不同产地白术药材中白术内酯I和II的含量测定

吴梓春　何兆锦（广东省佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药学部　佛山　528000）

不同产地白术药材中白术内酯I和II的含量测定

吴梓春何兆锦（广东省佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药学部佛山528000）

目的：探讨不同产地白术药材中白术内酯I和白术内酯II的高效液相测定方法。方法：选择浙江、安徽、甘肃、江西四个产地的白术药材，色谱柱采用Hypersil 0DS（4.6mm×250mm，2.5μm），流动相为乙腈∶水=55∶45，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长223nm。结果：白术内酯I的线性关系方程为：Y=3.546×104+0.524×104（r=0.9998），在0.5～500μg范围内线性关系良好；白术内酯II的线性关系方程为：Y=4.746×104+0.949×104（r=0.9997），在0.5～500μg范围内线性关系良好。白术内酯I的平均加样回收率为99.74%，RSD1.32%，白术内酯II平均加样回收率为99.68%，RSD为2.01%。浙江产白术药材中两种有效成分含量最高，江西产白术药材的两种有效成分含量较低。结论：高效液相色谱法测定不同产地白术中的有效成分，方法简单易操作，灵敏度高，准确性好，重复性强，可以作为白术质量控制的定量指标。

白术内酯I白术内酯II高效液相色谱 不同产地

中药白术为菊科（Composetae）苍术属（Atractylodes）植物白术（Atractylodes macrocephala Koidz）的干燥根茎［1］，多数分布于我国的浙江、安徽、甘肃、湖南以及江西等产地［2］。白术味苦、甘，性温，主要归脾胃经，功能健脾益气，燥湿利水，为补益类的补气中药材［3］。由于我国白术的产地较多，药材的质量也有一定的差异，我国各个地域的生态环境、气候等不同，导致了不同产地白术药材有效成分的含量存在差异。为了加强白术药材的质量控制，本研究以白术中白术内酯I、白术内酯II的含量作为观察指标，采用高效液相色谱法观察不同产地白术中上述两种有效成分的含量。

1　仪器与试药

1.1实验仪器：日本岛津LC-10AT型单泵高效液相色谱仪，SPD-10AVP型紫外检测器，岛津CBM色谱工作站。手提式高速万能粉碎机DFD-100、4号筛，电热恒温鼓风干燥箱，KQ-500E型超声波清洗仪，美国梅特勒电子分析天平（精密度为0.0001g），PL-80离心沉淀机。

1.2实验试药：白术药材采自浙江、安徽、甘肃、江西四个产地，药材均经专家鉴定分别为菊科（Compositae）植物白术（Atractylodes macrocephala koidz）的干燥根茎和菊科植物Atractylades macrocephalacv.Yuzhu的干燥根茎。乙腈为色谱纯，水为三蒸水，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件的选择：色谱柱采用Hypersil 0DS（4.6mm×250mm，2.5μm），流动相为乙腈∶水=55∶45，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长223nm，进样量为20μL。以白术内酯I作为参考，色谱柱的理论塔板数＞5000。

2.2对照品溶液的制备：精密称定白术内酯I对照品0.4mg，置于5ml容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度后摇匀，静置；取白术内酯II对照品0.45mg精密称定后置于5ml容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度后摇匀，静置。两种对照品溶液置于-20℃冰箱中保存，备用。

2.3供试品溶液的制备：取白术药材2.0g置于粉碎机中粉碎后过4号筛，精密称定后置于加塞锥形瓶中，加入甲醇溶液50ml后称定重量，超声处理40min。放冷后再次称定重量，甲醇溶液将减少的重量补足后以塞盖住锥形瓶，摇匀，过0.45μm微孔滤膜后，置于3000转/min的离心机中离心10min，取上清液即得供试品溶液。

2.4标准曲线的绘制：将分别溶解于甲醇溶液中的白术内酯I、白术内酯II对照品溶液稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0μg/ml的白术内酯I、II标准溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，分别进样20μL，以白术内酯I、II色谱峰面积作为纵坐标，白术内酯I、II对照品质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程以及相关系数。白术内酯I的线性关系方程为：Y= 3.546×104+0.524×104（r=0.9998），在0.5～500μg范围内线性关系良好；白术内酯II的线性关系方程为：Y=4.746×104+0.949×104（r=0.9997），在0.5～500μg范围内线性关系良好。

2.5稳定性考察：取同一批次的样品药材，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法进行操作，制备供试品溶液后精密吸取同一供试品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进样，分别在配制溶液后0、1、4、6、8、12、24h吸取20μL进样分析，按照线性关系方程计算白术内酯I、白术内酯II在供试品溶液中的稳定性，结果表明白术内酯I的RSD值为2.14%，白术内酯II的RSD值为2.01%，表明溶液在24h内较为稳定。

2.6精密度考察：将：2.5：项下配制的同一批次供试品溶液，吸取20μL，按照“2.1”项下的色谱条件重复进样5次，计算峰面积值，结果表明其RSD值为1.36%，表明该仪器的精密度良好。

2.7重现性考察：取同一白术样品粉末，精密称取5份，每份为1.245g，按照“2.3”项下的供试品溶液的制备方式进行配制，按照“2.1”项下的色谱条件进样后得到白术内酯I、白术内酯II的RSD分别为1.84%、1.76%，表明该色谱条件下测定结果的重现性良好。

2.8加样回收率试验：精密称取已知白术内酯I、白术内酯II含量的白术粉末，精密称定5份，精密加入白术内酯I、II对照品适量，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方式进行供试品溶液的配制，按照“2.1”项下的色谱条件进行色谱图的分析，计算平均加样回收率，结果见表1、表2。

表1　白术内酯I加样回收率测定结果（n=5）

表2　白术内酯II 加样回收率测定结果（n=5）

2.9不同产地白术含量测定结果：取浙江、安徽、甘肃、江西白术样品约1.0g，精密称定后按照“2.3”项下的供试品溶液制备溶液并进行处理测定，按照“2.1”项下的色谱条件进样，计算不同产地白术药材中白术内酯I、II的含量并进行比较，结果见表3。

表3　不同产地白术药材中白术内酯I、II含量测定结果

3　讨论

3.1流动相的选择：本研究中采用了乙腈：水，甲醇：水等按照不同比例流动相系统，结果显示在乙腈∶水=55∶45时色谱系统可以获得较好的峰形，同时色谱峰分离较好。因此实验中选择乙腈：水作为流动相。

3.2检测波长的选择：采用Agilent 1100DAD三维图谱进行分析得到白术内酯类化合物在223nm处有最大的吸收峰，为了在同一条件下进行检测，选择同时检测两个波长的信号［4］。

不同产地的白术内酯含量具有一定的差异［5］，在相同的测定条件下，分离得到的白术内酯I、II含量，浙江产地的白术药材中最多，江西产地的药材则偏少，因此如果要获得较多含量的白术内酯可以选择浙江产的白术中药材。

［1］赵桂芝，洪学智.白术内酯的药理学研究进展［J］.中国药房，2012，20（3）：230-231.

［2］曾志，周育妹.3个不同产地白术的挥发性化学成分比较［J］.华南师范大学学报，2012，47（5）：78-83.

［3］赵红红.三产地白术挥发油氧化分解后化学成分的变化［J］.山西大学学报，2015，38（3）：516-521.

［4］田颖.不同产地白术药材中白术内酯II和III的含量测定［J］.海峡药学，2012，24（8）：65-67.

［5］姜东京，徐志伟.浙江道地药材於术与白术的质量对比研究［J］.中华中医药学刊，2014，32（12）：2864-2866.

R284.1

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1672-8351（2016）09-0010-02