吸入外源性一氧化氮对急性缺血性卒中患者血管内皮细胞功能、血小板功能及血栓形成的影响

周春亭，王朝晖



·短篇论著·

吸入外源性一氧化氮对急性缺血性卒中患者血管内皮细胞功能、血小板功能及血栓形成的影响

周春亭，王朝晖

目的探讨吸入外源性一氧化氮(NO)对急性缺血性卒中患者血管内皮细胞功能、血小板功能及血栓形成的影响。方法选择2013年9月—2015年1月武汉科技大学附属汉阳医院神经内二科收治的急性缺血性卒中患者100例，随机分为观察组和对照组，各50例。两组患者均给予常规抗血栓治疗，观察组患者在此基础上吸入外源性NO，治疗5 d后观察临床效果。比较两组患者治疗前后血管内皮细胞功能指标〔活化蛋白 C(APC)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)及血管性血友病因子(vWF)〕、血小板功能指标(血小板聚集率、P-选择素、血小板颗粒膜糖蛋白)及随访半年静脉血栓发生率。结果治疗前两组患者血浆APC、sICAM-1及vWF水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后观察组患者血浆APC水平高于对照组，血浆sICAM-1和vWF水平低于对照组(P<0.05)。治疗前两组患者血小板聚集率及血浆P-选择素和血小板颗粒膜糖蛋白水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后观察组患者血小板聚集率及血浆P-选择素和血小板颗粒膜糖蛋白水平低于对照组(P<0.05)。随访半年，观察组患者静脉血栓发生率为2%，低于对照组的10%(P<0.05)。治疗期间观察组患者未出现药物相关不良反应。结论吸入外源性NO能有效改善急性缺血性卒中患者血管内皮细胞功能及血小板功能，从而降低静脉血栓形成率，且安全性较高。

卒中；一氧化氮；内皮细胞；血小板；血栓形成

周春亭，王朝晖.吸入外源性一氧化氮对急性缺血性卒中患者血管内皮细胞功能、血小板功能及血栓形成的影响[J].实用心脑肺血管病杂志，2016，24(2)：63-65.[www.syxnf.net]

Zhou CT，Wang CH.Impact of inhalation of exogenous nitric oxide on vascular endothelial cell function，platelet function and thrombosis of patients with acute ischemic stroke[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2016，24(2)：63-65.

急性缺血性卒中又称为脑梗死，是由脑动脉闭塞导致的脑组织坏死。缺血性卒中引起患者凝血系统发生改变，出凝血失衡而最终导致患者死亡[1]。临床研究表明，血小板和内皮细胞活化是血栓形成的病理基础，因此抑制或逆转血小板和内皮细胞活化可有效抑制血栓形成。一氧化氮(NO)是近年来研究较多的生物体内一种作用广泛的信号分子，有研究表明，NO可抑制血管内皮细胞活化，进而降低动脉血压[2]。本研究采用外源性NO治疗急性缺血性卒中，并探讨其对血管内皮细胞功能、血小板功能及血栓形成的影响，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2013年9月—2015年1月武汉科技大学附属汉阳医院神经内二科收治的急性缺血性卒中患者100例，均符合2005年卫生部疾病控制司、中华医学会神经病学分会制定的“中国脑血管病防治指南”中急性缺血性卒中的诊断标准；并排除高危出血、有抗血小板和抗凝药物治疗禁忌证患者，入院前1个月内服用质子泵抑制剂、血小板膜Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)受体拮抗剂患者，血小板计数<100×109/L患者，肝、肾等重要脏器功能不全和不愿意配合研究患者。将所有患者随机分为观察组和对照组，各50例，两组患者性别、年龄及卒中类型比较，差异无统计学意义(P>0.05，见表1)，具有可比性。

表1　两组患者一般资料比较

注：a为t值

1.2治疗方法两组患者均给予常规抗血栓治疗；观察组患者在对照组基础上吸入外源性NO，采用JC502-BG95NO治疗仪 (由北京百万电子科技中心提供)，连接调试设备完毕后给予混合气体吸入，调整吸入氧浓度80%，NO浓度0.001%，1次/d，1 h/次，治疗5 d后观察临床效果。且治疗期间监测血流动力学指标，并维持其稳定。

1.3观察指标比较两组患者治疗前后血管内皮细胞功能指标、血小板功能指标，随访半年观察两组患者静脉血栓发生率。

1.3.1血管内皮细胞功能检测方法治疗前及治疗后取患者血浆标本，以3 000 r/min离心5 min，分离血浆于-80 ℃保存。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆活化蛋白 C(activated protein C，APC)、可溶性细胞间黏附分子1(soluble in-tercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)及血管性血友病因子(von willebrand factor，vWF) 水平，ELISA试剂盒由美国RD公司提供。

1.3.2血小板功能检测方法治疗前及治疗后采用免疫比浊法测定ADP诱导血小板聚集率，采用ELISA检测血浆P-选择素和血小板颗粒膜糖蛋白水平，ELISA试剂盒由美国RD公司提供。

1.3.3血栓形成检测方法采用西门子S2000彩超仪检查患者双下肢血管血栓形成情况，患者取仰卧位和俯卧位，超声探头频率50～100 MHz，分别探测髂外、股总、股浅、股深、腘、胫前、胫后、腓肠肌静脉血栓形成情况。

2　结果

2.1血管内皮细胞功能指标治疗前两组患者血浆APC、sICAM-1及vWF水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后观察组患者血浆APC水平高于对照组，血浆sICAM-1和vWF水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，见表2)。

Table2Comparisonofindexofvascularendothelialcellfunctionbetweenthetwogroupsbeforeandaftertreatment

组别例数APC(μg/L)治疗前 治疗后sICAM-1(μg/L)治疗前 治疗后vWF治疗前 治疗后对照组5010.4±5.311.2±5.680.2±12.268.5±5.884.1±10.959.2±5.8观察组5010.9±7.214.9±7.779.2±11.854.8±6.982.9±10.351.0±5.5t值0.403.101.542.210.232.38P值0.130.010.800.010.920.01

注：APC=活化蛋白 C，sICAM-1=可溶性细胞间黏附分子1，vWF=血管性血友病因子

2.2血小板功能指标治疗前两组患者血小板聚集率及血浆P-选择素和血小板颗粒膜糖蛋白水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后观察组患者血小板聚集率及血浆P-选择素和血小板颗粒膜糖蛋白水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，见表3)。

2.3静脉血栓发生率随访半年，观察组患者静脉血栓发生率为2%，低于对照组的10%，差异有统计学意义(χ2=12.21，P<0.05，见表4)。

Table3Comparisonofindexofplateletfunctionbetweenthetwogroupsbeforeandaftertreatment

组别例数血小板聚集率(%)治疗前 治疗后P-选择素(μg/L)治疗前 治疗后血小板颗粒膜糖蛋白(mg/L)治疗前 治疗后对照组5055.7±7.541.2±3.923.9±6.819.7±6.62.0±0.81.8±0.6观察组5054.7±7.633.4±4.124.4±7.018.3±6.22.1±0.71.5±0.4t值2.002.231.342.720.982.16P值0.750.010.780.010.910.01

表4　两组患者静脉血栓发生情况(例)

2.4不良反应治疗期间观察组患者未出现药物相关不良反应。

3　讨论

脑卒中是临床常见的脑血管疾病，其复发率高、致残率高、致死率高，给患者家庭及社会带来极大负担。据我国流行病学调查显示，脑卒中在所有危害城乡居民的疾病中位居第二，且缺血性卒中发生率高于出血性卒中。脑卒中导致机体释放应激、炎性因子，引起血小板和凝血系统激活，出现凝血/抗凝血失衡，进而导致机体发生出血或血栓形成。NO是一种多功能信号分子和细胞毒性因子，其由一氧化氮合酶(NOS)催化L精氨酸 (LArg)产生[3-4]。Gersh等[5]研究发现，NO可促进血管平滑肌细胞(VSMC)发生凋亡，减少平滑肌生成，抑制血管重构，进而减轻动脉粥样硬化。骆高江等[6]研究发现，高血压患者内皮素(ET)水平高于正常人群，而NO水平低于正常人群，且NO/ET下降与血管收缩性增加、血压升高密切相关。Seccombe通过研究缺血再灌注动物模型发现，其血管内皮细胞NO下降导致血管痉挛、血小板黏附和聚集增强，从而导致血栓形成风险升高[7]。

目前，NO抑制血栓形成的作用机制尚未明确，基于NO在高血压和冠心病防治中的作用，推断NO可防治急性缺血性卒中的发生。临床上有关吸入外源性NO治疗肺水肿、冠心病、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)作用机制的研究较多，NO可与细胞内血红素结合形成亚硝酞血红素，激活鸟苷酸环化酶，使细胞内环鸟苷酸(cGMP)浓度增加，激活蛋白激酶G而降低细胞内钙离子浓度，进而松弛血管平滑肌[8]；且NO可与血小板表面的膜受体结合，启动cGMP通路，抑制血小板骨架蛋白生成及胞吞胞吐作用，最终导致血小板聚集和释放降低[9-10]。本研究采用外源性NO治疗急性缺血性卒中，结果显示治疗后观察组患者血浆APC水平高于对照组，血浆sICAM-1和vWF水平、血小板聚集率及血浆P-选择素和血小板颗粒膜糖蛋白水平低于对照组，提示吸入外源性NO可有效改善急性缺血性卒中患者的血管内皮细胞功能及血小板功能。且本研究结果亦显示，观察组患者静脉血栓发生率低于对照组，且治疗期间未发现药物相关不良反应。

综上所述，吸入外源性NO可能通过抑制急性缺血性脑卒中患者血管内皮细胞和血小板活化而降低血栓形成风险，且安全性较高。但本研究样本量有限，且外源性NO浓度较低，有待于临床研究进一步探讨外源性NO的吸入浓度及吸入时间。

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(本文编辑：谢武英)

Impact of Inhalation of Exogenous Nitric Oxide on Vascular Endothelial Cell Function，Platelet Function and Thrombosis of Patients With Acute Ischemic Stroke

ZHOUChun-ting，WANGChao-hui.

TheSecondDepartmentofNeurology，HanyangHospitalAffiliatedtoWuhanUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430050，China

ObjectiveTo investigate the impact of inhalation of exogenous nitric oxide on vascular endothelial cell function，platelet function and thrombosis of patients with acute ischemic stroke.MethodsFrom September 2013 to January 2015，a total of 100 patients with acute ischemic stroke were selected in the Second Department of Neurology，Hanyang Hospital Affiliated to Wuhan University of Science and Technology，and they were randomly divided into control group and observation group，each of 50 cases.Patients of both groups were given conventional antithrombotic treatment after admission，while patients of observation group were given extra inhalation of exogenous nitric oxide for 5 days.Index of vascular endothelial cell function(including APC，sICAM-1 and vWF)before and after treatment，index of platelet function(including platelet aggregation rate，P-selectin and platelet granule membrane glycoproteins)before and after treatment，and incidence of phlebothrombosis during the 6-month follow-up were compared between the two groups.ResultsNo statistically significant differences of plasma level of APC，sICAM-1 or vWF was found between the two groups before treatment(P>0.05)；after treatment，plasma APC level of observation group was statistically significantly higher that of control group，while plasma levels of sICAM-1 and vWF of observation group were statistically significantly lower than those of control group(P<0.05).No statistically significant differences of platelet aggregation rate，plasma level of P-selectin or platelet granule membrane glycoproteins was found between the two groups before treatment(P>0.05)，while platelet aggregation rate，plasma levels of P-selectin and platelet granule membrane glycoproteins of observation group were statistically significantly lower than those of control group after treatment(P<0.05).During the 6-month follow-up，the incidence of phlebothrombosis of observation group was 2%，was statistically significantly lower than that of control group of 10%(P<0.05).No one of observation group occurred any drug-related adverse reactions during treatment.ConclusionInhalation of exogenous nitric oxide can effectively improve the vascular endothelial cell function and platelet function of patients with acute ischemic stroke，reduce the incidence of phlebothrombosis，and is safe.

Stroke；Nitric oxide；Endothelial cells；Blood platelets；Thrombosis

430050湖北省武汉市，武汉科技大学附属汉阳医院神经内二科

R 743

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2016.02.018

2015-10-03；

2016-02-04)