妇痒消洗剂薄层鉴别及咖啡酸的含量测定

付玮辰 韩德强 杜宏韦 白秀云

（黑龙江省中医药科学院·哈尔滨 150036）

妇痒消洗剂薄层鉴别及咖啡酸的含量测定

付玮辰 韩德强 杜宏韦 白秀云*

（黑龙江省中医药科学院·哈尔滨 150036）

目的：建立妇痒消洗剂中主要药味的薄层鉴别及含量测定方法，以提高制剂质量标准。方法：采用TLC法对妇痒消洗剂中蛇床子、关黄柏进行了定性鉴别研究；采用HPLC法测定制剂中咖啡酸的含量，选用：Kromasil ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液（1%磷酸溶液调节pH值至3.9）-甲醇（15∶85）为流动相，流速1.0mL·min-1，检测波长：323 nm。结果：TLC法可鉴别出蛇床子、关黄柏的特征斑点，且专属性强，分离度好；咖啡酸在0.3464～1.7320μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9996），平均回收率为99.75%，RSD=1.01%。结论：该方法准确可靠，可用于妇痒消洗剂的质量控制。

TLC HPLC 蛇床子 关黄柏 咖啡酸

妇痒消洗剂是我院长期使用的一种医院制剂，是由蛇床子、苦参、关黄柏、蒲公英等9味中药组成的纯中药制剂，具有清热燥湿，杀虫止痒。主治湿热下注型阴痒，带下量多、色黄异味等症。用于各种原因所致的外阴瘙痒、各种阴道炎、滴虫性、霉菌性、非特异性阴道炎。经过多年的临床实践验证其疗效确切，深受广大患者的欢迎。原质量标准中只有针对苦参的薄层鉴别，为有效控制该制剂的质量，我们对其进行进一步的质量研究，制定了针对蛇床子、关黄柏的薄层色谱鉴别方法。并采用HPLC法对蒲公英中咖啡酸进行了含量测定，结果表明所建方法重现性好，简便、可行，可作为付玮辰医药高级工程师制剂质量控制标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器

P680HPLC高效液相色谱（美国戴安公司）、ZF型三用紫外分析仪（上海市安亭电子仪器厂）、BT205S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）、DK-98-1型电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）

1.2 试药

咖啡酸对照品（110885-200102）、盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200911）、关黄柏对照药材（批号：120937-200506）。均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯（迪马公司），其他试剂均为分析纯，水为自制超纯水；妇痒消洗剂由黑龙江省中医医院制剂室提供。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 蛇床子的薄层鉴别 取本品15ml，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，用饱和碳酸钠溶液洗涤2次，每次5ml，分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺蛇床子的阴性对照样品同法制成阴性对照溶液，取蛇床子素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各10µl、对照品溶液2～5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正已烷（3：3：2）[1]为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照无相同斑点。

2.1.2 关黄柏的专属性鉴别 取本品8ml，蒸干，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至3ml，作为供试品溶液。另取缺关黄柏的阴性对照样品同法制成阴性对照溶液，取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。再取关黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各4～8µl、对照品溶液及对照药材溶液各2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（6：3：1.5：1.5：0.5）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照无相同颜色的荧光斑点。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 Kromasil ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（1%磷酸溶液调节pH值至3.9）-甲醇（15∶85）为流动相，流速1.0mL·min-1，检测波长：323nm，柱温：30℃[2]。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取咖啡酸对照品4.33mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL中含咖啡酸0.0866mg）。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品10ml，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备 按处方比例称取各药材饮片按其制备工艺制成的缺蒲公英阴性样品制剂，再按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.5 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，结果阴性样品溶液色谱图在咖啡酸对照品溶液色谱相应的保留时间处未见吸收峰，说明阴性无干扰。

2.2.6 线性关系考察 将2.2.2项下的对照品溶液配置成浓度分别为17.32、34.64、51.96、69.28、86.60μg·mL-1，各吸取20μL注入液相色谱仪测定，以咖啡酸进样量的自然对数（X）为横坐标，峰面积的自然对数（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=1.8457X+3.8359，r=0.9996。结果表明，咖啡酸进样量在0.3464～1.7320μg范围内线性关系良好。

2.2.7 精密度试验 精密吸取浓度为51.96μg·mL-1咖啡酸对照品溶液20μL，连续进样6次，记录峰面积积分值，计算RSD为0.79%（n=6）。

2.2.8 稳定性试验 取同一批样品，按2.2.3项下的方法配制供试品溶液，并在2.2.1所述的色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、24h各吸取20μL注入液相色谱仪，记录峰面积积分值，计算RSD为0.81%（n=6）。结果表明供试品溶液24h内稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批样品，分别精密称取6份，按2.2.3项下的方法配制供试品溶液，并在2.2.1所述的色谱条件下测定含量，结果均值为0.2103mg·ml-1，RSD为0.57%（n=6）。

2.2.10 加样回收率试验 取已知含量的同批样品6份，每份2ml，置25ml量瓶中，分别精密加入咖啡酸对照品，照2.2.3项下的方法配制供试品溶液，并在2.2.1所述的色谱条件下测定含量，结果见表1。

表1 妇痒消洗剂中咖啡酸的加样回收率试验

2.2.11 样品测定 照样品含量测定方法分别测定了3批（130501、130502、130503）妇痒消洗剂的含量，结果3批样品含咖啡酸分别为25.23，24.89，25.14mg/瓶，根据测定结果，暂定本品每瓶含蒲公英以咖啡酸计，不得低于23mg。

3 讨论

咖啡酸的含量测定参考了多个文献方法[3]、[4]及药典方法[5]，但与杂质峰均未达到较好分离，结果均不理想，最终选择甲醇-磷酸二氢钠溶液（pH值为3.9）（15∶85），流速：1.0mL/min，分离效果良好，咖啡酸重复性好，回收率高，可用于妇痒消洗剂的质量控制。且阴性无干扰，专属性较强，方法可行。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部，北京：中国医药科技出版社，2010：295-296.

[2] 索银科，王永平.HPLC测定退热解毒注射液中绿原酸和咖啡酸含量[J].中成药，2010，32（4）：695-696

[3] 袁敏，张贞丽.淋必通颗粒提取工艺的实验研究[J].时珍国医国药，2011,22（9）：2250-2252.

[4] 宋宇红，王盛.高效液相色谱法测定蒲公英注射液中咖啡酸含量［J］.安徽医药，2012，16(11):1596-1597.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部，北京：中国医药科技出版社，2010：331.

（2016-07-26 收稿）

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