两种显色鉴定法在阴道致病假丝酵母菌鉴定中的应用价值*

祁文瑾，李赛男，陈　卓，许妙玲

(昆明医科大学第一附属医院：1.产科；2.妇科，昆明 650032)



·经验交流·

两种显色鉴定法在阴道致病假丝酵母菌鉴定中的应用价值*

祁文瑾1，李赛男1，陈卓1，许妙玲2

(昆明医科大学第一附属医院：1.产科；2.妇科，昆明 650032)

目的探讨两种显色培养基在外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)致病菌种快速鉴定中的临床应用价值。方法以科玛嘉显色培养基、安图显色培养基和VITEK 2酵母菌鉴定卡对来自VVC患者的致病假丝酵母菌进行菌种分析，最终鉴定结果以VITEK系统为准。结果两种显色培养基对243株外阴阴道假丝酵母菌病致病菌株的鉴定准确率分别为94.7%和95.1%。其中，白假丝酵母菌的鉴定准确率最高，为99.5%和98.6%，非白假丝酵母菌以光滑假丝酵母菌鉴定准确率最高，克柔假丝酵母菌鉴定准确率最低；白假丝酵母菌显色鉴定的敏感性和特异性均在98.0%以上，非白假丝酵母菌鉴定的敏感性和特异性相对较低。结论两种显色培养基均适合于临床VVC致病菌种的快速鉴别，但安图显色培养基更具临床推广价值；对非白假丝酵母菌致病患者，建议行VITEK鉴定以更好指导临床用药。

酵母菌数；培养基；阴道；假丝酵母菌病；外阴阴道；显色培养基；菌种；鉴定

外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)是一种常见的外阴阴道感染性疾病，大约75%的妇女一生中至少有过一次外阴阴道假丝酵母菌感染，45%的妇女经历过两次或两次以上的感染[1-3]，对VVC致病假丝酵母菌的快速鉴定在临床用药的选择中具有非常重要的意义。本研究采用3种方法对VVC阴道致病菌种进行比较鉴定，以期能客观评价两种显色培养基，特别是安图显色培养基在假丝酵母菌菌种快速鉴定中的应用价值。

1　资料与方法

1.1一般资料阴道致病假丝酵母菌菌株243株，均来自本院妇产科门诊VVC和复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)患者。所有患者均不存在免疫相关性疾病及糖尿病等内外科疾病，无长期使用抗生素史。收集标本前1周禁止性交、盆浴、阴道检查及局部上药，采集时均以膀胱截石位于阴道后穹窿处收集白带进行假丝酵母菌镜检，见典型假丝酵母菌菌丝为镜检阳性。

1.2方法

1.2.1诊断标准VVC：有外阴瘙痒、白带异常呈豆渣样等典型VVC症状，且假丝酵母菌镜检、培养阳性。RVVC：一年内有症状并经真菌学证实的VVC发作4次或4次以上者。

1.2.2研究方法

1.2.2.1标本处理将镜检阳性白带接种于沙堡罗氯霉素培养基培养，37 ℃恒温箱24～48 h，有乳酪状假丝酵母菌菌落生长为培养阳性，挑取单菌落接种于斜面培养基保存，用于鉴定和后续试验，定时转种以保持菌株的活力。

1.2.2.2菌种鉴定以科玛嘉显色培养基(法国科玛嘉公司生产，郑州博赛公司分装)、安图显色培养基(安图生物)和VITEK 2酵母菌鉴定卡(法国-生物梅里埃公司)3种方法进行上述分离、纯化致病假丝酵母菌株的菌种鉴定。质控菌株为白假丝酵母菌ATCC90028标准株，购自美国细胞典藏中心。

1.2.3结果判定显色鉴定根据不同菌落在培养基上颜色的差异来确定菌种类型， VITEK 2则由系统自动分析得出菌种鉴定结果，最终鉴定结果以VITEK 2为准。

1.2.3.1科玛嘉培养基显色鉴定显色培养基上绿色、翠绿色菌落鉴定为白假丝酵母菌；紫色、淡紫色菌落鉴定为光滑假丝酵母菌；粉红色菌落鉴定为克柔氏假丝酵母菌；蓝灰色、铁蓝色菌落鉴定为热带假丝酵母菌；其他颜色鉴定为其他假丝酵母菌。

1.2.3.2安图培养基显色鉴定显色培养基上绿色菌落鉴定为白假丝酵母菌；紫色、淡紫色菌落鉴定为克柔假丝酵母菌；白色菌落鉴定为光滑假丝酵母菌；灰色菌落鉴定为热带假丝酵母菌；其他颜色鉴定为其他假丝酵母菌。

1.3统计学处理采用SPSS17.0进行统计分析，计数资料用率表示，组间采用χ2检验，检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1阴道致病白假丝酵母菌与非白假丝酵母菌构成比243株VVC致病菌株中，经VITIK2酵母鉴定卡鉴定确认有白假丝酵母菌217株，非白假丝酵母菌26株。其中，VVC致病菌株159株，检出白假丝酵母菌菌株141株(88.68%)，非白假丝酵母菌18株(11.32%)；RVVC致病菌株84株，检出白假丝酵母菌76株(90.48%)，非白假丝酵母菌8株(9.52%)。两者白假丝酵母菌构成比差异无统计学意义(P>0.05)。

2.23种方法对阴道致病假丝酵母菌的鉴定结果比较安图显色培养基、科玛嘉显色培养基和VITEK鉴定获得的白假丝酵母菌菌株分别为216、214和217株，均以白假丝酵母菌最为多见。以VITEK 2鉴定结果为标准，安图显色培养基和科玛嘉显色培养基对243株VVC致病菌株的鉴定符合率分别为94.7%(229/243)和95.1%(230/243)。其中，白假丝酵母菌的鉴定符合率为99.5%(216/217)和98.6%(214/217)；光滑假丝酵母菌鉴定符合率为84.6%(11/13)和92.3%(11/12)；热带假丝酵母菌的鉴定符合率为66.7%(4/6)和85.7%(6/7)；克柔假丝酵母菌的鉴定符合率较低，仅为25.0%(2/8)和28.7%(2/7) 。3种方法鉴定的阴道致病假丝酵母菌不同菌种构成比见表1。

2.3两种显色培养基用于4种主要菌种鉴定的敏感性与特异性经与VITEK2鉴定结果对比，安图显色培养基鉴定为白假丝酵母菌的菌株有1株为热带假丝酵母菌，2株为圆球形假丝酵母菌；鉴定为光滑假丝酵母菌的有1株为白假丝酵母菌，2株为季也蒙假丝酵母菌，1株为热带假丝酵母菌，1株为其他假丝酵母菌；鉴定为克柔氏假丝酵母菌的有3株为光滑假丝酵母菌，1株为季也蒙假丝酵母菌，1株为近平滑假丝酵母菌，1株为热带假丝酵母菌；鉴定为热带假丝酵母菌的有1株为白假丝酵母菌。科玛嘉显色培养基鉴定为白假丝酵母菌的菌株有1株为热带假丝酵母菌；鉴定为光滑假丝酵母菌的有2株为白假丝酵母菌，2株为季也蒙假丝酵母菌；鉴定为克柔氏假丝酵母菌的有3株为光滑假丝酵母菌， 1株为近平滑假丝酵母菌，1株为其他假丝酵母菌；鉴定为热带假丝酵母菌的有2株为白假丝酵母菌。两种显色培养基对4种主要菌种鉴定的特异性、敏感性见表2。

表1　3种方法鉴定的阴道致病假丝酵母菌菌种比较[n(%)]

表2　两种显色培养基菌种鉴定的特异性和敏感性

3　讨　论

假丝酵母菌是一种有孢子相和菌丝相的双相菌，广泛存在于自然界，是人体正常菌群构成的一部分，它在正常健康人的皮肤、黏膜、口腔和阴道等部分均有存在。假丝酵母菌属于机会致病菌，正常情况下假丝酵母菌为孢子相存在。在某些因素影响下，如肥胖、频繁的阴道灌洗、多胎多产、多次人流、口服避孕药、宫内节育器的放置、糖尿病等，孢子相可转变为菌丝相而引起临床症状[4]。目前，国内外大部分研究表明VVC的主要致病菌为白假丝酵母菌，但非白假丝酵母菌，尤其是光滑假丝酵母菌和热带假丝酵母菌致病的比例逐年升高[5-6]，有学者认为其原因可能与临床抗真菌药物不合理应用有关，这种不合理用药在有效抑制白假丝酵母菌的同时放任了其他假丝酵母菌的生长[7]。本研究显示，RVVC中白假丝酵母菌占90.48%，VVC组白假丝酵母菌占88.68%，均为主要致病菌种。而致病性非白假丝酵母菌以光滑假丝酵母菌多见，其次为热带假丝酵母菌，近平滑假丝酵母菌及其他一些假丝酵母菌，与以往文献报道一致[5-7]。

假丝酵母菌的鉴定有很多方法，如真菌芽管试验、厚垣孢子形成试验、快速假丝酵母菌反应板(Rapid Yeast ID板)、科玛嘉念珠菌显色培养基(CHROMagar Candida media)、API 20C AUX和VITEK 2系统等[8-9]。科玛嘉和安图显色培养基均是人工合成底物由产色基因和微生物代谢物质的部分组成，可以直接通过观察菌落颜色对菌株进行初步鉴定，Guzel等[10]认为科玛嘉显色鉴定法是一种可以从阴道样本快速、有效鉴定致病假丝酵母菌菌种的方法，Hospenthal等[11]的研究显示科玛嘉显色培养基对白假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和热带假丝酵母菌的鉴定准确率均为98%以上，对光滑假丝酵母菌的鉴定准确率为80%，而安图培养基在阴道致病假丝酵母菌鉴定中的研究却未见报道。与假丝酵母菌显色鉴定方法不同，VITEK 2酵母鉴定卡以菌种的微量生化反应为基础，采用系统自动检测确定菌株种类，避免了结果判读时人为因素造成的影响,因操作简便、鉴定特异性、敏感性高,常被用作假丝酵母菌菌种鉴定的最终方法[12-13]。本研究正是以VITEK 2为最终鉴定标准，结果提示，科玛嘉显色培养基总体菌株鉴别准确率为95.1%；对白假丝酵母菌的鉴定准确率为98.6%，与既往报道接近[14]；对光滑假丝酵母菌的鉴定准确率为92.3%，克柔假丝酵母菌的鉴定准确率仅28.7%，与文献报道存在一定差异[15]。进一步分析科玛嘉显色培养基菌种鉴定的特异性和敏感性可以看出，科玛嘉显色培养基对白假丝酵母菌鉴定的敏感性和特异性均在98.00%以上，光滑假丝酵母菌鉴定的特异性为81.81%，敏感性为72.73%，属于可接受范围。

安图显色培养基的鉴定结果与科玛嘉显色培养基类似，243株VVC致病菌株的鉴定准确率为94.70%，白假丝酵母菌的鉴定准确率为99.50%，光滑假丝酵母菌的鉴定准确率84.60%(略低于科玛嘉显色培养基但未检出显著差异)。虽然光滑假丝酵母菌鉴定特异性略高(90.91%)，热带假丝酵母菌鉴定特异性和敏感性略低，但两种培养基在4种主要菌种的特异性和敏感性方面没有显著差异。与VITEK鉴定系统相比，两种显色培养基均具有操作简便、价格相对较低、耗时相对较短的优点，对白假丝酵母菌鉴定准确率高，适于当前临床工作中VVC致病菌种的快速鉴别，由于安图显色培养基为国产试剂，更具价格优势，因此更具临床推广价值。但对于非白假丝酵母菌所致VVC患者，特别是RVVC患者，仍建议进行VITEK鉴定以更好地对临床用药提供指导。

本研究中安图显色培养基、科玛嘉显色培养基对克柔假丝酵母菌鉴定的准确性、特异性和敏感性均低于30%，因其菌株数较少，对鉴定结果产生的影响较小。但这种过低的检验率标准应引起重视，分析其原因可能在于：(1)非白假丝酵母菌数量偏少，无法准确地体现出上述显色培养基在非白假丝酵母菌鉴定方面的敏感性和准确性；(2)由于不同的实验人员对显色培养基颜色判读的理解存在差异，可能导致了颜色相近菌株结果的判读失误，如将科玛嘉的淡紫色菌株误读为粉红色菌株，从而影响了实验结果，提高鉴定人员熟练度可能有助于提高显色培养基对此类菌种鉴定的特异性、敏感性和准确率。但上述推论仍需更多研究证实。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.13.032

国家自然科学基金资助项目(81160076)；云南省中青年学术技术带头人后备人才培养项目(2012HB029)；云南省医学学科带头人培养项目(D-201225)。作者简介：祁文瑾(1975-)，副教授，博士，主要从事妇产科感染性疾病研究。

R711.72

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1671-8348(2016)13-1822-03

2015-10-12

2015-12-16)