不同工艺制备米党参抗应激反应及质量对比研究△

罗春丽，陈海昕，王文娟，赵致*

(1.贵州大学，贵州 贵阳 550025；2.贵州省中药材繁育与种植工程实验室，贵州 贵阳 550025)

·中药工业·

不同工艺制备米党参抗应激反应及质量对比研究△

罗春丽1，2，陈海昕1，王文娟1，赵致1，2*

(1.贵州大学，贵州 贵阳 550025；2.贵州省中药材繁育与种植工程实验室，贵州 贵阳 550025)

目的：通过以米作为辅料研究不同工艺制备米党参，对比不同炮制品抗应激作用及指标性成分含量差异，为探究米制党参合理工艺提供实验依据。方法：以鲜党参为原料，粳米为辅料，通过不同工艺制备党参炮制品，以抗应激作用为参考指标，同时结合品质分析结果进行比较研究。结果：以米汤炙、60 ℃烘干法炮制所得米制党参在抗应激作用及指标性成分含量方面均优于传统米炒党参。结论：米制党参可考虑以米汤为辅料，采用炙法制备，其炮制工艺、炮制原理及辅料用量有待进一步研究确定。

党参；粳米；指标性成分；抗应激反应

党参为桔梗科草本植物党参Codonopisispilosula(Franch.)Nannf、素花党参CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen 或川党参CodonopisistangshenOliv.的干燥根，具有补中益气、健脾益肺之功能。主治脾肺虚弱、气短心悸、食少便溏、虚喘咳嗽、内热消渴等症。党参主产于山西、甘肃、陕西、四川等省。党参中主要含有萜类、甾醇类、酚酸类、黄酮类等物质，具有免疫调节、细胞增殖及降脂等作用[1-3]。米制党参为《中华人民共和国药典》2010版所收载[3]，其气变清香，能增强和胃、健脾止泻作用，多用于脾胃虚弱、食少、便溏等[4]；党参多糖能提高小鼠体力及运动耐力，提高小鼠抗运动性疲劳能力的作用，党参多糖能降低实验小鼠运动疲劳后血清中乳酸的含量[5]；党参多糖对羟基自由基也存在清除作用[6-9]。查阅文献，相关米炒党参炮制工艺方面的研究相对较少，采用米汤炙方法未见报道。笔者通过以米作为炮制辅料，重点对比采用固体辅料米炒与液体辅料米汤炙在抗应激作用及指标性成分含量上的差异，以期确定更加合理的炮制方法及工艺，提升米制党参质量标准，为进一步的开发和利用党参提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1200型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；101-4型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司)；TP-213型电子天平(丹佛仪器北京有限公司)；KQP-800KDE超声波清洗机(昆山市超声波仪器有限公司)。

1.2 试药

葡萄糖对照品、党参炔苷对照品(中食品药品检定研究院，批号分别为110833-200503，111732-201206)；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

本实验所用党参采自贵州省毕节地区威宁县海拉乡党参栽培基地，经贵州大学生科院赵财副教授鉴定为桔梗科植物素花党参CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen；实验动物购自重庆市，为SPF级KM小鼠，合格证号：SCXK(渝)-2012-0006。

2 方法

2.1 党参炮制品的制备

党参片：将鲜品先晾晒两天，然后边揉搓(防止皮肉分离)边烘干，测定水分，达到中华人民共和国药典要求后，切片密封，常温保存。

米炒党参：取1000 g党参片，照《中华人民共和国药典》2010版一部(附录Ⅱ D)用米拌炒至表面深黄色，取出，筛去米，放凉。每1000 g党参片用米200 g。

米炙党参：1)取1000 g党参片，用适量米汤拌匀，闷润至药透汁尽，文火炒至表面颜色加深，取出，放凉；2)取1000 g党参片，用适量米汤拌匀，闷润至药透汁尽，60 ℃烘干，取出，放凉。米汤制备为1 kg粳米加2 kg水，熬至米无白心，过滤即得。每1000 g党参片用米200 g。

清炒党参：取1000 g党参片，照《中华人民共和国药典》2010版一部(附录Ⅱ D)文火炒至表面深黄色，取出，放凉。

2.2 党参不同炮制品质量检测

2.2.1水分测定 取上述处理制党参饮片分别粉碎，过二号筛，按《中华人民共和国药典》2010版一部水分测定法项下烘干法(附录Ⅸ H第一法)测定。

2.2.2灰分测定 按《中华人民共和国药典》2010版一部灰分测定法项下总灰分测定法(附录Ⅸ K)测定。

2.2.3 浸出物测定 测定按《中华人民共和国药典》2010版一部(附录Ⅹ A)项下热浸法测定，用45%乙醇作为溶剂。

2.2.4 党参多糖含量测定 参阅王桂红等[10]党参多糖含量测定方法，采用硫酸-苯酚法测定党参不同炮制品中多糖含量。

对照品溶液的制备：取105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水溶解并定量制成质量浓度为90 μg·mL-1的溶液，即得。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置10 mL具塞试管中，加水至1.0 mL，精密加5%苯酚溶液1 mL，摇匀，再精密加硫酸5 mL，摇匀，置沸水浴中加热20 min，取出，放入冰浴中冷却5 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在488 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=0.010 1X-0.008 2(r=0.998 2)。

供试品溶液的制备：供试品50 ℃烘至恒重后，取样品粉末过三号筛约0.3 g，精密称定，加水200 mL，加热回流提取2 h。提取液转移至250 mL量瓶中，用适量水分次洗涤容器，洗液转移至同一量瓶中，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过。精密吸取续滤液5 mL，置50 mL离心管中，精密加入无水乙醇25 mL，摇匀，冷藏1 h，取出，离心(4 000 r·min-1)20 min，弃去上清液，必要时滤过。沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8 mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解并转移至25 mL量瓶中，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加5%苯酚溶液1 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算即得。

2.2.5 HPLC法测定党参炔苷含量 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为依利特 Hypersil-ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.01%磷酸水溶液(30∶70)；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为268 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。理论塔板数以党参炔苷峰计算应不低于6000；党参炔苷峰与其他杂质峰分离度大于1.5。

供试品制备：取样品粉末约1.5 g，精密称定，每个样品设3个重复，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声提取(功率为100 W，频率为50 HZ)60 min，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm有机微孔滤膜过滤，即得。

对照品溶液制备：取党参炔苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成质量浓度为1 mg·mL-1的党参炔苷溶液，即得。

2.3 党参不同炮制品抗应激作用对比

2.3.1 抗疲劳实验 每组雌雄小鼠各6只，共6组。按剂量设计连续给样品15 d，于末次灌胃后30 min将小鼠放入水中游泳，水深30 cm，水温(25±0.5)℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间。

2.3.2 耐缺氧实验 每组雌雄小鼠各6只，共6组。按剂量设计连续给样品15 d，于末次灌胃后30 min将各鼠分别放入含有20 g碱石灰的250 mL磨口广口瓶中(加碱石灰用于吸收CO2，避免CO2中毒影响实验结果)，瓶盖上涂抹适当凡士林密封，记录小鼠的存活时间。

2.4 数据统计方法

采用Excel 2003和DPS 2012统计软件进行完全随机单因素试验统计分析。

3 结果

3.1 党参不同炮制品水分、灰分及浸出物测定结果

党参不同炮制品水分、灰分及浸出物测定结果见表1。

表1 酸不溶性灰分、水分含量、浸出物数据处理结果 (%)

根据《中华人民共和国药典》2010版要求，灰分为不得过5.0%，水分不得过16.0%，浸出物不得少于55.0%。由表1可知水分、灰分及浸出物含量全部符合中华人民共和国药典要求，差异无统计学意义。

3.2 党参不同炮制品党参多糖含量测定结果

按2.2.4项下方法测定党参不同炮制品中党参多糖含量：米汤炙，60 ℃烘干，多糖含量为24.2%；米汤炙，炒干，多糖含量为16.7%；米炒，炒干，多糖含量为16.3%；清炒党参多糖含量为16.0%；党参片多糖含量为17.2%。其中1号组米汤炙烘干法炮制下的多糖含量最高，其次是5号党参片的多糖含量较高。

3.3 HPLC法测定党参不同炮制品党参炔苷含量结果

按方法项下2.2.5项下方法测定党参不同炮制品党参炔苷含量：米汤炙，60 ℃烘干，炔苷质量分数为1.41 mg·g-1；米汤炙，炒干，炔苷质量分数为0.98 mg·g-1；米炒，炒干，炔苷质量分数为1.23 mg·g-1；清炒党参炔苷质量分数为0.91 mg·g-1；党参片炔苷质量分数为1.00 mg·g-1。

由含量测定结果及图1可知，米汤炙，烘干法炮制下的党参炔苷含量最高，其次是3号米炒法较高。结果说明1号组米汤炙烘干法炮制方法下党参炔苷含量最高，若以党参炔苷作为党参指标性成分进行含量检测，则此种炮制方法在党参加工炮制中可借鉴采用。

综合多糖及党参炔苷含量测定结果，均得出米汤炙烘干法制备所得优于传统米炒加工方法米制党参。

3.4 党参不同炮制品抗应激作用对比

党参不同炮制方法对小鼠的抗应激实验结果见表2。

表2 小鼠耐缺氧和抗疲劳时间

注：与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与党参片组比较★★P<0.01。

数据分析处理结果显示：耐缺氧能力米汤炙烘干组、米汤炙炒干组及党参片组与空白对照组比较，差异有统计学(P<0.05)；米汤炙烘干组、米汤炙炒干组与党参片组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。抗疲劳实验米汤炙烘干组、米汤炙炒干组、米炒组、清炒组与空白对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)；米汤炙烘干组、米汤炙炒干组、米炒组与党参片组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。综合实验结果表明，米汤炙炒干炮制后的党参抗应激作用明显高于空白对照组及生党参片组，且炮制过后的党参抗应激作用优于未炮制过的党参。

注：A.米汤炙，烘干；B.米汤炙，炒干；C.米炒；D.清炒；E.生品；F.党参炔苷对照品；1.党参炔苷。图1 米制党参中党参炔苷HPLC图

3.5 综合评分法优选党参炮制方法

通过研究党参不同炮制品抗应激作用及质量对比来找出合理的炮制方法，主要考虑不同炮制品抗应激作用及炔苷、多糖含量。按其权重设定评分比例：耐缺氧30%、抗疲劳30%、炔苷含量20%、多糖含量20%。党参不同炮制方案综合评分结果见表3。

从综合评分结果可以看出，1号米汤炙烘干炮制法得分最高，其同时在耐缺氧、抗疲劳、炔苷和多糖含量4项中分别得分最高。所以通过研究党参不同炮制品抗应激作用及质量对比得出，1号米汤炙烘干法是最佳的炮制方法。

表3 党参的不同炮制方案综合评分

注：耐缺氧分数=(耐缺氧值/耐缺氧最高值)×30；抗疲劳分数=(抗疲劳值/抗疲劳最高值)×30；炔苷分数=(炔苷值/炔苷最高值)×20；多糖分数=(多糖值/多糖最高值)×20。

4 讨论

《中华人民共和国药典》2010版党参项下并无指标性成分含量测定，是否增加党参炔苷和多糖含量作为党参及米制党参的质量控制检测指标有待进一步研究完善。党参抗应激作用显示，米制党参作用强于党参片，这与前人研究结论米炒党参抗疲劳能力弱于党参片[4]结论并不一致，有待进一步研究分析。

笔者首次以米汤炙法制备党参炮制品—米党参，旨在研究同样以米作为辅料，对米的处理方式不同会对党参产生的影响。以米提取所得米汤，按炙法的方式使党参将米汤吸收进入药材组织内部后，对药材的外观性状、内在质量以及药理作用产生了积极影响。研究结果表明，所制米汤炙党参指标性成分含量明显高于传统米炒党参。

结果显示，米制后党参炔苷含量均有提高，但粳米中并不含有党参炔苷，是何原因导致含量增加，有待进一步分析研究。

[1] 王孝涛.历代中药炮制法汇典(现代部分)[M].北京：人民卫生出版社，1966.

[2] 中华人民共和国卫生部药政管理局.全国中药炮制规范[M].北京：人民卫生出版社，1988.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[4] 龚千峰.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，2006.

[5] 褚海滨，王玉芳.党参多糖对小鼠抗运动性疲劳作用的研究[J].中国现代医生,2011，49(30)：1-2.

[6] 李贵荣，杨胜圆.党参多糖的提取及其对活性氧自由基的清除作用[J].化学世界,2001，42(8):421-423.

[7] 熊元君，陈敏，李晓瑾，等.新疆党参多糖对SOD、MDA的影响[J].新疆中医药，2000,18(3):13.

[8] 汪建红，原慧，李雪红.新疆野生党参总黄酮体内抗氧化及抗疲劳作用研究[J].天然产物研究与开发，2012，24(8):1035-1039.

[9] 田源红,任永全,龙安治.党参不同炮制品中微量元素的含量测定[J].微量元素与健康研究,2001，18(2):45-50.

[10] 王桂红，张骏，周松迪，等.板桥党参多糖的含量测定[J].数理医药学杂志.2011，24(6)：709-710.

ComparativeStudyonAnti-stresseffectandQualityofRiceProcessedCodonopsisRadixwithDifferentProcessTechnology

LUOChunli1，2，CHENHaixin1，WANGWenjuan1，ZHAOZhi1，2*

(1.GuizhouUniversity，Guiyang，Guizhou550025，China；2.GuizhouLaboratoryforBreedingandPlantingEngineeringofTraditionalChineseMedicinalMaterials，Guiyang，Guizhou550025，China)

Objective：To study comparatively the anti-stress effect and quality of rice processed Codonopsis Radix with different process technology，with the aim of further development of Codonopsis Radix.Methods：With fresh root ofCodonopsispilosulaand polished round-grained rice as experimental materials，preparations of different processed products of different drying methods were carried out.The quality of the products was analyzed and evaluated with anti-stress effect as parameter.Results：The quality of Codonoptsis Radix prepared with rice soup and 60 ℃ drying is better than that with the traditional method in terms of anti-stress effect and content of indicative components.Conclusion：It is suitable to use rice soup for rice processed Codonoptsis Radix.Further study is needed for processing technology and accessory materials.

Codonopsispilosula；polished round-grained rice；the index components；anti-stress reaction

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.024

2015-01-08)

贵州省科技厅中药现代化项目(黔科合中药字[2012]5006-3号)；贵州省科技厅创新人才团队建设项目(黔科合人才团队[2010]4006)；贵州省科技厅重点实验室计划项目(黔科合计Z字[2010]4015)；贵州省药用植物繁育与种植人才基地(黔人领发[2013]15号)

*

赵致，教授，研究方向：药用植物生产理论及技术研究；E-mail：zzhao@gzu.edu.cn