小儿热速清口服液中葛根素的含量测定

顾菲菲　徐小梅（安徽中医药大学第一附属医院　合肥　230031）

小儿热速清口服液中葛根素的含量测定

顾菲菲徐小梅（安徽中医药大学第一附属医院合肥230031）

目的：建立小儿热速清口服液中葛根素含量测定方法。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（75∶25）为流动相，检测波长为250nm，流速为1.0mL/min。结果：葛根素在3.446μg/mL～17.228μg/mL范围内线性关系良好，相关系数为r=0.9999（n＝7），平均回收率为99.6%（RSD＝0.26%，n＝9）。结论：该方法准确可靠，重现性好。可作为该制剂的葛根质量控制方法。

小儿热速清口服液 葛根素 高效液相色谱法 含量测定

小儿热速清口服液具有清热解毒、泻火利咽的功效，用于小儿风热感冒、发热头痛、咽喉红肿等症。其主要有柴胡、黄芩、葛根、金银花、水牛角、连翘等多味药材加工制成，其中，葛根主要有解表退热、生津、透疹、升阳止泻等功效［1］。目前。文献报道了用高效液相色谱法测定小儿热速清口服液中黄芩苷的含量和《中国药典》2010年版一部中黄芩苷的含量测定［2］，缺少测定葛根中葛根素的含量方法。本文采用高效液相色谱法测定葛根素的含量，方法简便，重复性好，结果满意。

1　仪器与试药

1.1仪器：戴安U-3000高效液相色谱仪（DAD检测器）；Fisherbrand FB15065超声波清洗器；XPE-205电子分析天平（梅特勒-托利多）

1.2试药及试剂：葛根素对照品（中国药品生物制品检定院；批号：110752-201313；含量为95.5%）；小儿热速清口服液（市售品批号：150106，150526，150806）；甲醇（色谱纯Fisher Scientific）；乙醇（分析纯，上海振兴化工一厂）；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1最佳检测波长的选择［3］、［4］：参考《中国药典》2015年版葛根素的含量测定方法以及文献，选择250nm作为本品的检测波长。

2.2色谱条件［3］：AgilengtC18柱（0.5μm，250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-水（25∶75）；检测波长为250nm；柱温为30℃；流速为1.0mL/min；进样量为5μL；理论塔板数按葛根素峰计算应不低于6000。见图1：

2.3样品溶液的制备

2.3.1对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品18.04mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（344.564μg/mL）。精密量取3mL置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品使用液（10.337μg/mL）。

2.3.2标准溶液的制备精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液作为供试品溶液。

2.4线性关系考察：精密量取对照品储备液1mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、5mL分别置100mL量瓶中，加稀释至刻度，摇匀，滤过。吸取5μL注入液相色谱仪，进行检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。并求得线性回归方程：A= 0.29711C+0.04467，相关系数r=0.9999。结果表明浓度在3.446μg/mL～17.228μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。见表1：

表1　线性关系考察结果

2.5重复性试验：取批号150106的样品，精密量取2mL置20mL量瓶中，同供试品溶液的制备方法处理，滤过。取续滤液作为供试品溶液。按2.2色谱条件连续进样6次，测定葛根素峰面积A。重复性试验结果见表2。表明重复性良好。

表2　重复性试验结果

2.6稳定性试验：取葛根素对照品使用液（8.6141μg/mL），于室温下放置0、1、2、4、8h后进样测定，按2.2色谱条件测定葛根素峰面积A，结果见表3，结果表明葛根素对照品溶液在8h内较稳定。

表3　稳定性试验结果

2.7加样回收率试验：取批号150106的样品，取9份，分别置9 个100mL容量瓶中，分别精密加入3个梯度量的对照品，再精密加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。照含量测定项下方法测定上述9份供试品溶液的葛根素含量，考察加样回收率。结果：平均回收率为99.6%，RSD为0.26%（n=9），表明本法测定葛根素的含量准确性较高，结果见表4。

表4　加样回收率试验结果

2.8样品含量测定：取本品，精密量取2mL置20mL量瓶中，精密加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。取续滤液作为供试品溶液。按“2.2”项下色谱条件测定葛根素峰面积A，计算样品中葛根素的含量，结果见表5。

表5　样品含量测定结果

3　讨论

3.1通过试验，确定了小儿热速清口服液中葛根素的含量测定方法，测定结果可靠，方法简便，为小儿热速清口服液的质量控制提供了依据。

3.2流动相为甲醇一水（25∶75）时，峰形较好，理论板数高，流动相组成简单、安全。

3.3采用HPLC法测定小儿热速清口服液中葛根素的含量，操作方法简便、准确、重现性好。不同批号的小儿热速清口服液的含量测定结果表明，葛根素的含量，精密度、稳定性、重现性、加样回收率都较好，所以，RP—HPLC法可作为药品质量分析检验方法用来有效控制小儿热速清口服液的质量。

本研究建立了HPLC法测定小儿热速清口服液含量的方法，通过大量试验得出最优的色谱条件。本法具有样品处理简单、分析周期短、重现性好等优点。可作为该制剂质量控制的方法之一。

［1］中国科技大学.中药辞海（第三卷）［M］.北京：中国医药科技出版社，1995：699-707.

［2］许海棠，黄富嵘，廖艺.高效液相色谱法测定小儿热速清口服液中绿原酸、黄芩苷和葛根素［J］.理化检验（化学分册）.2011，47 （11）：1326-1329.

［3］中国药典［S］．一部．2010：312-313.

［4］迟霁菲，张国刚.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素的含量［J］.中南药学，2006，4（4）：307-309.

Content determination of“Xiao-er resuqing”oral liquid for injection

Gu FeigeiXu Xiaomei（Anhui Provincial Hospital of traditional Chinese Medicine Hefei 230031）

0bjective：To establish a method for determine the content of“Xiao-er resuqing”oral liquid For injection.Methods：Using the method of HPLC，with eighteen alkyl silane bonded silica as filler，Methanol and water（25∶75）as mobile phase，The detection wavelength was 250nm，The flow rate was 1.0mL/min。Results：Purerin sodium in 3.446μg/mL～17.228 μg/mL and the linear range，correlation coefficient r=0.9999（n=7），the average recovery rate was 99.6%（RSD=0.26%，n=9）.Conclusion：the method is accurate and reliable，reproducible.Can be used as one of the methods for quality control of this preparation.

“Xiao-er resuqing”orl liquid Purerin HPLC Content

R286.0

A

1672-8351（2016）09-0004-02