正交试验法优选鲜切太白黄精酒蒸炮制工艺△

孙静，宋艺君，王昌利，张祺嘉钰，张欣，张小飞，苏卓

(陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046)

·中药工业·

正交试验法优选鲜切太白黄精酒蒸炮制工艺△

孙静，宋艺君*，王昌利，张祺嘉钰，张欣，张小飞，苏卓

(陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046)

目的：优选鲜切太白黄精的最佳酒蒸工艺。方法：以黄精多糖、水浸出物、醇浸出物和外观性状为指标，采用正交试验法考察蒸制时间、加酒量、润制时间、焖制时间4个因素，优选鲜切太白黄精炮制工艺。结果：鲜切太白黄精最佳酒蒸工艺为取黄精，加30%黄酒，润制6 h，蒸制14 h，焖制6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。结论：优选得到的鲜切太白黄精酒蒸炮制工艺稳定，可为其产地加工炮制一体化技术提供试验依据。

太白黄精；多糖；正交试验

黄精为百合科植物滇黄精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.、黄精PolygonatumsibiricumRed.或多花黄精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”“鸡头黄精”“姜形黄精”。黄精具补气养阴、健脾、润肺、益肾的功能[1]，主要含有多糖、甾体皂苷、蒽醌、氨基酸等成分。生黄精具有麻味，刺人咽喉，蒸后补脾、润肺、益肾的功能增强，并可除去麻味，同时外观颜色也由淡黄色或黄棕色变为棕褐色至黑色。黄精酒制可以助其药势，使其滋而不腻，更好发挥补益作用，故临床上多选用酒黄精。

传统酒黄精是采用黄精干燥根茎作为原料来炮制，本课题研究黄精产地加工炮制一体化技术，故采用新鲜黄精直接切片后酒蒸。本研究在前期预实验和文献查阅的基础上，采用L9(34)正交试验，考察蒸制时间、加酒量、润制时间、焖制时间4个因素，优选新鲜黄精的最佳酒蒸工艺，为黄精产地加工炮制一体化技术提供试验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

U-3010紫外可见分光光度仪(日本日立公司)；Sartorius 电子天平(1/10 万，德国)；ST-803型切片机(瑞安市赛特机电有限公司)；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DHG-9140电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 试药

鸡头黄精药材采自陕西太白山，经陕西中医药大学药学院王继涛教授鉴定为百合科植物黄精PolygonatumsibiricumRed.的新鲜根茎。新鲜黄精除去须根，抢水洗，稍晾，切厚片，酒蒸。

葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110833-200904)；黄酒(浙江绍兴县第三酒厂，批号20141202)；硫酸、0.2%蒽酮-硫酸试液、乙醇等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄精多糖的测定

2.1.1 对照品溶液的制备 取经105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含无水葡萄糖0.33 mg)。

2.1.2 供试品溶液的制备 取60 ℃干燥至恒重的本品细粉约0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过。残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过。残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10 mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取1 mL置10 mL具塞干燥试管中，照按2.1.3项下方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg)，计算即得。

2.1.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至2.0 mL，摇匀。在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，摇匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在582 nm波长处测定吸光度。以浓度(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标作图，得回归方程：Y=7.518 1X+0.163 3，r=0.999 5。线性范围为0.016 2～0.195 0 mg。

2.1.4 精密度试验 取同一供试品溶液，按2.1.3项下方法显色后测定，重复测定6次，记录吸光度。结果吸光度RSD=0.04%，表明本方法精密度良好。

2.1.5 重复性试验 取同一样品6份，每份0.25 g，精密称定，按2.1.2项下方法制成供试品溶液，每份吸取1 mL，按2.1.3项下方法显色后测定，记录吸光度。结果RSD=2.10%，表明本方法重复性良好。

2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按2.1.3项下方法显色后，分别在0、10、20、30、40 min时测定吸光度。结果RSD=0.48%，表明供试品溶液在40 min内基本稳定。

2.1.7 加样回收率试验 取已知黄精多糖含量的样品6份，每份0.25 g，精密称定，分别加入一定量葡萄糖对照品溶液，按照2.1.2项下方法制备并测定，计算回收率为98.69%，RSD=1.03%，表明本法回收率良好。结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.2 水溶性浸出物测定

取供试品约2 g，精密称定，置250 mL锥形瓶中，精密加水100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。

2.3 醇溶性浸出物测定

取供试品约2 g，精密称定，置250 mL的锥形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.4 外观性状评分标准

参照2015版《中华人民共和国药典》一部黄精性状项下规定，确定评分。黑色，计1.0分；棕褐色，计0.8分；棕色，计0.5分。嚼之黏性足，微有酒香气，计1.0分；嚼之有黏性，酒香气若有若无，计0.8分；嚼之无黏性，无酒香气，计0.5分。味甜、无口舌麻木感，计1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，计0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，计0.5分。

2.5 酒蒸太白黄精正交试验

在单因素考察和文献查阅的基础上，采用L9(34)正交试验考察蒸制时间(A)、加酒量(B)、润制时间(C)、焖制时间(D)4个因素，每个因素3个水平，以饮片外观性状、多糖、浸出物的综合评分为评价指标，优选太白黄精酒蒸工艺。因素水平见表2。

表2 因素水平表

综合评分标准：为客观反映酒蒸黄精工艺中各因素对黄精质量的影响，本试验将外观性状及黄精功能相关成分(黄精多糖)以及浸出物含量作为评价指标，采用综合评分法评定。因黄精多糖是黄精的主要有效成分，且为2015版《中华人民共和国药典》一部规定的黄精的指标成分，又因外观性状、浸出物含量也对黄精的质量评价具有重要意义，因而暂定综合评分=(外观性状评分/最高外观性状评分)×20+(黄精多糖含量/黄精多糖最高含量)×50+(水浸出物含量/水浸出物最高含量)×15+(醇浸出物含量/醇浸出物最高含量)×15。结果分别见表3和表4。

由极差R值分析可知，各因素作用主次顺序为A>D>B>C，蒸制时间影响最大，焖制时间次之，其次是加酒量，最后是润制时间。最佳工艺为A2B3C1D2。方差分析结果显示，P值均小于0.01，4个因素均为主要影响因素。因而初步认为最佳炮制工艺：取黄精，加30%黄酒润6 h，蒸10 h，焖6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。

表3 正交试验设计表及结果(n=2)

表4 方差分析表

注：F0.01(2，9)=8.02。

2.6 验证试验

按照上述最佳的炮制工艺，取黄精10 kg，平行制备3份黄精样品。取样测定蒸制品中黄精多糖的含量、浸出物含量，并对外观性状进行评分。见表5。

表5 酒黄精最佳炮制工艺验证试验

结果表明，确定的工艺操作简便，合理可控。

3 讨论

黄精由于含有大量的粘液质和糖分，在炮制过程中，除了一般的洁净处理外，要防止用水浸泡，以防有效成分流失。因此，药材的软化以焖润为宜。不管采用何种辅料炮制，都必须使辅料全部被吸尽，内无干心，以便最大限度地发挥药物的治疗作用[2]。

外观质量评价是传统意义上的中药饮片质量标准，同时是目前单一化学成分和化学部位不能替代的评价标准[3]，因此将其作为正交试验的指标之一。黄精多糖是黄精的主要药效成分，具有延缓衰老、降血糖、降血脂、调节免疫、防止动脉粥样硬化、抗肿瘤等药理作用[4-8]，故将其作为评价指标之一。

本试验仅从外观性状、化学成分和浸出物的角度优选太白黄精酒蒸炮制工艺，在以后的研究中，还应该采用联合化学成分、指纹图谱、药效等多指标来综合评价炮制工艺，以便更好地适用于临床。

[1] 国家药典委员会.《中华人民共和国药典》：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 万凤英，顾元贵.对中药黄精炮制历史沿革的探讨[J].时珍国医国药，1996，7(1)：46-48.

[3] 李群，王瑾，张会敏.正交试验法优选桑白皮蜜炙工艺[J].中草药，2013，44(3)：286-290.

[4] 贺海花，杨云，王爽，等.不同蒸制方法和时间对黄精中多糖含量的影响[J].中药材，2009，32(6)：861-862.

[5] 张莹，钟凌云.炮制对黄精化学成分和药理作用影响研究[J].江西中医学院学报，2010，22(4)：77-79.

[6] 徐兵兵，于勇杰，吴帆，等.黄精多糖研究综述[J].中国野生植物资源，2015，34(4)：38-46.

[7] 李丽，田丽娜，任振兴，等.黄精多糖的结构分析及功能活性研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2015，21(15)：231-234.

[8] 时晓娟，李朋收，魏颖，等.黄精多糖提取工艺及药理作用研究进展[J].中医药导报，2015，21(23)：103-105.

OptimizationofWine-steamingProcessingTechnologyofFreshCutTaiBaiPolygonatiRhizomabyOrthogonalDesign

SUNJing，SONGYijun*，WANGChangli，ZHANGQijiayu，ZHANGXin，ZHANGXiaofei，SUZhuo

(ShaanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang712046，China)

Objective：To optimize the best wine-steaming processing for Tai Bai Polygonati Rhizoma.Methods：The orthogonal test was used to investigate the effects of steaming time，wine volume，infiltration time，stuffy time on the polysaccharide，water extract，alcohol extract and appearance，the process was optimized accordingly.Results：The optimal wine-steaming process for Polygonati Rhizoma was as follows：Polygonati Rhizoma was subjected to covered moistening 6 h with 30% yellow wine，steaming 14 h，stewing 6 h，and then taken out，cut into 4 mm thick slices，and dried.Conclusion：The optimized wine-steaming process of Polygonati Rhizoma is stable，it can provide the experimental basis for its origin processing and integration technology.

Tai Bai Polygonati Rhizoma；polysaccharide；orthogonal test

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.022

2015-07-24)

陕西省教育厅重点实验室科研计划项目(No.14JS023)

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宋艺君，讲师，研究方向：中药饮片规范化研究；E-mail：songyijun200506@126.com