DcR3联合GPI、RF检测对类风湿关节炎的诊断价值

王　瑶， 李　卓， 杨　彪

(1西安医学院第一附属医院检验科，西安　710077； 2西安医学院第一附属医院骨科，西安　710077； *通讯作者，E-mail：yangbiao@126.com)



DcR3联合GPI、RF检测对类风湿关节炎的诊断价值

王瑶1， 李卓1， 杨彪2*

(1西安医学院第一附属医院检验科，西安710077；2西安医学院第一附属医院骨科，西安710077；*通讯作者，E-mail：yangbiao@126.com)

摘要：目的研究类风湿性关节炎(RA)患者血清诱骗受体3(DcR3)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)和类风湿因子(RF)水平，评价三者联合检测对RA的临床诊断意义。方法收集68例RA患者的血清标本和临床资料，以55例健康体检患者作为对照组。用ELISA法检测DcR3和GPI含量，全自动特定蛋白免疫分析仪检测RF含量，分析其与临床特征的关系。采用Logistic回归分析和ROC曲线比较DcR3、GPI和RF单独检测或三者联合检测的诊断价值。结果RA患者的DcR3水平显著高于健康对照组(P﹤0.01)。DcR3水平与RA分型和关节侵蚀程度分期相关(均P﹤0.01)。DcR3、GPI和RF三者联合检测的敏感性(81.3%)和曲线下面积AUCROC(0.934)均比单独检测高，其特异性(90.4%)也处于较高水平，具有较好的诊断价值。结论DcR3、GPI和RF 三者联合检测对RA诊断具有较好的临床应用。

关键词：类风湿性关节炎；诱骗受体3；葡萄糖-6-磷酸异构酶；类风湿因子

诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)是一种新发现的可溶性诱骗受体，在自身免疫、移植免疫、肿瘤免疫和抗感染免疫中发挥重要作用[1]。近几年来，有研究表明，DcR3参与了类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的免疫紊乱过程，可作为判断RA发生、发展的重要指标[2,3]。目前临床上用于诊断RA的指标很多，常见的血清学指标如类风湿因子(rheumatoid factors, RF)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphateisomerase,GPI)等[4]已广泛用于RA的筛查、辅助诊断和疗效评价，但其存在特异性或敏感性不足的缺陷。本研究对RA患者、健康体检者血清DcR3、GPI和RF的含量进行检测，旨在探讨其单独或三者联合检测对RA的诊断价值。

1材料和方法

1.1研究对象

RA患者入选及活动性判定标准符合1987年美国风湿病学会分类标准[5],排除伴有其他自身免疫病、超敏反应疾病、移植、肿瘤、感染等免疫相关疾病患者。符合上述标准的RA患者共68例，其中男17例，女51例，年龄(46.3±14.6)岁，均为西安医学院第一附属医院住院或门诊患者。收集RA患者的骨关节X线资料，根据关节破坏程度，参照中华医学会风湿病分会的《类风湿关节炎诊断及治疗指南》[6]将其分为4期(Ⅰ-Ⅳ)。55例本院健康体检者入选标准：血常规、尿常规、肝肾功能、血脂、影像学检查均正常，排除自身免疫病、肿瘤及近期感染者；其中男13例，女42例，年龄(42.5±16.5)岁，与RA组的年龄、性别相匹配。所有研究对象均在临床干预治疗前静脉采血3 ml，3 500 r/min离心10 min，取血清于-80 ℃冻存。本研究经西安医学院第一附属医院医学伦理学委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2试剂与仪器

人DcR3 ELISA检测试剂盒(批号：DEZ36501，北京方程公司)；GPI ELISA检测试剂盒(批号：15101921，上海北加生化试剂有限公司)；RF测定试剂盒(批号：45590，西门子医学诊断产品(上海)有限公司)。Multiskan FC型酶标仪(赛默飞世尔(上海)仪器有限公司)；BNP全自动特定蛋白分析仪(西门子医学诊断产品(上海)有限公司)。

1.3血清DcR3、GPI及RF测定

DcR3、GPI为双抗体夹心ELISA法，按试剂盒说明书操作。DcR3于酶标仪450 nm波长处读取吸光度(A)值，GPI于酶标仪492 nm波长处读取吸光度(A)值，用标准曲线法求得各标本浓度；RF测定按照RF试剂盒和BNP全自动特定蛋白分析仪说明书完成操作，检测方法为散射比浊法。

1.4统计学分析

用SPSS18.0软件(SPSS公司，美国)进行。数据为非正态分布，以中位数(第25分位数，第75分位数)[M(P25，P75)]表示，两组比较采用Mann-WhitneyU检验，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验。以P﹤0.05为差异有统计学意义。用ROC曲线比较DcR3、GPI、RF单独及联合检测对RA的诊断价值。

2结果

2.1RA患者DcR3与临床参数关系

将RA患者DcR3水平结合性别、年龄、RA分型、关节侵蚀程度分期进行统计分析。结果发现，DcR3水平与RA分型和关节侵蚀程度分期相关，在不同分型(活动期和缓解期)和不同关节侵蚀程度分期(Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期)患者间差异均有统计学意义(P﹤0.01)；而在不同性别(男/女)和不同年龄(≥60岁和﹤60岁)患者间差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)。

2.2RA患者DcR3、GPI和RF含量检测结果

RA组的DcR3、GPI和RF含量均高于健康对照组，差异有统计学意义(P﹤0.01，见表2)。

表1RA患者血清DcR3含量与临床参数关系

Table 1Relationship between serum DcR3 levels and clinical parameters in RA patients

临床参数nDcR3(pg/ml)统计值P性别Z=-0.030.99 男171784.2(1174.3,2209.5) 女511861.7(1309.2,2387.4)年龄(岁)Z=-0.880.38 ≥60201684.5(1046.2,2025.3) ﹤60481798.6(1265.4,2098.7)RA分型Z=-6.67﹤0.01 活动期391989.2(1423.3,2343.1) 缓解期291323.4(898.6,1876.3)关节侵蚀程度分期H=55.600.02 Ⅰ期191209.2(783.6,1623.7) Ⅱ期251739.4(1023.6,2021.4) Ⅲ-Ⅳ期241996.3(1209.3,2301.5)

表2RA患者DcR3、GPI和RF含量检测结果

Table 2Levels of DcR3, GPI and RF in RA patients

组别DcR3(pg/ml)GPI(mg/L)RF(IU/ml)健康对照组645.1(354.2,978.3)0.14(0.33,2.65)2.4(1.2,10.4)RA组1896.2(1235.2,2353.7)5.68(2.53,10.64)23.1(10.7,30.2) Z-8.29-8.68-5.40 P﹤0.01﹤0.01﹤0.01

2.3DcR3、GPI和RF单独或联合检测对RA诊断价值

以RA患者为病例组，健康体检者为对照组，绘制ROC曲线，见图1。三者联合诊断RA采用Logistic回归分析(见表3)，以此回归模型计算出各组样本预测概率。三者联合检测的的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.934(95%CI 0.884-0.983)，分别高于DcR3的0.796(95%CI 0.707-0.885)、GPI的0.661(95%CI 0.553-0.769)和RF的0.873(95%CI 0.802-0.944)。

对于DcR3和三者联合诊断预测概率，分别取尤登指数(敏感性+特异性-1)最高时的值为诊断临界点(cut off值)。经计算，DcR3为847.5 pg/ml；三者联合诊断预测概率cut off值为0.58。分别以DcR3≥847.5 pg/ml、GPI>0.33 mg/L和RF>24.3 IU/ml、三者联合诊断预测概率≥0.58为阳性判断标准，得出各检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值，结果表4。结果显示，RF单独检测对RA诊断的特异性较高，但敏感性较DcR3低；DcR3敏感性高于GPI和RF，但特异性较GPI和RF差。三者联合检测的敏感性和AUCROC均高于单独检测，其特异性也处于较高水平。

图1　DcR3、GPI和RF诊断RA的ROC曲线Figure 1　ROC curve of RA diagnosed by DcR3, GPI and RF

表3DcR3、GPI和RF三种指标诊断RA的Logistic回归结果

Table 3Logistic regression results of DcR3,GPI and RF for RA

指标回归系数标准误Waldχ2值PDcR30.5460.07623.24﹤0.01GPI0.4610.11318.970.021RF0.0150.0199.420.013常量-3.521.2435.79﹤0.01

表4DcR3、GPI和RF对RA诊断效能比较(%)

Table 4Diagnostic efficacy of DcR3, GPI and RA for RA (%)

指标敏感性特异性阳性预测值阴性预测值DcR373.765.484.163.6GPI57.676.780.659.8RF67.595.694.378.1三者联合81.390.491.582.8

3讨论

DcR3最早是1998年由Pitti等[7]发现的与肿瘤坏死因子受体(TNFR)高度同源的凋亡抑制因子，其氨基酸序列中缺乏跨膜结构，是一种分泌性蛋白。DcR3基因定位于染色体20q13.3，全长11.14 kb，由271个氨基酸残基组成。DcR3能竞争性结合Fas配体(Fas ligand,FasL)、肿瘤坏死因子配体超家族成员14抗体(LIGHT)和肿瘤坏死因子样配体1A(TL1A)，在调节T细胞活化、增殖、分化以及凋亡中起重要作用[8]。研究表明，自身免疫性疾病患者血液中的DcR3水平高于正常人群[9]，在RA患者的血液和关节液中，DcR3含量的表达明显升高[10]。

GPI最早于1968年因为非球形红细胞溶血性贫血而得以认识，是一种多功能分子，于真核生物、细菌和原核生物以及人体各组织细胞中广泛存在[11]。在RA患者中，GPI可通过内皮细胞或者滑液中的可溶性蛋白递呈给免疫系统，引起患者的免疫系统发生紊乱[12]。GPI作为一种新型RA标志物，在其他疾病及正常人群中的含量很低，但在RA患者血清中含量显著增高。

RF是一种由感染因子引起体内产生以变性IgG(属IgM)为靶抗原的自身抗体(抗抗体)，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中[13]。RF目前已成为RA疾病筛查的最重要指标之一。

一些常见的RA疾病筛查指标，如：抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗角蛋白抗体、GPI和RF 等，其彼此之间的联合诊断目前早已有报道[14，15]。但DcR3作为一种新发现的RA疾病筛查辅助指标，与其他指标联合检测在RA中的诊断价值方面研究较少。本研究将DcR3联合GPI和RF检测，评价三者联合检测对RA的临床诊断意义，结果发现三者联合检测对RA诊断具有较好的临床应用。

此外，RA患者DcR3含量高于健康对照组，且RA活动期高于RA缓解期，Ⅲ-Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期，说明DcR3含量的表达随病程的加重而升高，DcR3对RA的诊断具有一定的价值。DcR3单独诊断RA的敏感性较高，特异性较低。DcR3、GPI和RF联合检测可使诊断效能处于较高水平。然而，本研究的样本量较小，研究结论还有待更大样本的临床研究和病例随访加以验证。

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作者简介：王瑶，女，1984-04生，硕士，主管技师，讲师，E-mail：95244556@qq.com

收稿日期：2016-04-06

中图分类号：R593.22

文献标志码：A

文章编号：1007-6611(2016)07-0614-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.07.008

Diagnostic value of the detection of DcR3 combined with glucose-6-phosphateisomerase and rheumatoid factors for rheumatoid arthritis

WANG Yao1, LI Zhuo1，YANG Biao2*

(1DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,China;2DepartmentofOrthopaedics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:yangbiao@126.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate the levels of serum decoy receptor 3(DcR3),glucose-6-phosphateisomerase(GPI)and rheumatoid factors(RF)in rheumatoid arthritis(RA)patients,and to evaluate the clinical significance of combined detection.MethodsThe serum samples and clinical data of 68 RA patients were collected,and 55 healthy subjects were selected as the controls.The DcR3 and GPI levels were detected using ELISA method,and its correlation with clinical features was analyzed.The diagnostic values of the detection of DcR3,GPI and RF alone or their combination in RA were investigated by Logistic regression analysis and ROC curve.ResultsThe DcR3 level in RA patients was significantly higher than those in healthy controls(P﹤0.01).The DcR3 level was correlated with the RA typing and the joint erosion(P﹤0.01).The sensitivity(81.3%) and area under the curve(AUCROC)(0.934)of the combined detection of DcR3, GPI and RF for RA were higher than that of their single detection, and its specificity was 90.4%.ConclusionThe combined detection of DcR3, GPI and RF has preferable value in the diagnosis of RA.

Key words:rheumatoid arthritis;decoy receptor 3;glucose-6-phosphateisomerase;rheumatoid factors