抗苗勒管激素和锌指蛋白-265在卵巢颗粒细胞瘤及Sertoli细胞瘤中的表达

袁军，江晓红（嘉兴市妇幼保健院，浙江 嘉兴　314000）

·临床研究·

抗苗勒管激素和锌指蛋白-265在卵巢颗粒细胞瘤及Sertoli细胞瘤中的表达

袁军，江晓红
（嘉兴市妇幼保健院，浙江 嘉兴314000）

目的探讨抗苗勒管激素（AMH）和锌指蛋白-265（ZNF-265）在正常卵巢组织、卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤中的表达情况。方法采用免疫组织化学SP法检测正常卵巢、卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤标本各40例组织中AMH及ZNF-265蛋白的表达水平。 结果AMH在卵巢颗粒细胞瘤中的阳性表达水平高于正常卵巢组织及Sertoli细胞瘤，差异有统计学意义（均P＜0.01）；ZNF-265在Sertoli细胞瘤中的阳性表达水平高于正常卵巢组织及卵巢颗粒细胞瘤，差异有统计学意义（均P＜0.01）。结论卵巢性索间质肿瘤患者中AMH及ZNF-265蛋白表达水平显著升高，可能与卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤的发生发展有密切的关系，并为这两者肿瘤的鉴别提供了新的思路。

AMH；ZNF-265；卵巢颗粒细胞瘤；Sertoli细胞瘤

卵巢颗粒细胞瘤是一种少见的性索间质肿瘤，该类肿瘤低度恶性，病程长，可发生于任何年龄。Sertoli细胞瘤是卵巢性索间质肿瘤中较为罕见的一种肿瘤，具有类固醇激素合成能力，仅占所有卵巢原发肿瘤的0.1%～0.5%［1］，分为高、中、低分化。目前普遍认为，高分化型具有某些良性肿瘤特征，中低分化型具有恶性生物学行为，但恶性程度低于卵巢上皮性癌［2］。卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤具有性索间质肿瘤共同的免疫组织化学特征，目前尚无特异的抗体对其进一步分类标记。本研究应用免疫组化法通过检测抗苗勒管激素（AMH）和锌指蛋白-265（ZNF-265）的表达，试图寻找可以鉴别卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤的免疫组化指标。

1　材料与方法

1.1材料收取卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤石蜡标本各40例，标本来源于嘉兴市妇幼保健院1998～2015年的病理档案。卵巢颗粒细胞瘤患者年龄16～70岁，平均（43.0±5.1）岁；＜30岁13例，30～50岁11例，＞50岁16例；病变均为单侧（左21例，右19例）；参照2000年FIGO标准进行临床分期，Ⅰ期30例，Ⅱ期9例，Ⅲ期1例。卵巢Sertoli细胞瘤患者年龄18～68岁，平均（48.0±4.8）岁；＜30岁10例，30～50岁18例，＞50岁12例；病变均为单侧（左15例，右25例）；参照2000年FIGO标准进行临床分期，Ⅰ期25例，Ⅱ期11例，Ⅲ期4例。以非卵巢肿瘤性疾病而切除的正常卵巢组织40例为对照组，年龄20～75岁，平均（45.0±5.2）岁；＜30岁12例，30～50岁13例，＞50岁15例。三组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。所有病例均参照2004 年WHO卵巢肿瘤分类标准诊断。

1.2方法石蜡标本切成4mm切片，以SP法行免疫组织化学染色，一抗浓度为1：100，二抗工作浓度严格按照SP试剂盒说明，抗原修复采用高压热修复法。每次实验均设阳性对照和阴性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。细胞无棕黄色颗粒为阴性，有棕黄色颗粒为阳性 （AMH及ZNF-265阳性部位为胞质）。Olympus显微镜下随机选取5个视野照相，由Image-pro plus6.0图像软件分析每个视野累积光密度（IOD）和面积（area），平均光密度值（MD）=IOD/ area。每个标本取5个视野MD的平均值。AMH、ZNF-265单克隆抗体及二抗广谱型PV-6000分别购于北京中杉金桥生物技术有限公司及Santacruz公司。1.3统计学处理采用SPSS17.0软件进行统计学处理，结果以（±s）表示，组间比较采用t检验。

2　结果

AMH及ZNF-265阳性染色为棕黄或棕褐色颗粒，定位于肿瘤细胞的胞质内，在卵巢颗粒细胞瘤和Sertoli细胞瘤中均有不同程度的表达，具体表达情况见图1～6。

AMH在正常卵巢组织、Sertoli细胞瘤及卵巢颗粒细胞瘤中的阳性表达水平逐渐升高，差异有统计学意义 （F=677.4，P＜0.01）。其中AMH在卵巢颗粒细胞瘤中的表达水平高于Sertoli细胞瘤及正常卵巢组织，差异有统计学意义（均P＜0.01）；AMH在Sertoli细胞瘤中的表达水平高于正常卵巢组织，差异有统计学意义（P＜0.01）。ZNF-265在正常卵巢组织、卵巢颗粒细胞瘤及Sertoli细胞瘤中的阳性表达水平逐渐升高，差异有统计学意义 （F=5540，P＜0.01）。其中ZNF-265在Sertoli细胞瘤中的表达水平高于卵巢颗粒细胞瘤及正常卵巢组织，差异有统计学意义 （均P＜0.01）；ZNF-265在卵巢颗粒细胞瘤中的表达水平高于正常卵巢组织，差异有统计学意义（P＜0.01）。详见表1。

表1　三组AMH及ZNF-265的MD值比较

图1　卵巢颗粒细胞瘤常规切片

图2　卵巢颗粒细胞瘤中AMH表达

图3　卵巢颗粒细胞瘤中ZNF-265表达

图4　Sertoli细胞瘤常规切片

图5　Sertoli细胞瘤中AMH表达

图6　Sertoli细胞瘤中ZNF-265表达

3　讨论

AMH属于转化生长因子13（TGF-13）超家族，仅表达于性腺，能诱导苗勒管退化，在性腺发育和男性性别分化过程中起重要作用。AMH是公认的卵巢颗粒细胞瘤最佳血清标志物。梁晓艳等［3］研究发现，颗粒细胞瘤中AMH在临床Ⅰ、Ⅱ期的阳性表达率明显高于Ⅲ期。Rey等［4］研究发现，成人型和幼年型卵巢颗粒细胞瘤中AMH表达均为阳性，而其他性腺及性腺外肿瘤则无AMH表达。这些研究结果提示AMH与卵巢颗粒细胞瘤具有显著的相关性。

ZNF-265是一个参与细胞分化、发育、基因表达调控的多功能蛋白，最早由Karginova等［5-6］首先于大鼠肾球旁细胞中克隆，研究发现其在人类和小鼠生殖系统的表达具有特异性。席晔斌等［7］首次通过免疫学方法检测了ZNF-265在大鼠睾丸Sertoli细胞中的表达，证实了ZNF-265蛋白在Sertoli细胞核核周胞质的特异性表达。

本文以正常卵巢组织为对照组，采取免疫组化法检测卵巢颗粒细胞瘤及 Sertoli细胞瘤中AMH及ZNF-265中表达情况，以便为这两种肿瘤的诊断及鉴别诊断提供更加可靠的证据。本文结果显示，AMH在正常卵巢组织、Sertoli细胞瘤及卵巢颗粒细胞瘤中的阳性表达水平逐渐升高，AMH在卵巢颗粒细胞瘤中的表达水平高于Sertoli细胞瘤及正常卵巢组织（均P＜0.01）。而ZNF-265在正常卵巢组织、卵巢颗粒细胞瘤及Sertoli细胞瘤中的表达水平逐渐增高，在Sertoli细胞瘤中的表达水平显著高于卵巢颗粒细胞瘤及正常卵巢组织（均P＜0.01）。

在性索间质肿瘤中，由于卵巢颗粒细胞瘤及Sertoli细胞瘤均具有多变的组织学特点，并且各种形态常混合存在于同一肿瘤内，从而造成难以辨认的假象，也给组织学分级带来了困难。目前WHO对于颗粒细胞瘤并无明确的病理分级标准，影响其预后的主要因素为临床分期，而对于Sertoli细胞瘤具有明确的病理分级，可用于预后的评估。因此，区分这两类肿瘤具有十分重要的临床意义。通过本次研究发现，AMH、ZNF-265在区分卵巢Sertoli细胞瘤及颗粒细胞瘤方面具有一定的应用价值，同时也为这两类肿瘤的相关预后评估研究提供了新的思路。

AMH及ZNF-265的表达与卵巢颗粒细胞瘤及Sertoli细胞瘤分期的关系，还有待进一步研究。Karkanaki等［8］报道AMH除了在卵巢颗粒细胞瘤的诊断及预后评价中具有重要作用外，还可作为术后疗效评估及复发监测的血清标志物。目前，ZNF-265功能研究主要集中在基因调控，其与生殖系统肿瘤的关系研究少有报道。通过此次研究，为其在生殖系统肿瘤的诊断及鉴别诊断方面开辟了新的前景。

［1］ Young RH，Scully．Sex cord-stromal，steroid cell and other ovarian tumors．In：Kurman，R．J．（Ed），Blaustein's Pathology ofFemaleGenitalTract，5thed．Springer-Verlag，NY，2002：929

［2］TavassoliFA，DevileeP．WorldHealthOrganizationclassification of tumours．Pathology and genetics tumours of the breast and female genital organs．Lyon：IARC，2003：1

［3］梁晓艳，姚汉武，马晓宇.卵巢颗粒细胞瘤中AMH的表达及其组织学分级标准的分析评价.中国医药导报，2010，7 （8）：59

［4］Rey R，Sabourin JC，Venara M，et a1．Anti-Müllerian hormone is a specificmarker of Sertoli-and granulosa-ce ll o rigin in gonadal tumors．Human Pathology，2000，31（10）：1202

［5］KarginovaEA，PenotzES，KazakovaIG，etal．Zis：Adevelopmental1y regulated gene ex pressed in juxtaglomerula cells．Am J Renal Physiol，1997，42（5）：731

［6］Li J，Chen XH，Xiao PJ，et a1．Expression pattern and splicing function of mouse ZNF-265．Neurochem Res，2008，33（3）：483

［7］席晔斌，李荣平，王保国，等.锌指蛋白-265在大鼠睾丸Sertoli细胞中的特异性表达.细胞与分子免疫学杂志，2008，24（10）：1011

［8］Karkanaki A，Vosnakis C，Panidis D.The clinical significance ofanti-Mülerianhormoneevaluationingynecological endocrinology．Hormones（Athens），2011，10（2）：95