紫白膏对肛肠病术后疼痛大鼠血浆IL-6、IL-10影响*

蔡而玮　张倩倩



【实验研究】

紫白膏对肛肠病术后疼痛大鼠血浆IL-6、IL-10影响*

蔡而玮1张倩倩2

1.福建中医药大学附属人民医院肛肠二科(福州 350004); 2.福建中医药大学第一临床医学院(福州 350000)

摘要：目的研究紫白膏对肛肠病术后疼痛模型大鼠血浆中IL-6、IL-10的影响。方法将健康SD大鼠48只,雌雄各半,随机分成正常组、单纯模型组、凡士林组、紫白膏组。除正常组外,其余大鼠均建立肠病术后疼痛模型；正常组、模型组不予药物治疗,其余各组大鼠分别给予相应药物创面换药,连续给药3天，每天2次，在末次给药后1小时取血。测定各组大鼠血浆IL-6和IL-10含量。结果四组IL-6情况：单纯模型组、凡士林组血浆IL-6水平均高于正常组(P<0.05)，统计学有明显差异；凡士林组IL-6略低于模型组(P>0.05)，但无明显统计学差异。紫白膏组IL-6低于模型组、凡士林组(P<0.05)，统计学有明显差异；紫白膏组血浆IL-6水平略高于正常组(P>0.05)，但无明显统计学差异；四组IL-10情况：模型组大鼠血浆IL-10与正常组比较无明显差异(P>0.05)，凡士林组IL-10水平高于模型组，但无统计学差异(P>0.05)，紫白膏组IL-10水平高于凡士林组、模型组、正常组，统计学具有明显差异(P<0.05)。结论紫白膏能控制肛肠病术后疼痛大鼠血浆IL-6水平，并提升IL-10水平，这可能是紫白膏的临床镇痛效果机制之一。

关键词：紫白膏；疼痛； 大鼠； IL-6；IL-10

术后疼痛是人体由于组织损伤、神经纤维受外源性理化因素刺激而产生的一种痛苦感觉, 可见于大多数手术后患者，亦是是肛肠科常见的并发症。紫白膏是本院院内制剂，主要成分是大黄、紫草、石膏、白及及冰片等，其被长期应用于肛肠病术后创面恢复并取得了良好疗效[1～2]。本研究通过测量肛肠病术后疼痛大鼠血清IL-6、IL-10的含量,研究紫白膏对肛肠病术后大鼠血清IL-6、IL-10的影响，从微观及分子水平探讨我院自制剂紫白膏的镇痛作用机理。

1　研究材料

1.1实验动物健康清洁级SD大鼠,48只,雌雄各半,体质量为(200±20) g,由福建中医药大学动物实验中心代购，厂家：上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证编号：2007000573723，许可证号2012-0002。

1.2实验药物及试剂(1)紫白膏：由福建中医药大学附属人民医院中药制剂室制备。(2)凡士林：福建省人民医院代购,天津市恒兴化学试剂制造有限公司生产。(3)IL-6、IL-10ELISA试剂盒：鼎国昌盛生物技术有限责任公司代购，品牌CUSABIO，产品编号：CSB-E04640r，CSB-E04595r。 (4)10%水合氯醛：福建中医药大学实验室代购，批号：符合HG3-1004-76。

1.3实验器材手术包(包括眼科手术刀、镊子、剪刀等)、千分之一电子天平、高速离心机、酶标仪、毛细玻璃管、-20℃冰箱。

1.3研究方法

1.3.1动物分组将48只SD大鼠按随机数字表法分成4组，即正常组、单纯模型组、凡士林组、紫白膏组。

1.3.2动物造模参考何永恒教授造模方法[3]。大鼠经腹腔注射 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g体重麻醉，麻醉后仰卧固定,将鼠尾近端包括肛周进行消毒, 肛门松弛后,以肛缘为界,切开皮肤至直肠點膜,切口修剪成三角形缺损,底宽约l.0cm,高约2. 0cm,深至皮下深筋膜层。

1.3.3创面换药紫白膏组:造模后创面外用紫白膏。凡士林组:造模后创面外用凡士林。模型组:只造模不使用药物。正常组:不造模、不使用任何药物。各组大鼠造模后，正常组、模型组不用药物处理,其余组分别用相应药物均匀涂于相应创面上，纱布覆盖创面。连续换药3天,每天早晚2次(上午8点至9点、下午4点至5点)。

1.3.4样本采集各组动物分别换药3天，于末次换药后1h,将大鼠经腹腔注射 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g体重麻醉，用5ml注射器抽取腹主动脉血4 mL,抗凝保存，采集后30min内离心10min(3000r/min)，取上清液在-20℃冰箱中保存备用，避免反复冻融。

1.3.5数据处理每孔设计复孔，取平均值计算。以厂家提供专业软件，根据软件提示绘出标准曲线，根据样本 OD值，由标准曲线查出相应浓度。

2　结果

表1　各组实验大鼠IL-6水平比较

表2　各组实验大鼠IL-10水平比较　(例)

3　结论

紫白膏能控制肛肠病术后疼痛大鼠血浆IL-6水平，并提升IL-10水平，这可能是紫白膏临床镇痛效果的机制之一。

4　讨论

现代医学认为大部分手术后患者由于组织损伤、 创口修复、 神经纤维受外源性理化因素刺激从而产生术后疼痛。疼痛亦是肛肠科常见的并发症，创伤或手术等组织损促使导致炎症介质的释放，继而外周伤害感受器被激活，伤害性信号就会通过脊髓上行传导至丘脑和大脑皮层，中枢对这部分信号进行整合后人就产生疼痛感觉[4]。而手术后创面神经纤维末梢暴露, 反复受到外界理化因素(如IL-6、IL-1β、TNF-α)的刺激，一方面炎症因子直接刺激外周产生疼痛, 另一方面,炎症因子经过一些反应后作用于脊髓背角神经元 NMDA 受体和AMPA 受体, 使脊髓背角神经元长时去极化, 其兴奋性和反应性增加导致中枢敏感化。最终引起了组织对正常刺激的反应增强和反应时间延长, 产生持久性疼痛，故术后疼痛主要的病理基础是炎症因子的刺激[5]。因此，减少炎性介质的产生可成为肛肠病术后缓解疼痛的思路之一。

IL- 6是由多种细胞分泌(如单核巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞等)产生的具有分化和促生长作用的生物活性细胞因子，本质是一种多肽物质，是炎症免疫反应的关键介质之一。炎症激活免疫细胞产生的一系列致炎细胞因子,如IL-1α、IL-1β、IL-18及TNF-α等均可进一步诱导正常细胞产生 IL-6，它可以刺激活化B细胞增殖，分泌抗体[6]，在创伤后代谢反应中起重要作用。IL-10主要由辅助性Th2细胞产生，是一种生物活性强，具有多向性的免疫抑制因子。它可以限制中性粒细胞产生,抑制中性粒细胞及巨噬细胞的趋化性，抑制单核-巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸细胞产生促炎性细胞因子如IL-1、 TNF-α及IL-6等[7],所以可以说IL-10是一种抗炎因子。作为广泛生物活性的细胞因子，白介素6和白介素10被认为是术后创伤血清中的炎性和抗炎因子的代表，可作为评价术后炎症反应强烈程度的检测指标[8]，而术后疼痛的病理基础是炎症因子刺激，所以通过检测术后大鼠血浆白介素6和白介素10的水平能在一定程度上反应术后大鼠的疼痛情况。

祖国医药外治法治疗肛肠病历史悠久，紫白膏是本院院内制剂，其临床疗效显著。但笔者认为中医药的疗效不仅仅是体现在临床效果上，中医应走向科学化道路，故通过本实验为紫白膏的临床效果提供科学的数据支持。紫白膏主要成分是大黄、紫草、石膏、白及、冰片等，全方起到清热利湿、凉血止血、消肿止痛的功效。本方以大黄、紫草为君，研究证实大黄素[9]、紫草素[10]等中药提取物对炎性介质有干预效果；白及、煅石膏共为臣，有研究[11]证实白及具有缓解术后疼痛效果，而煅石膏具有收敛生肌，多外用以治痈疽疮疡，溃不收口，金疮出血等[12]。冰片为使，研究证实其具有显著的抗炎、镇痛效果[13]。总而观之，本方整体药理具有抗炎镇痛效果，本实验研究证实了紫白膏对肛肠病术后疼痛模型大鼠IL-6的控制作用和对IL-10的提升作用，此可能为紫白膏镇痛机制之一，但遗憾的是本实验不能证实紫白膏对炎性因子产生作用的具体机理，有待后续进一步研究。

参考文献

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[13]孙晓萍，欧立娟，宓穗卿,等.冰片抗炎镇痛作用的实验研究[J].中药新药与临床药理，2007，18(5)：353-354.

*基金项目：福建省科技厅紫白膏治疗混合痔术后的临床研究(No.2011Y0033)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.01.023

文章编号：1003-8914(2016)-01-0048-03

收稿日期：(本文校对：叶玲2015-01-12)

The influence of the ZiBai Cream on IL-6 and IL-10 in plasma of rats with anorectal postoperative pain

CAI Erwei1ZHANG Qianqian2

(1.The Affiliated People's Hospital of Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian, Fuzhou 350004, China;2.Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian, Fuzhou 350000, China)

Abstract：ObjectiveTo study on the influence of the ZiBai Cream on IL-6 and IL-10 in plasma of rats with anorectal postoperative pain. MethodsThe healthy 48 SD rats, half male and half female, were randomly divided into 4 groups，namely the normal group, pure model group, vaseline group, ZiBai cream group。Except the normal group, the other rats were established anorectal diseases anorectal diseaseanorectal diseasepostoperative pain model；Except the normal group and model group, other groups of rats were given corresponding medicine dressing change, continuous administration for 3 days, 2 times a day，In the last 1 hours after administration of blood treatment。Determine the plasma IL-6 and IL-10 content in all rats。ResultsFour groups of IL-6: IL-6 levels in plasma of simple model group, vaseline group are higher than those of normal group(P<0.05), statistically significant difference; The level of IL-6 vaseline group is slightly lower than the model group(P>0.05), but no statistical difference； The ZiBai cream group IL-6 was lower than that of model group, vaseline group(P<0.05)，statistics had significant difference。Four groups of IL-10：No significant difference was found between the plasma IL-10 of the rats in the model group and the normal group(P>0.05)；Vaseline group was higher than that in the model group, but the difference was not statistically significant(P>0.05)；The ZiBai cream group IL-10 levels higher than vaseline group, model group and normal group, with significant difference in Statistics(P<0.05)。ConclusionZiBai cream can control the rat plasma IL-6 level of anorectal postoperative pain，and enhance the level of IL-10，This may be one of the mechanism of analgesic effect of ZiBai cream。

Key words：ZiBai cream；Pain； rats；IL-6；IL-10