复方止血贴溶血性的研究Δ

冯润东，罗世书，高　翔，崔亚宁

(陕西省食品药品检验所人事教育科，陕西 西安　710065)



复方止血贴溶血性的研究Δ

冯润东*，罗世书，高翔，崔亚宁

(陕西省食品药品检验所人事教育科，陕西 西安710065)

目的：研究复方止血贴中各成分的溶血作用，为临床应用提供实验依据。方法：采用家兔体外试管法，插管采集家兔颈动脉血，经处理后留兔血红细胞，并加入0.9%氯化钠溶液和蒸馏水，将各管轻轻摇匀，立即置于37 ℃的恒温箱中进行温育，分别于保温15、30、45、60、120、180 min用肉眼观察各管溶血情况，必要时用显微镜观察红细胞是否破裂，以此判断复方止血贴及其主要成分凝血酶、氨基己酸的溶血作用。结果：复方止血贴及其主要成分均未产生溶血现象，并且经过溶血率测定得出复方止血贴及其主要成分凝血酶和氨基己酸的溶血率均<5%。结论：复方止血贴及其主要成分在家兔体外试管实验中未见明显溶血作用，表明其在临床可以安全使用。

复方止血贴； 溶血； 兔

外伤引起的失血是伤残、死亡的主要原因[1]。尽管目前医院已有许多行之有效的止血产品救治受伤人员，但对入院前外伤人员的急救止血还停留在传统方式上，如包扎、固定和高体位的机械性止血等[2]。目前，市场上多采用明胶海绵等材料，这些材料在亲水性、止血效果等方面仍有待改进。为提高一线救治率、减少出血量[3]，英代生物科技有限公司研制了复方止血贴，拟申报国家一类新药，其是由凝血酶、氨基己酸2种成分组成的复方制剂，其凝血和止血作用显著，有很好的临床应用前景，但对其是否存在溶血方面的不良反应还未有研究。本研究旨在探讨复方止血贴的溶血作用，为开展进一步临床应用提供依据。

1　材料

1.1仪器

5804R型离心机(德国艾本德公司)；UV-721型紫外分光光度计(上海优尼科公司)。

1.2药品与试剂

复方止血贴(英代生物科技有限公司，批号：130309)；PVF海绵(英佳麦迪克医用材料有限公司，批号：130420)；手术吸收性止血海绵(天和药业生物科技有限公司，批号：20120602)；凝血酶(上海生化药业有限公司，批号：1110011)；氨基己酸(常州制药公司，批号：120209)。

1.3实验动物

新西兰大白兔，雌雄兼用，体质量约2 kg，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，陕动证字08-018号，实验在温度18～26 ℃中完成。

2　方法

2.1药物浓度

复方止血贴中的药物含量：贴片每片50 cm2，每片含凝血酶304 IU、氨基己酸3.04 g。假设敷片能被机体全部吸收，人体全身血液按5 L计算，则溶血实验所用浓度=每片所含药物量/5 L，故本研究中复方止血贴组药物含量为凝血酶61 IU/L、氨基已酸0.61 g/L。

2.2家兔体外溶血实验

于家兔颈动脉插管取血约40 ml置于锥形瓶中，用玻璃珠搅拌去除纤维蛋白后移取10份1 ml移入10支10 ml刻度离心管中[5]，各加入0.9%氯化钠溶液9 ml，混匀后1 500 r/min转速下离心15 min，去除上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤3次，至上清液不显红色[4-5]。将10支试管所得红细胞合并，并用0.9%氯化钠溶液稀释成体积比为2%的混悬液，备用。取洁净试管21支，分为复方止血贴组、凝血酶组、氨基己酸组各7支，3组试药分别为复方止血贴、凝血酶、氨基己酸。每组编号：1～5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。依次加入2%红细胞混悬液、试药、0.9%氯化钠溶液和蒸馏水，见表1。将各管轻轻摇匀，立即置于37 ℃的恒温箱中进行温育，分别于保温15、30、45、60、120、180 min后肉眼观察各管溶血情况，必要时用显微镜观察红细胞是否破裂，以标准判断红细胞溶血、凝集程度：溶液澄明红色(粉红色混悬液)、管底无细胞残留为全溶血；溶液澄明红色或棕色(粉红色混悬液)、管底有少量红细胞残留为部分溶血；红细胞全部下沉、上层液体无色澄明(纯乳白色不显红色混悬液)为无溶血；红细胞凝聚成块、振摇后不能分散为凝集。

表1　体外溶血试验加样表

注：“—”表示未加入试药

Note：“—” stands for no use of the reagent

3　结果

3.1实验结果

蒸馏水对照管在15 min即全部溶血，其余各管在30、60、120、180 min均无溶血现象发生。

3.2溶血率测定

将“2.2”项下7支试管的液体置入离心管中，1 500 r/min转速下离心15 min，结果显示：7号管管底无细胞残留，全管溶液澄明红色；1～6管红细胞全部下沉，上层液体为无色透明液体。取各管上清溶液在UV-721型紫外分光光度计上545 nm处，以蒸馏水为空白读取各管光密度(OD)[6-7]。溶血率计算公式如下：溶血率(%)=(ODnc-ODt)/(ODnc-ODpc)×100%(式中，ODt：试验管吸光度；ODnc：阴性对照管吸光度；ODpc：阳性对照管吸光度)，溶血率>5%表示出现了溶血[8]。结果显示，1～6号试管溶血率均<5%，表明复方止血贴均无溶血，见表2。

表2　复方止血贴各组分对溶血作用相互影响测定的OD值

4　讨论

本研究采用家兔体外溶血实验，结果表明，复方止血贴及其各组分均未发现存在溶血作用，且溶血率均<5%，验证了复方止血贴是安全可靠的，此研究为复方止血贴的临床应用和不良反应提供了实验依据。

近些年，国内外对于新型止血产品的研究正在成为新的热点[9]。复方止血贴主要成分是凝血酶和氨基己酸。凝血酶作为凝血因子Ⅱa，可不需经过血液凝固的第一、二阶段而直接作用于纤维蛋白原，使之转变为纤维蛋白，进而使血液快速凝固、填塞出血点而达到止血的目的[10-11]。凝血酶的止血速度快、疗效确切，主要用于临床各科发生的毛细血管、小血管及实质性脏器出血[12]。复方止血贴的应用对临床止血方法的创新起到了促进作用，对提高临床一线救治率具有积极意义。

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Study on Hemolysis of Compound Hemostatic StickΔ

FENG Rundong, LUO Shishu, GAO Xiang, CUI Yaning

(Dept.of Personnel and Education, Shaanxi Institute for Food and Drug Control, Shaanxi Xi’an 710065, China)

OBJECTIVE：To study the hemolytic effects of compound hemostatic stick, so as to provide experimental basis for the clinical application. METHODS: Vitro test tube method on rabbit was adopted, carotid arterial blood of rabbit was collected by intubation, after processing the rabbit red blood cells was collected to add 0.9% sodium chloride solution and distilled water. After gently shake, the tubes were put into the thermostat at temperature of 37 ℃.The hemolysis was observed respectively after 15 min, 30 min, 45 min, 60 min, 120 min and 180 min; the rupture of blood cells can be observed by microscope when necessary, and the hemolytic effects of compound hemostatic stick and its main components as thrombin and aminocaproic acid were judged. RESULTS: After study, compound hemostatic stick and its main components would not induce hemolysis phenomenon, and through the determination of hemolysis rate, compound hemostatic stick and its main components as thrombin and aminocaproic acid hemolysis rate were below 5%. CONCLUSIONS: There are no obvious hemolysis in compound hemostatic stick and its main components in rabbits in vitro test tube experiments, which shows that its role in hemolysis is safe in clinic.

Compound hemostatic stick; Hemolysis; Rabbit

陕西省科技统筹创新工程项目(No.2014FWPT-01)

R944.2

A

1672-2124(2016)08-1021-02

10.14009/j.issn.1672-2124.2016.08.004

2016-01-13)

*主管药师。研究方向：药理学。E-mail：fengdong83@163.com