HPLC法测定复方丹七郁胶囊中丹酚酸B的含量△

刘宴林郑锦坤徐晓梅郭基燕黄义纯谭本仁（.汕头大学医学院附属粤北人民医院　韶关52026；2.韶关市食品药品检验所　韶关　52028）

HPLC法测定复方丹七郁胶囊中丹酚酸B的含量△

刘宴林1郑锦坤1徐晓梅1郭基燕2黄义纯2谭本仁1（1.汕头大学医学院附属粤北人民医院韶关512026；2.韶关市食品药品检验所韶关512028）

目的：建立高效液相法测定复方丹七郁胶囊中丹酚酸B含量的方法。方法：采用Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）为流动相，波长为286nm；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；进样量为10μL。结果：丹酚酸B 在6.25～249.87μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，平均回收率100.51%（RSD为0.3%，n=6）。结论：该法快速，简便易行，结果可靠，专属性强，可作为复方丹七郁胶囊的质量控制指标。

复方丹七郁胶囊 丹酚酸B高效液相色谱法

复方丹七郁胶囊是基于传统中医理论研制的中药复方制剂，具有补肝肾、活血化瘀、降血脂、抗动脉粥样硬化的功效。该方由丹参、三七、山楂、川芎等8种中药组成，对高脂血症、脑动脉粥样硬化症、冠心病等有良好的疗效。方中丹参为君药，主要活性成分为丹参酮ⅡA、丹酚酸B等。为有效控制产品质量，本研究采用高效液相色谱法，建立了处方中丹酚酸B的含量测定方法，可用于复方丹七郁胶囊的质量控制。

1　仪器与试药

1.1仪器：AG-135电子天平（瑞士METTLER T0LED0公司）；LC-2010C高效液相色谱仪（岛津公司）；HT-300BQ数控超声波清洗器（济宁恒通超声电子设备有限公司）。

1.2试剂：丹酚酸B对照品，中国食品药品检定研究院，批号：111562-201313，含量97.0%；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

1.3样品：复方丹七郁胶囊，批号为：20140201、20140301、20140401。

2　方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱：Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）；检测波长：286nm；流速：1mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10μL。

2.2供试品溶液的制备：取复方丹七郁胶囊内容物约1g，精密称定，置50mL容量瓶中，加入70%甲醇适量，超声处理30min（功率350W，频率50kHz），取出，放冷，定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.3阴性对照溶液的制备：按质量标准中处方工艺制成缺丹参的阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，依法测定。结果表明，复方丹七郁胶囊中其他成分对丹酚酸B的测定无干扰，见图1。

2.4对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品12.88mg至50mL容量瓶中，加70%甲醇适量，超声处理30min，取出，放冷，定容至刻度，制成浓度为0.26mg·mL-1的对照品溶液，备用。

2.5线性关系考察：精密称取丹酚酸B对照品溶液适量加70%甲醇稀释成浓度为6.25μg·mL-1；12.49μg·mL-1；62.47μg·mL-1；124.94μg·mL-1；249.87μg·mL-1的对照品溶液，在上述色谱条件下试验，测定各浓度的峰面积，以丹酚酸B峰面积积分值为纵坐标Y，进样量为横坐标X（μg），绘制标准曲线，得丹酚酸B回归方程：Y=3550.4X-2350.4，r=0.9992。结果表明丹酚酸B在6.25～12.49μg·mL-1范围内与其峰面积线性关系良好。

2.6精密度试验：分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液10μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定含量。丹酚酸B的RSD%为0.07%。结果表明仪器精密度良好。

2.7稳定性试验：取复方丹七郁胶囊约1.0g（批号：20140201），精密称定，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，于室温下分别放置0、2、4、8、12、24h后进样，记录丹酚酸B的峰面积，结果丹酚酸B含量的RSD为0.8%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8重复性试验：取复方丹七郁胶囊约1.0g（批号：20140201），精确称取6份，依“2.2”项下方法制备供试品溶液及测定。丹酚酸B的平均含量为9.58mg·g-1，RSD为0.24%。表明本方法重复性良好。

2.9加样回收率试验：称取6份同一批样品（批号：20140201），约0.5g，精密称定，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液，按“2.2”项下方法制备供试液及测定，计算回收率。测得丹酚酸B的平均回收率为100.51%，RSD为0.31%。结果见表1。

表1　丹酚酸B的回收率测定（n=6）

2.10含量测定：取3批样品，按“2.2”项下制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表2。

表2　复方丹七郁胶囊中丹酚酸B的含量（n=3）

3　讨论

中药丹参是唇形科植物丹参（Salviae MiltiorrhizaBunge）的干燥根及根茎，作为活血化瘀药，被广泛用于治疗冠心病、心绞痛等心血管疾病。丹参的化学成分主要为脂溶性二萜醌类和水溶性酚酸类，其中水溶性酚酸类中以丹参素和原儿茶醛含量较高，活性较强［1］。近年研究发现作为丹参素衍生物的丹参多酚酸盐是丹参最主要的水溶性有效成分，具有抗血栓，改善血液循环，减轻白细胞损伤、抗氧化、减少细胞凋亡等作用［2］。丹参作为方中君药，丹酚酸B作为其主要药理成分故选为含量测定的指标。

本次研究参照了《中华人民共和国药典》（2015年版）［3］，考察了不同浓度甲醇对复方丹七郁胶囊中丹酚酸B的提取率。结果表明，75%甲醇提取率高，杂质峰少，重现性好，故本试验采用75%甲醇为提取溶剂。通过紫外扫描显示丹酚酸B在286mm波长处有最大吸收，同时参考相关文献［4］及反复实验选取甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）作为流动相可使得色谱峰分离度大于1.5，峰型良好，无杂质干扰峰，保留时间较短。

采用本研究建立的HPLC含量测定方法，对复方丹七郁胶囊进行含量测定。结果表明，本方法简便可行，重现性良好，适用于复方丹七郁胶囊的质量控制及质量标准的制定。

［1］吴燕燕，孙煜，王易.丹参多酚酸盐活血化瘀作用的多元化药理作用［J］.中国现代应用药学，2010，27（12）：1072-1076.

［2］戈升荣，俞一心，谢更新.丹酚酸的药理作用研究进展［J］.中药材，2002，9（25）：683-686.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

［4］杨道炬，张怀，刘树强，等.HPLC法测定消脂胶囊中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量 ［J］.中药新药与临床药理，2014，25（6）：737-740.

△项目名称：复方丹七郁胶囊工艺制备和质量标准研究，项目编号：20161245。

Determination of Compound DanQiYu Capsule of Salvianolic acid B by HPLC

Liu Yanlin1Zheng Jinkun1Xu Xiaomei1Guo Jiyan2Huang Yichun2Tan Benren1（1.The Affiliated YueBei People’s Hospital of Shantou University Medical College，Shaoguan，512026；2.shaoguan institue for food and drug control，shaoguan，512028）

0bjective：To develop a high performance liquid chromatography（HPLC）method for simultaneous determination of salvianolic acid B in Compound DanQiYu jiangzhi Capsule.Methods：Samples were analyzed on Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）. Salvianolic acid B was detected with a mobile phase of methanol-acetonitrile-methanoic acid-water（10：30：1：59）for isocratic elution and a detection wavelength of 286 nm.The flow rate was 1.0mL·min-1，temperature of column was set at 30℃ and injection volume was 10μL.Results：Salvianolic acid B showed good linearity in the range of 6.25～249.87μg·mL-1，and the recovery was 100.51%（RSD= 0.3%，n=6）.Conclusion：The established method is rapid，practical and accurate，and is suitable for the quanlity control of Fufang DanQiYu Capsule.

Fufang DanQiYu Capsule Salvianolic acid B HPLC

R927.2

A

1672-8351（2016）09-0002-02