间接免疫荧光法检测丙型肝炎抗体阳性献血者血清自身抗体谱出现特征

刘鹏，陈红，徐炜

(1、九江市中心血站，江西　九江332000；2、九江学院临床医学院附属医院，江西　九江332000)



·检验与临床·

间接免疫荧光法检测丙型肝炎抗体阳性献血者血清自身抗体谱出现特征

刘鹏1，陈红1，徐炜2

(1、九江市中心血站，江西九江332000；2、九江学院临床医学院附属医院，江西九江332000)

摘要：目的了解丙型肝炎抗体阳性献血者自身抗体出现特征。方法收集2014年1月1日至2015年6月30日九江市中心血站HCV抗体筛查阳性献血者108例，另选取同期HCV抗体筛查阴性献血者30例作为对照组。采用间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）、抗线粒体抗体（AMA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗肝肾微粒体抗体（LKM），抗胃壁细胞抗体（PCA）检测，分析自身抗体分布特征。结果丙型肝炎抗体阳性献血者自身抗体IgG阳性率为46.3%（50/108），高于对照组的3.33%（1/ 30），差异有显著性统计学意义（P<0.01）；不同自身抗体可在同一丙型肝炎抗体阳性献血者中检出，但以单一抗体出现为主。五种自身抗体阳性率有显著差异（P<0.01），其中ANA阳性率最高30.6%（33/108），其次为SMA13.9%（15/108）、AMA11.1% （12/108）及LKM4.6%（5/108）、PCA1.9%(2/108)。结论ANA和SMA是丙型肝炎献血者最常见的自身抗体；抗体出现可呈多重性。

关键词：丙型肝炎；自身抗体；抗核抗体；抗平滑肌抗体

近年来，关于丙型肝炎患者体内能检测到自身抗体的报道越来越多，为了解丙型肝炎抗体阳性献血者出现自身抗体特征，本实验采用间接免疫荧光法对108例血站HCV抗体筛查阳性献血者血清同时进行5种常见的自身抗体的检测，包括：抗核抗体（Antinuclear antibodies，ANA）、抗线粒体抗体（Anti-mitochondrial antibody，AMA）、抗肝肾微粒体抗体(Anti-liver-kidney microsomal antibody，LKM)、抗平滑肌抗体（Anti-smooth muscle antibody，SMA）、抗胃壁细胞抗体（Anti-parietal cell antibody，PCA），同时选取30例血站HCV抗体筛查阴生献血者血清作为对照组。了解慢性丙型肝炎献血者自身抗体出现情况，为今后临床医生制定有效治疗方案提供依据。

1　对象与方法

1.1对象本研究纳入2014年1月1日至2015 年6月30日在九江市中心血站参加无偿献血的丙型肝炎抗体筛查阳性献血者108例，其中男58例，女50例，年龄20~54岁，平均（37±17）岁。另选取同期HCV抗体筛查阴性献血者30例作为对照组，年龄18~48岁，平均（33±15）岁；本研究涉及的献血资料均经过献血者知情同意。

1.2方法

1.2.1自身抗体检测留取丙型肝炎抗体筛查阳性

108例和阴性30例献血者血清于-80℃保存，统一时间检测。采用德国殴蒙间接免疫荧光试剂盒检测ANA、SMA、AMA、LKM、PCA。严格按说明书操作，采用Olympus BX-51荧光显微镜进行观察。

1.2.1统计学分析采用SPSS 18.0统计软件进行χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著性统计学意义。

2　结果

2.1自身抗体出现特征108例丙型肝炎抗体阳性献血者有50例检出自身抗体阳性，阳性率46.3%，对照组有1例检出自身抗体阳性，阳性率为3.33%，两组比较阳性率有显著差异（P<0.01）。丙型肝炎抗体阳性献血者中有36例1种抗体阳性，阳性率为33.3%；14例同时出现多种抗体阳性，其中11例呈现出2种抗体阳性，阳性率为10.2%，3例3种抗体阳性，阳性率为2.8%。因此，实际检测出阳性抗体数为67（图1）。3组进行χ2检验显示差异有统计学意义（P<0.05）。丙型肝炎抗体阳性献血者自身抗体主要以1种抗体为主，2种同时阳性可见，3种及以上同时阳性少见。

2.25种自身抗体阳性分布特征本研究对67株自身抗体阳性分布及构成比进行了分析（表1），5种自身抗体出现的阳性率差异有显著性统计学意义（P<0.01）。组内比较表明：ANA阳性率高于SMA（P<0.01），差异有显著性统计学意义；而SMA阳性率高于AMA、AMA高于PCA、PCA高于LKM，但差异均无统计学意义（χ2=0.417，P=0.518、χ2= 3.301，P=0.069、χ2=1.357，P=0.244），由此可见，ANA阳性率最高，而LKM阳性率最低。

图1　自身抗体阳性类型

表1　67株自身抗体阳性分布及构成比

2.3抗体滴度特征ANA阳性样本中有30例滴度≥1：320，仅3例为1：100，高滴度阳性率达到90%。其他自身抗体滴度均为1：100，因此，除ANA以高滴度为主，其余自身抗体以低滴度状态出现（表2）。

表2　ANA滴度分布

3　讨论

丙型肝炎患者大多数体内会产生自身抗体，特别是自身免疫性肝病相关的自身抗体，无论是儿童还是成人[1-3]。以往研究大多数评估慢性丙型肝炎患者自身抗体的阳性率，本文首次评估具有代表性的无偿献血者人群丙型肝炎抗体阳性自身抗体出现特征，采用德国欧蒙自身抗体谱间接免疫荧光法试剂，检测献血者血清ANA、SMA、AMA、PCA及LKM，分析这些抗体在丙型肝炎抗体阳性献血者中出现阳性率及分布特征。

文献报道自身抗体在慢性丙型肝炎成人体内出现率70%以上，这些自身抗体主要包括抗核抗体、甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺抗体、胰岛素相关抗体以及抗核小体抗体等[4-8]。本研究选择的抗体检测结果显示，108例丙型肝炎抗体阳性献血者有50例检出自身抗体阳性，阳性率46.3%，与文献报道有所不同，这与人群选择及检测项目有一定的关系。

本研究结果显示，丙型肝炎抗体阳性献血者中有36例1种抗体阳性，阳性率为33.3%；14例同时出现多种抗体阳性，其中11例呈现出2种抗体阳性，阳性率为10.2%。因此丙型肝炎抗体阳性献血者自身抗体主要以1种抗体为主，2种同时阳性可见，3种及以上同时阳性少见，ANA和AMA阳性率较高，而LKM阳性率最低，且自身抗体除ANA以高滴度出现为主外，其余自身抗体呈现低滴度趋势。但阳性率显著高于对照组，提示HCV感染易引起自身免疫反应，使感染者出现多种自身抗体，反映体内免疫功能已出现紊乱，同时提示也可能有利于病毒的复制。

ANA是对细胞核抗原具有不同特异性的自身抗体的总称，对混合结缔组织病，及其他风湿性疾病的诊断具有重要意义。AMA是对原发性胆汁性肝硬化诊断具有高度灵敏度和特异性指标[9]。现已有研究表明，引起自身免疫是HCV致病的一个重要机制，如AMA、LKM等可加重肝细胞损伤，诱发自身免疫性肝炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化等自身免疫性疾病，一般情况下，丙型肝炎与AIH较容易鉴别，如出现病毒感染和自身免疫现象共存时鉴别经常比较困难，由于丙型肝炎与AIH其治疗方案完全不同[10，11]，因此，检测AIH相关自身抗体对于肝脏疾病的诊断及治疗具有重要作用[12-15]。邓纪望等[16]也指出，AIH患者血清中ANA的阳性率高于丙型肝炎患者，且AIH患者ANA以高滴度为主，丙型肝炎患者则以低滴度抗体为主。因此，对HCV抗体阳性献血者进行自身抗体检测及对抗体分布和滴度特征的了解至关重要，为今后临床制定有效治疗方案提供依据。

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中图分类号：R512.6+3，R446.62

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0360-03

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.030

(收稿日期2016-01-19；修回日期2016-03-21)