不育患者精子DNA完整性与精液参数的相关性探析

李林+吴励梅+罗一平+连蔚+李彩英

【摘要】 目的 分析探讨不育患者精子DNA完整性与精液参数的相关性， 为临床治疗男性不育提供参考依据。方法 50例男性不育患者精液标本作为实验组， 50例健康体检的正常生育男性精液标本作为对照组， 两组均进行精液常规检查、精子形态分析和精子DNA完整性检测， 对比分析两组的精子浓度、精子存活率、前向运动精子（PR）百分率及精子DNA碎片化指数（DFI）。结果 实验组的精子浓度、精子存活率、PR百分率均低于对照组， 精子DFI高于对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 不育患者的精液参数和正常生育者存在差异， 精子DNA完整性与精液参数具有不同的相关性。

【关键词】 不育；精子DNA完整性；精液参数；相关性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.18.073

男性不育是指育龄夫妇同居1年， 未采取任何避孕措施， 因男方原因造成不育的现象称为男性不育[1]， 相关的临床研究资料表明， 精子DNA完整性和男性的生育能力具有密切的关系[2]。本文为进一步研究不育患者精子DNA 完整性和精液参数的相关性， 特选择了本院专科门诊就诊的不育患者和正常生育者各50例标本作为本次研究的实验组和对照组， 两组均进行精子DNA完整性检测和精子形态分析， 最后分析其精子浓度、精子存活率、PR百分率及精子DFI来得出研究结论， 现报告整理完毕， 具体陈述如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择本院生殖健康与不孕科2013年2月～2014年1月就诊的男性不育患者50例的精液标本作为本次研究的实验组， 另选择同时段进行健康体检的正常生育的男性50例精液标本作为本次研究的对照组。实验组年龄25～45岁， 平均年龄（26.07±7.26）岁；不育时间2～6年， 平均不育时间（3.09±2.32）年；精液体积（2.32±0.15）ml；其中包括10例少精症患者（精子浓度<15×106/ml）、21例弱精症患者（PR%<32%）及19例白细胞精子症患者[白细胞计数（WBC）>1×106/ml]。对照组年龄25～44岁， 平均年龄（27.54±6.37）岁。经确认， 参与本次研究的所有患者均在婚后同居1年以上、夫妻性生活正常、未采取避孕措施而未育， 所有患者均符合本次研究的基本条件。两组年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法

1. 2. 1 精液标本采集 所有受检者检查前必须禁欲3～7 d， 要求在实验室附近取精， 采用手淫法取精液， 全部收集于干燥无菌取精杯中， 且精液量≥1.5 ml， 放置37℃恒温箱内， 等待其完全液化。

1. 2. 2 精液常规及精子形态分析 严格按照《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》的标准进行精液分析。采用一次性精子分析玻片法， 人工镜检法分析精子浓度和活动率；采取0.5%伊红染色法分析精子存活率；精液白细胞过氧化酶（正甲苯胺法）染色法检测精液中的白细胞数；改良巴氏染色法染色， 并严格采取精子形态学标准对精子进行判断、分类计算形态正常精子百分率。

1. 2. 3 精子DNA完整性检测 采用精子染色质扩散法（SCD）检测精子核DNA完整性， 检测试剂盒由深圳华康生物公司提供，方法：用精子稀释液将精子密度调至（5～10）×106/ml， 再吸取60 μl上述稀释液加到低熔点琼脂糖管中， 混匀取出30 μl滴加到水平位置的预处理载玻片上， 盖上盖玻片， 载玻片置于2～8℃冰箱4 min， 从冰箱取出载玻片， 轻轻滑拉移走盖玻片。迅速将预处理载玻片浸入变性液中7 min， 在蒸馏水浸泡5 s；然后取出载玻片使其竖立， 用滤纸吸干玻片表面上水珠， 浸入裂解液中准确反应20 min， 反应毕浸入洗涤液3 min， 依次浸入70%、90%、无水乙醇溶液中脱水各2 min， 载玻片自然晾干。 用瑞氏染色剂进行染色， 风干载玻片， 待完全干燥后在常规显微镜下观察， 计数400个精子， 统计小晕环、无晕环和退化的异常精子百分率， 精子DNA完整性=1-DFI。

1. 3 观察指标 对两组标本的精子浓度、精子存活率、PR百分率及精子DFI进行观察， 以探讨不育患者精子DNA完整性与精液参数的相关性。

1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

实验组的精子浓度、精子存活率、PR百分率均低于对照组， 精子DFI高于对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

遗传物质正确传递给后代需要以精子及卵子DNA保持完整为前提， 精子DNA 的完整性在受精过程和胚胎发育中扮演着重要的角色。多年的临床实践经验表明[3]， 自然生育、辅助生殖技术治疗结局与精子质量的优劣具有密切的联系， 精子DNA的损伤会给辅助生殖技术治疗结局、自然生育造成不良影响， 且其损伤与低受精率、低着床率及复发性流产具有密切的关系。目前， 临床上关于DNA的损伤机制尚未有明确的阐述， 但多认为精子DNA的损伤和生精过程中细胞的凋亡、精子运输过程中氧自由基的影响、精子染色质包装异常、细胞凋亡与鱼精蛋白异常有关， 且相关的临床研究资料表明[4-6]， 低水平的氧自由基会影响精子高激活运动， 进而导致精子DNA损伤增加。相关的临床资料表明[7， 8]， 男性精子DFI如果在30%以上， 就会降低正常妊娠的可能性， 精子细胞核内的DFI含量一般经历着从少到多的过程， DFI的分布含量较少， 精子DNA蛋白编码区基因就会在精浆中有害因素的影响下发生损坏， 精子功能在此影响下也会受到损伤， 且精子染色质中的DFI也会影响精子的稳定性[9， 10]， 导致体外受精（IVF）过程中雄性原核的形成受阻， 降低受精率。

本研究统计结果表明， 实验组的精子浓度、精子存活率、PR百分率均低于对照组， 精子DFI高于对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。

综上所述， 不育患者的精液参数和精子活力正常者存在差异， 精子DNA 完整性与精液参数具有不同的相关性。

参考文献

[1] 焦瑞宝， 唐吉斌， 冯恒孝， 等.不育患者精子DNA完整性与精液参数关系的临床研究.安徽医学， 2013， 34（6）：804-806.

[2] 龚道元， 李子萍， 庄锡伟， 等.男性不育症患者精子DNA 完整性与精液分析参数相关性研究.国际检验医学杂志， 2012， 33（19）：2321-2322， 2324.

[3] 蔡成云， 徐振山， 宋礼华， 等.不育症患者精子DNA 完整性与精液相关参数的研究.蚌埠医学院学报， 2014， 25（6）：798-801.

[4] 马强， 申琴， 焦海燕， 等.精子DNA完整性和hOGG1 rs1052133 与原发性男性不育的相关性研究.中国男科学杂志， 2015， 29（9）： 18-23.

[5] 段永刚， 张琼丽， 刘大伟， 等.精浆弹性硬蛋白酶、IL-6、IL-23 在男性不育患者精浆中的表达及其临床意义. 中华临床医师杂志（电子版）， 2012， 6（24）：8103-8107.

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[7] 马莉， 马芳芳， 王厚照. 福建地区5680例男性不育患者精子参数和精子DNA完整性分析. 中国优生与遗传杂志， 2015（9）： 100-101.

[8] 曾兰， 叶飞， 李运星， 等. 精子 DNA 完整性与精液常规参数相关性分析. 中国计划生育和妇产科， 2014（4）：47-50.

[9] 孙静波， 姜宏， 何瑞冰. 精子DNA完整性与精液参数的相关性研究. 中国男科学杂志， 2010， 24（4）：26-29.

[10] 焦瑞宝， 冯恒孝， 唐吉斌， 等. 不育患者精液的氧化应激对精子DNA完整性等参数的影响. 检验医学， 2013， 28（6）：487-491.

[收稿日期：2016-05-16]