副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

赵美盈

（青海省西宁市大通县黄家寨镇兽医站，青海　西宁810000）

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

赵美盈

（青海省西宁市大通县黄家寨镇兽医站，青海西宁810000）

近些年，由副猪嗜血杆菌引起的猪多发性浆膜炎、关节炎及脑膜炎在我县时有发生，给养猪场造成极大经济损失。为此，笔者结合生产实践，对患有多发性浆膜炎、关节炎及脑膜炎的病猪进行了致病菌的分离鉴定，同时通过药敏试验进行了耐药性分析，以指导临床合理用药。

1　材料与方法

1.1病料采集

病料均来自我县多个患有多发性浆膜炎、纤维素性关节炎及脑膜炎的猪场。

1.2细菌分离培养

无菌采集患病猪只的脑组织、关节液、心血、心包液、胸腹腔积液、胸膜、肺脏和鼻腔等作为病料，分别接种在含烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的胰蛋白大豆琼脂培养基（TSA）平板，置于37℃恒温箱中培养24～48h后对菌落形态进行观察，将较为典型的菌落挑选出来进行纯培养。

1.3分离菌株革兰染色镜检

将上述纯培养菌落挑取出进行涂片和革兰氏染色，通过镜检对细菌形态特征进行观察。

1.4生化鉴定

将纯培养菌落接种在麦芽糖、果糖、核糖、葡萄糖、硝酸盐还原、接触酶、氧化酶以及脲酶等微量生化鉴定管，根据说明书操作并观察结果。

1.5药敏试验

挑取分离菌株，在含NAD鲜血琼脂平板或TSA平板均匀划线，采用无菌镊子将相关的抗菌纸片贴在平板上，放在37℃恒温箱培养24h后通过游标卡尺测量抑菌圈直径。（判断标准如下：抑菌圈直径大于15mm为高度敏感；抑菌圈直径在10～15mm为中度敏感；抑菌圈直径小于10mm为不敏感）

2　结果分析

2.1通过细菌分离培养可见无色透明、直径约1～2mm以及圆形光滑的菌落形态。

2.2将分离菌株染色镜检可见革兰氏阴性细小杆菌，具有多形态性，多呈纤细杆状，个别呈球杆状（两极染色），间有长而弯曲的丝状菌体。

2.3分离菌株生化鉴定结果为硝酸盐还原试验阳性、接触酶试验阳性、氧化酶试验阴性、脲酶试验阴性，并发酵麦芽糖、果糖、核糖、葡萄糖等碳水化合物，同副猪嗜血杆菌的生化特性相符合。

2.4药敏试验结果：将分离到的13株副猪嗜血杆菌进行药敏试验。具体结果详见表1。

表1　副猪嗜血杆菌的药敏试验结果（株）

通过表1可看出，13株副猪嗜血杆菌大多数对环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、先锋霉素V、头孢噻肟具有较高的敏感性，而对丁胺卡那霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、复方新诺明、甲氧苄胺嘧啶不敏感，呈现严重的耐药性。

3　小结与讨论

3.1对患有多发性浆膜炎、纤维素关节炎及脑膜炎的病猪进行细菌分离和鉴定，确定为副猪嗜血杆菌，总共分离出13株副猪嗜血杆菌，对这13株副猪嗜血杆菌进行药敏试验，结果表明，对环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、先锋霉素V、头孢噻肟具有较高的敏感性，特别是对先锋霉素V和头孢噻肟高度敏感；对丁胺卡那霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、复方新诺明、甲氧苄胺嘧啶有耐药性。

3.2鉴于我县不同猪场使用的抗菌药物不一，加之分离出的菌株对同一药物的敏感性亦有所差异，临床上治疗用药时最好在药敏试验下指导进行，避免盲目用药。

3.3猪场长期大量使用抗菌药，会增多耐药菌株，加重药物残留，影响食品安全。生产中防控副猪嗜血杆菌病的理想措施是疫苗免疫。采用副猪嗜血杆菌菌苗，不论猪只大小，按肌注2mL/头：仔猪于14日龄首免，35日龄二免；初产母猪于产前8～9周首免，产前4～5周二免；经产母猪于产前4～5周免疫一次；种公猪每6个月免疫一次。

从略）

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.06.012