作为该制剂的含量测定方法。该方法的确立，可为虚燥更平浓缩丸的质量控制和质量标准提供有力依据，也为其深入研究及新药研发提供参考。

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[3] 闫润虎，刘志诚.女性更年期综合征的中现代医学认识[J].现代中西医结合杂志，2003，12(13)：14421.

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RP-HPLCDeterminationofCatalpolinXuzaoGengpingConcentratedPill

ZHAOLi1，2，JIANGLin2，LIXiaoJin1，2*

(1.TraditionalChineseMedicineCollegeofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China；2.XinjiangInstituteofChineseMateriaMedicaandEthicalMateriaMedica，Urumqi830002，China)

Objective：To establish a method for quality control of Xuzao Gengping concentrated pill.Methods：Catalpol was determined by using RP-HPLC with waters column of Sepax HP-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution as mobile phase，flow rate at 1.0 mL·min-1，detection wavelength 210 nm and column temperature at 30 ℃.Results：Catalpol presented a good linear relationship at the range of 0.042 9～0.214 5 mg·mL-1，According to join catalpa alcohol concentration high，medium and low respectively measured sample average and recovery was：100.41%，99.99%，100.08%，the RSD values corresponding to：0.60%，0.72%，0.47%.Conclusion：The established method is simple，accurate，high sensitivity，good reproducible，and is suitable for effective determination of Xuzao Gengping concentrated pill.

Xuzao Gengping concentrated pill；catalpol；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.026

2015-09-06)

“十二五”自治区科技重大专项(201130105)；海南省引进集成应用专项YJJC20120008

*

李晓瑾，硕士生导师，研究员，研究方向：中药资源；Tel：(0991)2665614，E-mail：xjlxj@126.com