原发性高血压患者血清白细胞介素17和白细胞介素23的表达及临床意义

朱臻 赵建荣

临床研究

原发性高血压患者血清白细胞介素17和白细胞介素23的表达及临床意义

朱臻 赵建荣

目的 检测白细胞介素17（IL-17）和白细胞介素23（IL-23）在原发性高血压（EH）患者血清中的表达水平，探讨其关系及临床意义。方法 通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测64例EH患者（EH组）不同等级间（其中男性30例、女性34例，按WHO/ISHⅣ高血压分级：1级35例，2级22例，3级7例）及治疗前后血清IL-17、IL-23水平及变化；以30名健康人（男、女各15名，均无心脑血管疾病、高脂血症、糖尿病）作对照。结果 EH组血清 IL-17及 IL-23水平分别为（390±31）pg/ml和（501±69）pg/ml，显著高于对照组（160±34）pg/ml和（193±43）pg/ml，差异具有统计学意义（P＜0.01）。2、3级高血压患者血清 IL-17及 IL-23水平较1级患者明显增高。治疗后血清IL-17及IL-23水平显著低于治疗前，但仍高于对照组（P＜0.05）。血清IL-23与IL-17的表达呈正相关关系（r2=0.5841，P＜0.01）。结论 血清IL-23和IL-17可能参与EH的发病及病理变化过程，监测血清IL-23和IL-17水平可作为判断EH病情的指标。

高血压； 白细胞介素17； 白细胞介素23

原发性高血压（EH）是临床常见病[1,2]。近年研究发现，EH是一种多基因遗传病，与机体的免疫功能紊乱相关，细胞免疫参与了其病理过程[3,4]。白细胞介素 17（IL-17）和白细胞介素 23（IL-23）是一种新的细胞因子。IL-23由巨噬细胞和树突状细胞分泌，能够激活多种免疫细胞的信号转导和转录激活因子4（STAT4），包括T细胞、NK细胞、单核细胞和树突状细胞[5,6]。IL-23A能参与机体免疫反应，通过识别外来物质，从而预防感染和疾病。IL-23可促进CD4+幼稚T细胞分化为Th17细胞，Th17细胞是一个辅助性T细胞亚群[7-9]。Th17细胞分泌的促炎细胞因子IL-17可以通过刺激其他促炎分子如 IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和趋化因子，导致炎症[10]。目前关于高血压患者血中IL-17及IL-23变化的研究报道很少。本研究动态测定了64例高血压患者及30名正常对照者的血清IL-17及IL-23的表达水平，探讨IL-17及IL-23在高血压患者血清中动态改变的临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2014年1～12月于我院就诊的64例原发性高血压患者，诊断均符合1999年2月世界卫生组织/国际高血压联盟（WHO/ISH）Ⅳ规定诊断标准。其中男性30例、女性34例，年龄（57.5±12.0）岁，按 WHO/ISH Ⅳ高血压分级，1级35例、2级22例、3级7例。另选取30名血压正常的成人为对照组，其中男性15名、女性15名，年龄（54±10）岁，均无心脑血管疾病、高脂血症、糖尿病。所有研究对象均签署知情同意书，并通过本院伦理委员会的批准。

1.2 方法

1.2.1 临床标本收集 抽取30名正常对照者及64例原发性高血压患者治疗前后外周静脉血2 ml，使用不含热原和内毒素的试管收集血液后，1000×g离心10 min，将血清和红细胞迅速小心地分离，将收集到的血清和上清液分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。

1.2.2 ELISA检测IL-23A和IL-17A的表达 将所有样品及试剂解冻，充分混匀。反应孔中加入稀释的标准品50μl、待测样品50μl和生物素标记抗体50μl，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1 h。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复洗涤3次。每孔加入80μl亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30 min；甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干；每孔加入底物A、B各50μl，轻轻振荡混匀，37℃温育10 min。避免光照；取出酶标板，迅速加入50μl终止液，立即测定结果；在450 nm波长处测定各孔的OD值。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析。所有试验均重复3次或以上，组间比较使用One-way ANOVA。IL-23和IL-17的表达与各临床参数之间的关系使用Chi-Square检验，IL-23和IL-17相关性分析采用线性回归法。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清IL-23和IL-17在原发性高血压患者血清中的表达 通过ELISA检测30名正常对照者及64例原发性高血压患者治疗前后血清IL-23和IL-17的表达，结果提示，在30名正常对照者血清中IL-23和 IL-17的水平分别为（160±34）pg/ml和（193±43）pg/ml，明显低于原发性高血压组患者的（390±31）pg/ml和（501±69）pg/ml，差异具有统计学意义（P＜0.01）（见图1A）。治疗后2周患者血清IL-23和 IL-17 水平分别为 （256±32）pg/ml和（306±67）pg/ml，较治疗前明显降低，但仍高于正常对照者，差异具有统计学意义（P=0.01）。见图1B。

2.2 不同级别的高血压患者治疗前后血清IL-23和IL-17的表达 35例1级高血压患者治疗前IL-17和 IL-23水平分别为（472.9±121.0）pg/ml和（369.2±104.0）pg/ml，治疗 2 周后 IL-17 和 IL-23水平为（321.2±101.4）pg/ml和（231.8±109.8）pg/ml，前后比较差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。29例2、3级高血压患者治疗前IL-17和IL-23水平分别为（584.5±106.2）pg/ml和（494.8±79.8）pg/ml，治疗2周后IL-17和IL-23水平分别为（412.79±74.56）pg/ml和（271.2±156.0）pg/ml，较治疗前明显下降（P＜0.05），见表 1。

表1 不同级别高血压患者治疗前后IL-17和IL-23 表达的改变（±s）

表1 不同级别高血压患者治疗前后IL-17和IL-23 表达的改变（±s）

注：与本组治疗前比较，aP＜0.01，bP＜0.05；与高血压1级组治疗后比较，cP＜0.05

组别 例数 IL-17（pg/ml） IL-23（pg/ml）高血压1级治疗前 29 584.5±106.2 494.8±79.8治疗后 2 周 412.8±74.6bc271.2±156.0bc治疗前 35 472.9±121.0 369.2±104.0治疗后 2 周 321.2±101.4a231.8±109.8a高血压2、3 级

2.3 高血压患者血清IL-23A和IL-17A表达的相关性分析 线性相关分析EH组血清IL-23和IL-17表达的相关性，结果提示，IL-23与IL-17的表达呈正相关关系（r2=0.820，P＜0.01，图 2）。

图1 血清IL-23和IL-17在EH患者血清中的表达

图2 IL-23A和IL-17A在高血压患者血清中表达的相关性分析

3 讨论

高血压是以动脉血压升高为主要临床表现，伴或不伴有多种心血管危险因素的综合征，是多种心、脑血管疾病的重要病因和危险因素，最终可导致心、脑、肾等重要脏器的功能衰竭。其发病机理非常复杂，涉及与动脉粥样硬化和血栓形成有关的多个基因和环境因素，以及它们之间的相互作用[11-13]。近年来的研究发现，细胞炎性因子在内皮细胞增殖调控中起重要作用，它们可能参与了原发性高血压病发生和发展的过程[14,15]。炎症因子与高血压的发生可能有一定关系，并且可能在疾病的发生发展过程中互为因果。炎症细胞因子可以导致糖脂代谢的紊乱，引起血管局部和系统性炎症反应，最终可能导致血脂异常及高血压的发生[16,17]。然而，其具体作用机制目前尚不明确。Th17细胞亚群是新近发现的同传统Th1和Th2细胞明显不同的一种特殊的辅助性CD4+T细胞，具有重要的免疫调节作用，可以介导炎性反应、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等的发生和发展。该细胞亚群的发现进一步深化了对CD4+T细胞免疫调节效应和自身免疫性疾病病理学机制的认识，具有重要而深远的意义[18-20]。白细胞介素17是其主要的效应因子，目前在心血管疾病的发生发展中的作用逐渐受到重视。IL-23属IL-12家族，主要参与Th17细胞扩增和维持其存活，亦在一些自身免疫性疾病发生过程中发挥着重要作用[21,22]。然而，关于IL-7及IL-23在高血压患者血清中的表达水平及其相关性目前国内外尚未见相关报道。本研究通过对IL-17、IL-23在EH患者血清中的表达水平，探讨其关系及临床意义。EH组血清IL-17及IL-23水平显著高于对照组（P＜0.01），EH不同级间血清IL-17和 IL-23水平差异均有统计学意义，治疗后血清IL-17及IL-23水平则显著低于治疗前，但仍高于对照组（P＜0.05）。血清IL-23与IL-17的表达呈正相关关系（r2=0.5841，P＜0.01）。IL-23和IL-17可能参与EH的发病及病理变化过程，监测血清IL-23和IL-17水平可作为判断EH病情的指标。

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Detection of serum levels of interleukin 17 and 23 in patients with hypertension and its clinical significance

ZHU Zhen，ZHAO Jian-rong.Cardiovascular Department of Luwan Branch of Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200020，China

Objective To study the correlation of interleukin 17（IL-17），interleukin 23（IL-23）and essential hypertension（EH）by detection of serum levels of IL-17 and IL-23 in patients with EH and to evaluate its clinical significance.Methods The serum levels of IL-17 and IL-23 in 64 patients with EH（including 30 cases of male，34 cases of female，according to the WHO/ISH Ⅳ grade of hypertension，35 cases of grade 1，22 cases of grade 2，7 cases of grade 3）and 30 health controls（including 15 cases of male，15 cases of female，who was no cardiovascular and cerebrovascular disease，hyperlipidemia，diabetes），were measured by enzyme linked immune sandwich assay（ELISA），and the relationship of the levels of IL-17 and IL-23 in patients with different degree of EH was analyzed.Results The results showed that the serum levels of IL-17 and IL-23 were（390±31）pg/ml and（501±69）pg/ml respectively in patients with EH，which were significantly higher than those in controls（160±34）pg/ml and （193±43）pg/ml（P＜0.05）.The levels of IL-17 and IL-23 were increased with increase of the degree of EH（P＜0.05）.In 2 and 3 patients with hypertension，Serum IL-17 and IL-23 levels were significantly higher in 2 and 3 grade hypertension than those of the 1 grade.After treatment，serum IL-17 and IL-23 levels were significantly decreased than those treatment before，but still higher than those in the control group（P＜0.05）.The levels of IL-17 in patients with EH were positivity correlated with IL-23 （r2=0.5841，P＜0.01）.Conclusion It is suggested that IL-17 and IL-23 may participate in the pathogens and progress of EH.

Hypertension； Interleukin 17； Interleukin 23

ZHAO Jian-rong，E-mail：lawrance@126.com

200020 上海市，上海市交通大学附属瑞金医院卢湾分院心血管内科

赵建荣，E-mail：lawrance@126.com

10．3969/j．issn．1672－5301．2016．10．012

R544.1

A

1672-5301（2016）10-0910-04

2016-02-14）