不同证型膝骨关节炎患者红细胞免疫功能变化及痹祺胶囊的干预效果研究

李 芳，姚建华，段哲萍，闫永龙，郑桂敏，曹京旌，张风肖



·论著·

·中医·中西医结合研究·

不同证型膝骨关节炎患者红细胞免疫功能变化及痹祺胶囊的干预效果研究

李 芳，姚建华，段哲萍，闫永龙，郑桂敏，曹京旌，张风肖

目的探讨膝骨关节炎(KOA)不同中医辨证分型患者红细胞免疫功能差异,并观察痹祺胶囊对不同证型KOA患者红细胞免疫功能的影响。方法选取2013年3—6月于河北省人民医院风湿免疫科就诊的KOA患者60例，参照《中药新药临床研究指导原则》将KOA患者分为Ⅰ型组(肝肾不足、筋脉瘀滞型)27例、Ⅱ型组(脾肾两虚、湿注骨节型)11例及Ⅲ型组(肝肾亏虚、痰瘀交阻型)22例。另选取同期于本院体检健康者30例为对照组。KOA患者口服痹祺胶囊4片/次，3次/d，持续12周。对照组于体检时，KOA患者分别于治疗前及治疗后取静脉血2 ml,检测红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环(RBC-ICR)。结果各组RBC-C3bRR、RBC-ICR比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；其中，Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-C3bRR低于对照组，Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-C3bRR低于Ⅰ型组，Ⅲ型组RBC-C3bRR低于Ⅱ型组(P<0.05)；Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-ICR高于对照组，Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-ICR高于Ⅰ型组，Ⅲ型组RBC-ICR低于Ⅱ型组(P<0.05)。Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组治疗后RBC-C3bRR高于治疗前(P<0.05)；Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组治疗后RBC-ICR低于治疗前(P<0.05)。结论不同中医证型KOA患者RBC-C3bRR、RBC-ICR存在差异,可作为中医临床辨证分型的参考指标。痹棋胶囊在一定程度上可提高KOA患者红细胞免疫功能。

骨关节炎，膝；红细胞；免疫调节；痹祺胶囊

李芳，姚建华，段哲萍，等.不同证型膝骨关节炎患者红细胞免疫功能变化及痹祺胶囊的干预效果研究[J].中国全科医学，2016，19(24)：2939-2942.[www.chinagp.net]

LI F，YAO J H,DUAN Z P，et al.Changes of red-cell immune function and Biqi capsule intervention in patients with knee osteoarthritis of different TCM syndromes[J].Chinese General Practice，2016，19(24)：2939-2942.

膝骨关节炎(KOA)是一种多发于中老年的慢性膝关节疾病，以关节软骨进行性退变、滑膜炎、关节边缘骨赘形成为主要病理特征，最终致关节疼痛、畸形和功能障碍[1-2]。祖国传统医学认为，KOA属于“骨痹”范畴，为本虚标实之证，以肝肾不足、正气亏虚为发病基础，慢性劳损与外邪侵袭为发病诱因，其传统辨证分型的客观化一直是临床研究重点[3-4]。有研究证实，红细胞免疫功能在人体免疫复合物清除过程中发挥主导作用，其能力的强弱与中医“正气”的盛衰密切相关[5]。本研究通过检测60例KOA患者的红细胞免疫功能，并对其中医各证型间进行比较研究，旨在研究二者之间的关系,为KOA的中医辨证分型提供客观依据；同时采用以益气养血、祛风除湿、活血通络为治则的传统抗风湿药物痹祺胶囊治疗KOA，观察对红细胞免疫功能的影响，为KOA的临床治疗提供参考。

1　对象与方法

1.1研究对象选取2013年3—6月于河北省人民医院风湿免疫科就诊的KOA患者60例，其中男13例，女47例；年龄42～69岁；病程0.5～10.0年。患者均符合美国风湿病协会关节炎诊断标准[6]。排除其他感染性关节炎、心肝肾疾病、结缔组织病、内分泌疾病、严重胃肠道疾病及肿瘤；1个月内服用过其他中成药或汤药、西药(非甾体抗炎药物、皮质激素类药物)或免疫调节剂、免疫增强剂及免疫抑制剂或进行过理疗。另选取同期于本院体检健康者30例为对照组，其中男6例，女24例；年龄40～68岁。受试者对本研究知情同意，本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1中医辨证分型参照《中药新药临床研究指导原则》[7]对KOA患者进行分型：(1)Ⅰ型组(肝肾不足、筋脉瘀滞型)27例：主症为关节疼痛，胫软膝酸；次症为活动不利，运作牵强，舌质偏红，苔薄或薄白，脉滑或弦。(2)Ⅱ型组(脾肾两虚、湿注骨节型)11例：主症为关节疼痛，肿胀积液；次症为活动受限，舌质偏红，或舌胖质淡，苔薄或薄腻，脉滑或弦。(3)Ⅲ型组(肝肾亏虚、痰瘀交阻型)22例：主症为关节疼痛，肿胀肥厚感，痿弱少力；次症为骨节肥大，活动受限，舌质偏红，或舌胖质淡，苔薄或薄腻，脉滑或弦细。

1.2.2治疗方法KOA患者口服痹祺胶囊(天津达仁堂京万红药业有限公司生产，批号301721，成分：马钱子、茯苓、白术、党参、丹参、地龙、牛膝、川芎、三七、甘草)4片/次，3次/d，持续12周。

1.2.3红细胞免疫功能检测对照组于体检时，KOA患者分别于治疗前及治疗后取静脉血2 ml,肝素抗凝，加0.9%氯化钠溶液以2 000 r/min洗涤离心3次，3～5 min/次，离心半径为13.5 cm。分离血浆和红细胞，调至红细胞浓度为1.25×107/ml备用。参考文献[1]检测红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环(RBC-ICR)。

2　结果

2.1红细胞免疫功能比较各组性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P<0.05)。各组RBC-C3bRR、RBC-ICR比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；其中，Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-C3bRR低于对照组，Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-C3bRR低于Ⅰ型组，Ⅲ型组RBC-C3bRR低于Ⅱ型组(P<0.05)；Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-ICR高于对照组，Ⅱ型组、Ⅲ型组RBC-ICR高于Ⅰ型组，Ⅲ型组RBC-ICR低于Ⅱ型组，差异均有统计学意义(P<0.05，见表1)。

2.2各证型组治疗前后红细胞免疫功能指标的比较Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组治疗后RBC-C3bRR高于治疗前，差异均有统计学意义(P<0.05)；Ⅰ型组、Ⅱ型组、Ⅲ型组治疗后RBC-ICR低于治疗前，差异均有统计学意义(P<0.05，见表2)。

表2　各证型组治疗前后红细胞免疫功能指标比较±s，%)

表1各组基线资料与红细胞免疫功能指标比较

Table 1Comparison of baseline characteristics and RBC immune function among each group

组别例数性别(男/女)年龄(岁)RBC-C3bRR(%)RBC-ICR(%)对照组306/2453.7±8.416.2±1.56.8±1.6Ⅰ型组276/2152.6±9.812.3±1.8a9.7±1.2aⅡ型组112/951.7±9.211.6±2.1ab13.5±2.4abⅢ型组225/1754.2±8.410.4±2.5abc11.2±1.7abcF(χ2)值0.102d0.32918.37517.538P值>0.05>0.05<0.001<0.001

注：RBC-C3bRR=红细胞C3b受体花环，RBC-ICR=红细胞免疫复合物花环；与对照组比较，aP<0.05；与Ⅰ型组比较，bP<0.05；与Ⅱ型组比较，cP<0.05；d为χ2值

3　讨论

传统中医理论认为，正虚、外邪是影响KOA发生发展的重要因素[8]。随着人老体衰，肝脾肾亏虚，筋骨失养，腠理空虚，加之风寒湿邪乘虚侵袭留注关节，痹阻经络、血行不畅而发病，属“本虚标实”之证，正气虚弱是KOA发生的根本原因[9]。外来病原微生物或炎性递质等邪气侵袭机体后，若正气充足,免疫功能正常，则正胜邪退，疾病趋于好转；若正气虚弱，免疫功能低下,则邪胜正衰，疾病趋于恶化。故中医认为，“正气存内,邪不可干”“邪之所凑,其气必虚”[10]。研究表明，红细胞具有免疫黏附和免疫调控功能，是人体天然免疫系统的重要组成部分，在机体对免疫复合物的清除中发挥主导作用。因此,红细胞免疫黏附能力可作为反映“正气”的客观指标之一[11]。

脾肾两虚、湿注骨节型KOA患者多有关节肿胀积液，活动受限，提示此型KOA患者多处于急性期。肝肾不足、筋脉瘀滞型与肝肾亏虚、痰瘀交阻型患者临床症状多表现为关节疼痛、胫膝酸软、骨节肥厚、痿弱无力，提示其病程多缠绵，以慢性炎症过程为主。《素问·宣明五气》云:“肝主筋、脾主肉、肾主骨”，肾精亏虚，骨失所养，肝血不足，血不养筋，脾失健运，气血生化乏源,水湿疏布失常而流注关节，则筋脉拘急，腰膝酸痛，关节屈伸不利[10]；故《张氏医通》指出“膝痛”“无有不因肝肾虚者，虚则风寒湿气袭之”[12]。

本研究发现，各证型KOA患者RBC-C3bRR均低于对照组，而RBC-ICR均高于对照组,提示KOA患者存在红细胞免疫黏附活性减弱。RBC-C3bRR在肝肾亏虚、痰瘀交阻型最低，脾肾两虚、湿注骨节型次之，肝肾不足、筋脉瘀滞型最高；分析其原因可能为，肝肾不足、筋脉瘀滞型患者气血虚弱程度较轻，红细胞膜C3b受体数目减少程度、红细胞对免疫复合物黏附及释放障碍等异常较轻，而肝肾亏虚、痰瘀交阻型气血亏虚较重，红细胞免疫功能衰退更为严重，与《金匮要略》所强调痹证多“营卫气虚，运行不畅”[13]，以虚立论相吻合。RBC-ICR在脾肾两虚、湿注骨节型最高，肝肾亏虚、痰瘀交阻型次之，肝肾不足、筋脉瘀滞型最低，可能与KOA急性期滑膜炎性反应明显，自身免疫反应使免疫复合物增加，红细胞黏附免疫复合物过多,大量红细胞C3b被覆盖，致使红细胞C3b空位及活性下降有关。免疫复合物及自由基等其他炎性产物蓄积增加，损害膜结构和功能，改变红细胞膜表面的抗原性，使红细胞与C3b黏附功能障碍加重，又可引发机体红细胞的免疫功能进一步减低。RBC-ICR可能与关节急性炎症活动程度有关。《景岳全书》云：“盖痹者闭也，以血气为邪所闭，不得通行而病也[14]。”本研究结果显示，KOA患者存在红细胞免疫功能障碍，证实痹症乃“因虚致病”，且痹症日久亦能“耗气伤血”“因病致虚”的疾病过程。故红细胞免疫功能下降程度与气血亏虚程度密切相关，在一定程度上能够反映KOA中医证候的特征，可作为证候分型的客观指标。

本研究应用痹祺胶囊治疗KOA，方中君药为马钱子(调制粉)，具有散寒消肿、通络止痛作用；臣药由茯苓、白术、党参、丹参构成，可健脾益气，养血和血；佐药为地龙、牛膝、川芎、三七，可活血化瘀,通络止痛，甘草调和诸药为使药。诸药配伍,共奏益气养血、祛风除湿、散寒通络、活血止痛之效。痹祺胶囊中白术、党参、茯苓以及甘草是著名的具有健脾养胃、益气补中功效的古方四君子汤的组分，其源自我国宋代时期的《太平惠民和剂局方》[15]。研究表明，四君子汤主要含有黄酮类、多糖类及有机酸类等成分，能有效调节胃肠功能，提高机体免疫力[16-17]，改善脾虚证大鼠模型红细胞膜三磷酸腺苷酶的活性，增加组织器官和肌肉的能量供应[18]。川芎的主要成分川芎嗪，可提高人体血红蛋白水平、红细胞膜超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)，降低红细胞膜丙二醛(MDA)水平，从而减少对红细胞的破坏,延长红细胞寿命[19]。本研究发现，该药可提高不同证型KOA患者RBC-C3bRR，降低RBC-ICR，改善红细胞免疫功能。因此，改善红细胞免疫功能，影响红细胞膜代谢可能是痹祺胶囊益气养血健脾的作用机制之一。

综上所述，本研究通过分析不同证型KOA患者红细胞免疫功能水平的差异，探讨KOA中医证型的微观本质，并观察对红细胞免疫功能的影响，揭示痹祺胶囊治疗KOA的机制，为KOA的中医诊断和治疗的客观化、标准化提供理论依据。然而，本研究采用自身对照反映痹祺胶囊对KOA的治疗效果，在下一步研究中，以临床常规治疗方法为对照，进一步探讨痹祺胶囊对KOA的治疗效果。

作者贡献：李芳进行课题设计与实施、资料收集整理、成文并对文章负责；姚建华进行课题设计与实施、资料收集整理；段哲萍进行资料数据统计分析；闫永龙、郑桂敏、曹京旌负责患者随诊及资料整理，张风肖进行质量控制及审校。

本文无利益冲突。

[1]郭峰,钱宝华,张乐之.现代红细胞免疫学[M].上海:第二军医大学出版社,2002:262-264.

[2]HEIJINK A,GOMOLL A H,MADRY H,et al.Biomechanical considerations in the pathogenesis of osteoarthritis of the knee[J].Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc,2012,20(3):423-435.

[3]刘健,张金山,汪四海,等.膝骨关节炎中医证候分布规律及相关因素回顾性分析[J].中医药临床杂志,2011,23(6):524-527.

[4]刘峻承,鲁丽.膝关节骨关节炎中医证候研究进展[J].光明中医,2010,25(10):1950-1951.

[5]郎晓东.不同年龄健康人红细胞免疫功能的变化分析[J].中国当代医药,2014,21(7):161-163.

LANG X D.Change analysis of erythrocyte immune function in the healthy people with different age[J].China Modern Medicine，2014,21(7):161-163.

[6]中华医学会.临床诊疗指南-风湿病分册[M].北京:人民卫生出版社，2005:18.

[7]郑筱萸.中药新药临床研究指导原则(试行)[M].北京:中国医药科技出版社，2002：349.

[8]李西海，刘献祥.骨关节炎的核心病机-本痿标痹[J].中医杂志,2014,55(14):1248-1252.

[9]李西海，陈文列，刘献祥.补肾柔肝法防治骨性关节炎作用机制探讨[J].福建中医药大学学报，2011，21(2):66-69.

[10]傅景华,陈心智,点校.黄帝内经素问[M].北京:中医古籍出版社,1997.

[11]朱立平,陈学清.免疫学常用实验方法[M].北京:人民军医出版社,2000:187.

[12]杨玲，宋益东.《张氏医通》的学术特色[J].中医研究,2012,25(7):71-72.

[13]王占奎,孙桂荷,张云松，等.《金匮要略》痹证病因病机探析[J].山东中医药大学学报,2000,24(3):186-187.

[14]张介宾.景岳全书[M].上海:第二军医大学出版社,2006.

[15]黄佩，宋洋.四君子汤药理作用和质量控制研究[J].辽宁中医杂志，2014，41(7):1395-1397.

[16]张国凤.四君子汤的化学成分鉴定[J].中医临床研究,2013,5(23):26-27.

ZHANG G F.Identification of the chemical constituents of the Sijunzi decoction[J].Clinical Journal of Chinese Medicine，2013,5(23):26-27.

[17]宋利斌,毛飞寅.加味四君子汤对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫调节研究[J].浙江中医药大学学报,2012,36(10):1112-1116.

SONG L B，MAO F Y.Experimental study on the immunomodulaffmg effects of warming the kidney and strengthening spleen on immudo deficiency and spleen deficiency mice[J].Journal of Zhejiang Chinese Traditional Medicine University,2012,36(10):1112-1116.

[18]曾益宏，刘友章，徐升.益气健脾法对脾虚证大鼠红细胞膜ATPase活性的影响[J].四川中医,2011,29(2):24-26.

[19]刘四喜,李长钢,代冬伶,等.川芎嗪对血红蛋白H病患者红细胞膜MDA、SOD和T-AOC的影响[J].临床和实验医学杂志,2010,9(11):804-807.

(本文编辑：吴立波)

Changes of Red-cell Immune Function and Biqi Capsule Intervention in Patients With Knee Osteoarthritis of Different TCM Syndromes

LIFang，YAOJian-hua,DUANZhe-ping,YANYong-long,ZHENGGui-min,CAOJing-jing,ZHANGFeng-xiao.

DepartmentofRheumatismandImmunology,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China

LIFang,DepartmentofRheumatismandImmunology,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China;E-mail:yaoyaopangpang@sina.com

ObjectiveTo explore the differences of red-cell immune function among patients with knee osteoarthritis (KOA) of different TCM syndromes and to observe the effects of Biqi capsule on red-cell immune function of KOA patients.Methods60 KOA patients,who received treatment in Department of Rheumatism and Immunology of Hebei General Hospital from March and June 2013,were selected in the study.They were divided into three groups according to Guidance on the Clinical Research on New Traditional Chinese Medicine:Type Ⅰ group(marked by insufficiency of liver and kidney function with tendon stagnation,n=27),Type Ⅱ group(characterized by deficiency of spleen and kidney function with dampness infusion into bone and joints,n=11) and Type Ⅲ group(marked by insufficiency of liver and kidney function with obstruction due to phlegm and blood-stasis,n=22).30 subjects,who had been examined healthy during the same period,were enrolled as the control group.The KOA patients were given orally four Biqi capsules each time,three times a day for 12 weeks.The levels of RBC C3b receptor rosette (RBC-C3bRR) and RBC immune complex receptor (RBC-ICR) were tested individually in 2 ml venous blood from the control group during their physical examinations and from the KOA patients before and after treatment.ResultsThe levels of RBC-C3bRR and RBC-ICR in each group were significantly different(P<0.05);the RBC-C3bRR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly lower than those in the control group,while the levels of RBC-C3bRR of Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly lower than those of Type Ⅰ group,and the level of RBC-C3bRR of Type Ⅲ group was significantly lower than that of Type Ⅱ group(P<0.05);the RBC-ICR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly higher than those in the control group,while the levels of RBC-ICR of Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly higher than those of Type Ⅰ group,and the RBC-ICR level of Type Ⅲ group was significantly lower than that of Type Ⅱ group(P<0.05).The RBC-C3bRR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups after treatment were significantly higher than those before treatment (P<0.05);the RBC-ICR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type sⅢ groups after treatment were significantly lower than those before treatment (P<0.05).ConclusionThe RBC-C3bRR and RBC-ICR levels in KOA patients of different TCM syndromes are different,which can be used as the reference indexes for clinical TCM syndrome differentiation.Biqi capsule can improve the red-cell immune function of KOA patients to a certain degree.

Osteoarthritis,knee;Erythrocytes;Immunomodulation;Biqi capsule

河北省中医药管理局科研计划项目(2015136)

050051河北省石家庄市，河北省人民医院风湿免疫科(李芳，闫永龙，郑桂敏，曹京旌，张风肖)，肿瘤科(段哲萍)；河北医科大学第二医院老年病科(姚建华)

李芳，050051河北省石家庄市，河北省人民医院风湿免疫科；E-mail：yaoyaopangpang@sina.com

R 684.3

ADOI：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.24.014

2015-12-10；

2016-06-24)