白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织中TNF-α和IL-6水平的影响

王保华

河南太康县人民医院　太康　461400



白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织中TNF-α和IL-6水平的影响

王保华

河南太康县人民医院太康461400

【摘要】目的探讨白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的影响。方法健康Wistar大鼠48只，随机均分为假手术组、缺血再灌注损伤组、白藜芦醇50 mg·kg-1组和白藜芦醇25 mg·kg-1组，每组12只，采用腹主动脉缺血法制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型，然后采用ELISA法检测各组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平。结果白藜芦醇50 mg·kg-1组和白藜芦醇25 mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注损伤组，差异有统计学意义(P<0.05)。白藜芦醇50 mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平低于白藜芦醇25 mg·kg-1组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇能够降低脊髓缺血再灌注损伤组织中TNF-α和IL-6水平，改善机体的免疫功能，进而减轻脊髓组织的缺血再灌注损伤。

【关键词】白藜芦醇；脊髓；缺血再灌注损伤；肿瘤坏死因子-α；白介素-6

脊髓由于外伤侵犯、手术或脊髓压迫性疾病的影响，可能会出现缺血再灌注损伤[1]。目前，关于脊髓缺血再灌注损伤的机制及其治疗是该领域研究的热点问题。为寻找更好的脊髓缺血再灌注损伤抑制对抗药物，本研究利用大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型进行研究，并用白藜芦醇进行干预，观察该药对该模型免疫功能的影响，以期找到减轻脊髓缺血再灌注损伤的药物应用于临床。

1材料与方法

1.1实验对象选择清洁级健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，体质量300～400 g，购自河南省实验动物中心，动物许可证号SCXK(豫)2014-0001。

1.2试剂与药品白藜芦醇(美国Sigma公司)；肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-6(interleukin-6，IL-6)一抗、二抗及相关试剂盒均(福州迈新生物工程有限公司)。

1.4分组及给药方法健康Wistar大鼠48只随机均分为4组：假手术组、缺血再灌注损伤组、白藜芦醇50 mg·kg-1组和白藜芦醇25 mg·kg-1组，每组12只。各组处理方法：白藜芦醇50 mg·kg-1组和白藜芦醇25 mg·kg-1组大鼠于造模前分别给予白藜芦醇50 mg·kg-1+0.85%的NaCl溶液和25 mg·kg-1+0.85%的NaCl溶液；假手术组和缺血再灌注损伤组大鼠均给予同体积0.85%的NaCl溶液，各给药组大鼠均按10 mL·kg-1给药，连用10 d。

1.5模型制备脊髓缺血再灌注损伤模型制备参考文献[2]的改良腹主动脉缺血法，其中缺血时间45 min，再灌注时间8 h，假手术组大鼠仅行腹主动脉分离术，实验处理完毕在麻醉条件下处死大鼠并于第3～5腰椎处取出一定量的脊髓组织放置于-80 ℃冰箱待测。

1.6TNF-α和IL-6水平检测用0.85%的NaCl溶液将所取脊髓组织制成匀浆，低温(4 ℃)条件下4 000 rmin-1离心10 min，取上清液，采用嘌呤氧化酶法检测SOD水平，采用硫代戊巴比妥法检测MDA水平，总蛋白量采用考马斯亮蓝法测定。

2结果

缺血再灌注损伤组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)。白藜芦醇50 mg·kg-1组和白藜芦醇25 mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注损伤组，差异有统计学意义(P<0.05)。白藜芦醇50 mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平低于白藜芦醇50 mg·kg-1组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　各组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平比较

注：与假手术组比较，△P<0.05；与缺血再灌注损伤组比较，*P<0.05；与白藜芦醇50 mg·kg-1组比较，#P<0.05

3讨论

缺血再灌注损伤是一种组织或器官因外伤、手术或疾病导致缺血，经过恢复性处理后，其损伤程度进一步加重的现象，其发生可能受机体自由基水平失衡、免疫状态改变、细胞凋亡机制失衡、炎症反应等生物学行为的影响。脊髓缺血再灌注损伤与机体的自由基的生成与清除失衡、炎症反应、细胞凋亡、能量代谢障碍等有关[2]。本研究主要通过探讨炎症反应在脊髓缺血再灌注损伤发生发展过程中的作用，并进一步证实白藜芦醇在脊髓缺血再灌注损伤过程中对损伤的干预和减轻作用。脊髓发生缺血再灌注损伤后，机体通过TNF-α和IL-6等炎性细胞因子诱发的级联反应促进细胞凋亡的发生、炎症反应的加重以及脊髓组织水肿的加重，进而导致脊髓损伤的加重[3]。本研究结果证实，缺血再灌注损伤组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)，进一步印证了该理论。白藜芦醇是具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗凋亡等作用的多酚类化合物，已被证实在多种组织或器官的缺血再灌注损伤过程中发挥对抗作用[4]。本文结果还显示，白藜芦醇50 mg·kg-1组和白藜芦醇25 mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平均低于缺血再灌注损伤组，差异有统计学意义(P<0.05)。白藜芦醇50 mg·kg-1组大鼠脊髓组织中TNF-α和IL-6水平低于白藜芦醇50 mg·kg-1组，差异有统计学意义(P<0.05)，提示白藜芦醇在脊髓缺血再灌注损伤过程中能够减少促炎性细胞因子的分泌合成，减轻炎症反应的进展，进而减轻脊髓组织缺血再灌注损伤，且这种作用具有一定的剂量依赖性。

4参考文献

[1]关鑫,董明岩,于洋,等.缺血再灌注损伤大鼠脊髓神经元细胞凋亡、脊髓组织中内质网应激经典标志物的表达变化[J].山东医药,2015,55(31):27-29.

[2]张铨,陈明华,吴俊山,等.缺血后处理对鼠脊髓缺血-再灌注损伤中MDA和SOD的影响[J].中国实用神经疾病杂志,2014,17(22):89-90.

[3]余萍萍,王莉,唐凡人 ,等.白藜芦醇对大鼠脑缺血/再灌注损伤后星形胶质细胞活化的影响[J].中国药理学通报,2015,31(9):1 228-1 233.

[4]沈佳佳,黄瑛,祁炜罡,等.白藜芦醇通过促进自噬减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究[J].中国临床医学,2015,22(2):151-155.

(收稿 2016-01-13)

【中图分类号】R-332

【文献标识码】B

【文章编号】1673-5110(2016)12-0100-02