复方消银膏治疗银屑病疗效及安全性研究

苏姗姗，张明瑞，贺海英，范丹丹，李杨，李福秋（吉林大学第二医院，长春　130000）



·研究报告·

复方消银膏治疗银屑病疗效及安全性研究

苏姗姗，张明瑞，贺海英，范丹丹，李杨，李福秋
（吉林大学第二医院，长春130000）

摘要：目的观察复方消银膏治疗银屑病动物模型的疗效及其安全性。方法外用咪喹莫特刺激小鼠鼠背产生银屑病模型，外用复方消银膏A（消银膏：丙酸氯倍他索=1：1）、复方消银膏B（消银膏：丙酸氯倍他索=1：2）及对照药物治疗，8 d后观察各组疗效；对大鼠进行皮肤刺激试验、皮肤过敏试验、急性毒性试验及长期毒性试验。结果 复方消银膏A、复方消银膏B均能明显改善小鼠银屑病病情，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）；对完整、破损皮肤均无刺激性、急慢性毒性，不产生致敏作用。结论复方消银膏A、复方消银膏B治疗银屑病疗效确切且相当，且安全性较高。

关键词：复方消银膏；银屑病；疗效；安全性

银屑病发生于体表，主要表现为红斑、鳞屑，有干燥、瘙痒等不适感，若皮损面积较大，则会全身皮肤紧绷，到冬季甚至出现皲裂、疼痛，严重者甚至会活动受限，此时内服药物同时配合外用药的治疗可以很好的缓解症状。外用药能使药物直接、持久地发挥作用，同时不良反应小、使用方便。本实验对复方消银膏治疗银屑病的疗效及安全性进行了研究，为以后临床用药提供依据，现报道如下。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1药物消银膏，由长春中医药大学附属医院提供，吉药制字：Z20130112。丙酸氯倍他索乳膏，由遂成药业股份有限公司研制，国药准字：H20053852。复方消银膏A、复方消银膏B由消银膏与丙酸氯倍他索按1：1、1：2配制而成。咪喹莫特软膏购自四川明欣药业有限责任公司（国药准字：H20030128）。2，4-二硝基氯苯购自上海卡迈舒生物科技有限公司，使用前将其配成1%的致敏浓度和0.1%的激发浓度。

1.1.2动物SPF级Wistar健康大鼠，雌雄各半，体质量（220±20）g，BABL/c小鼠，雌性，6～8 w，体质量（20±2）g，均由辽宁长生生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（辽）20150001。饲养环境：动物房保持干燥、通风、室温22～25℃，湿度50%～70%，自由取食、饮水。定期更换垫料、饲料。

1.1.3试剂与器材二甲苯、电子天平及组织剪等由吉林大学公共卫生学院动物实验室提供。

1.2试验方法

1.2.1动物准备所有动物适应环境3 d，给药前24 h将鼠背部脊柱两侧被毛脱毛（面积应约为总面积的10%）［1］，注意不可损伤表皮，每周脱毛1次。

1.2.2药效学研究48只小鼠，随机分为6组，即空白组、模型组、丙酸氯倍他索组和消银膏组，复方消银膏A组和复方消银膏B组。除空白组外均外用咪喹莫特刺激银屑病模型，并外用相应药膏治疗，8 d后观察小鼠的一般状态及皮损变化，进行PASI评分［2］及皮肤组织病理检查。

1.2.3皮肤刺激性试验32只大鼠，雌雄各半，随机分为复方消银膏A、复方消银膏B完整和破损皮肤各2组（破损皮肤即用刀片在完整皮肤上划出“#”划痕，渗血为度）。左侧外用对应药膏0.5 g，右侧自体对照。6 h后用温水清洗干净药物，于清除药膏后1 h、24 h、48 h及72 h观察局部有无红斑和水肿反应及恢复情况。按皮肤刺激反应评分标准评分［1］，计算平均分值，进行刺激强度评价。

1.2.4皮肤过敏性试验32只大鼠，雌雄各半，随机分为复方消银膏A组、复方消银膏B组、空白对照组（凡士林）、阳性对照组（2，4-二硝基氯苯）。左侧外用相应药膏及致敏物0.2g或mL，第1，7，14天各重复1次。第28天将0.2g相应药膏及激发物0.2mL均匀涂于鼠背右侧脱毛区，6 h后温水洗净，即刻（0 h）、24 h、48 h、72 h观察皮肤及全身过敏反应。按皮肤过敏反应评分标准进行评分［1］，计算平均分值。

1.2.5急性毒性试验104只大鼠，雌雄各半，随机均分为13组［对照组与复方消银膏A、复方消银膏B完整、破损皮肤各3个剂量（0.5 g、1.0 g、2.0 g）］。6 h涂药1次，24 h后用温水洗净，连续观察14 d，每日观察并记录动物体质量，局部及全身中毒情况和死亡情况。对于死亡动物、濒临死亡的动物应进行解剖、肉眼观察及病理学检查。

1.2.6长期毒性试验50只大鼠，雌雄各半，随机分为5组（对照组与复方消银A、复方消银膏B完整、破损皮肤）。每组给予相应药物2.0 g，1次/d，连续4周。停药后每组剩余一半继续饲养观察2周，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。恢复期除不外用药物外，观察指标和给药期完全相同。均需每日称质量，观察并记录大鼠行为活动、皮肤及全身过敏情况及动物死亡情况并对其内脏（心、肝、肾、脾、肺）及皮肤进行病理检查。

1.3统计学分析均采用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验及方差分析。

2　结果

2.1药效学实验结果空白组小鼠一般状态良好，皮肤光滑，未见红斑、鳞屑，见图1。模型组可见全部皮损明显的红斑、厚层鳞屑，明显隆起于表面，见图2。丙酸氯倍他索组、复方消银膏A及复方消银膏B组皮损略高于正常表面，呈现淡红色或红色，部分皮损覆有鳞屑，但以细屑为主，见图3～5。消银膏组部分或完全鳞屑，中度隆起，见图6。各组小鼠皮损PASI评分如表1所示，各治疗组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05），复方消银膏A、复方消银膏B与丙酸氯倍他索组相比差异有统计学意义（P＜0.05），复方消银膏A、复方消银膏B与消银膏组比较差异有统计学意义（P＜0.05），复方消银A药膏与复方消银B药膏之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1　各组小鼠PASI评分　（n=8）

图1　空白组小鼠大体照片　

图2　模型组小鼠大体照片

图3　丙酸氯倍他索组小鼠大体照片

图4　复方消银膏A组小鼠大体照片

图5　复方消银膏B组小鼠大体照片

图6　消银膏组小鼠大体照片

2.2皮肤刺激试验结果复方消银膏A、复方消银膏B在完整皮肤中均未见红斑和水肿，与自体右侧对照皮肤相同，刺激强度低于0.5分，判定为无刺激反应。破损皮肤刺激试验中除在划痕处有结痂外，其余部位未见红斑及水肿，刺激强度低于0.5分，判定为无刺激反应。

2.3皮肤过敏试验结果阳性对照组大鼠均出现轻-中度红斑，致敏发生率为100%，致敏分级为Ⅴ级，属于极强度致敏，见图7。空白对照组及复方消银膏A、复方消银膏B组均未出现红斑、水肿及全身性过敏反应，致敏率为0%，致敏分级为Ⅰ级，属于弱致敏，见图8。

图7　过敏试验阴性结果　

图8　过敏试验阳性对照

2.4急性毒性试验结果各组大鼠一般状态良好，均未出现全身中毒表现和死亡情况，体质量稳定增长，与对照组差异无统计学意义。完整皮肤组大鼠皮肤均无红斑、水肿，破损皮肤组大鼠皮肤划痕处2 d开始结痂，7 d部分痂皮脱落，14 d后痂皮基本完全脱落，其余皮肤未见红肿，与对照组比较差异无统计学意义。

2.5慢性毒性实验结果复方消银膏A、复方消银膏B组在给药期和恢复期均无大鼠死亡，体质量增长与对照组差异无统计学意义，各组大鼠均无明显异常行为活动，大小便性状正常，停药后也未出现药物延迟性毒性反应。解剖后肉眼观察脏器的形态、位置、色泽与对照组相似，病理检查各脏器及皮肤无异常改变。

3　讨论

银屑病俗称“牛皮癣”，中医称“白疕”，是一种以表皮过度增生和真皮慢性炎症反应为特征的常见皮肤病［3］。由于银屑病发病原因不明，发病机制复杂，治愈率低，易复发，严重影响了患者的身心健康。西医学认为，银屑病的病因主要为感染、遗传、免疫、代谢等因素。中医认为“血热”、“血虚”、“血燥”为本病的基本病因，由气郁不畅、郁而化热、热入血络，或久病阴血不足、化燥生风、外发肌肤所致［4］。一般采用清热解毒，滋阴凉血，祛风止痒法治疗［5］。外用药是治疗银屑病不可缺少的一部分，中药外治在产生药效同时可避免西药产生的不良反应，即使有不良反应也较少较轻，且使用方面、价格低廉。

咪喹莫特主要通过激活Toll样受体，引起多种细胞因子及趋化因子等的生成及分泌，从而引起一系列炎症反应及免疫损伤，局部外用于小鼠皮肤，可诱导其产生银屑病样改变［6］。一般用药1～3 d即出现红斑、细小鳞屑及褶皱，6～8 d银屑病症状最严重［7］。因此一般选定第8天作为考察治疗银屑病药物作用的时间。其成模时间短，皮损及组织病理与人类银屑病的表现有较多相似之处，且操作简单、经济、重复率高，是研究银屑病的理想动物模型。

复方消银膏是由消银膏和丙酸氯倍他索两种制剂按1：1和1：2配制而成（根据现有治疗银屑病的复方制剂的配方比例）。消银膏是以黄连、黄芩、当归、生地、姜黄为主要成分的中药膏。其中黄连主要功效是清热解毒，消肿止痛及抗炎的作用，具有抑制病原微生物、抑制白细胞、抑制血小板的聚集及释放作用，直接外用无刺激，可避免同形现象或激发红皮病的发生，适合于银屑病进行期皮损［8］。黄青等［9］报道黄连有显著的抑制人角质形成细胞增殖的作用。黄芩是临床常用的清热燥湿、泻火解毒、凉火止血的中药［10］。吴珺等［11］的研究表明黄芩的主要成分黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素均可抑制T细胞活化的作用，从而抑制银屑病的发生及发展。当归可补血，活血通络，具有调节机体免疫力、抑菌等功效且能促进角质层正常化［12］。生地养血滋阴，内含维生素A类物质，多种糖类及多种氨基酸，可以促进组织修复，抑制银屑病各种炎症因子，并且无明确的中毒剂量［13］。姜黄具有行气、凉血的功效，通过抑制T细胞的活化起到治疗银屑病的作用［14］。

丙酸氯倍他索乳膏属于强效的皮质类固醇激素，能抑制表皮角质细胞、T细胞及炎症细胞的分化，从而减少角质细胞增殖、分化异常及病变部位的炎症反应［15］，为目前治疗银屑病较理想的激素类外用药。

单纯中药治疗银屑病虽效果较好，但起效较慢，疗程长，糖皮质激素在治疗上疗效明确、速度较快，但长期使用容易出现不良反应。所以根据以上药物药理作用，笔者研发了复方消银膏。复方消银膏是两种药物的联合应用，使中西医有机地结合在一起，可起协同加强作用，以提高疗效，同时可以减少激素类药的用量及不良反应。

在对药物疗效研究实验中，复方消银膏A及复方消银膏B在治疗银屑病方面疗效确切且两者之间差异无统计学意义。因此，我们选择复方消银膏A在临床上进一步推广，其疗效确切且激素用量较少，以减少不良反应的发生。本试验同时对复方消银膏A、复方消银膏B进行了皮肤刺激性试验、皮肤过敏性试验、急性毒性试验和慢性毒性试验，结果提示复方消银膏A、复方消银膏B对完整皮肤、破损皮肤均无刺激性，无急慢性毒性，不产生致敏作用。因此复方消银膏是一种治疗银屑病疗效确切且较安全的理想外用药，为今后临床用药提供了良好的实验依据。

参考文献：

［1］徐叔云，卞如濂，陈修主编.药理实验方法学［M］.4版.北京：人民卫生出版社，2010：235.

［2］党翔吉，张镇，魏立明，等.复方栀子凝胶对银屑病动物模型的干预作用［J］.中药药理与临床，2013，29（5）：128-131.

［3］Nestle FO，Kaplan DH，Barker J.Psoriasis［J］.N Engl J Med，2009，361：496-509.

［4］黎明，姚龙华，陈隆芝，等.清热解毒、活血解郁法为主治疗寻常型银屑病临床疗效观察［J］.中国中医基础医学杂志，2011，17（4）：441-442.

［5］王铸，翟传义.中医辨证治疗寻常型银屑病［J］.河南中医，2003，23（2）：36-37.

［6］Van der Fits L，Mourits S，Voerman JS，et al.Imiquimod-induced psoriasis-like skin inflammation in mice is mediated via the IL-23/ IL-17 axis［J］.J Immunol，2009，182：5836-5845.

［7］金权鑫，金桂花，金丹，等.咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的建立［J］，延边大学医学院学报，2014，37（4）：241-243.

［8］李俊峰，马俊平.中医药治疗寻常型银屑病45例分析［J］.中国误诊学杂志，2011，11（13）：3123.

［9］黄青，瞿幸，吴清，等.黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究［J］.中国中医药信息杂志，2008，15（6）：30-31.

［10］高学敏.中医学［M］.2版.北京：中国中医药出版社，2007：157-158.

［11］吴珺，刘欣，邱泽计，等.黄芩主要成分对PDB+Ion诱导的Jurkat T细胞CD69表达的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（9）：188-189.

［12］李芳梅，杨志波，曾宪玉.当归饮子对寻常型银屑病患者皮肤屏障功能的影响［J］.中医药导报，2014，20（7）：11-13.

［13］叶静静，陈宁刚.犀角地黄汤重用生地治疗进展期血热证银屑病30例［J］.浙江中医杂志，2015，50（8）：587.

［14］张勇，肖君刚，陈慧.姜黄治疗寻常型银屑病的临床疗效及外周血T细胞亚群变化［J］.中国中西医结合皮肤性病学杂志，2005，4 （1）：10-11.

［15］尹逊国，卢凤艳.药物联合NB-UVB治疗寻常型银屑病的疗效观察［J］.皮肤病与性病，2011，33（2）：95.

Efficiency and Safety of Compound Xiaoyin-ointment in Treating Psoriasis

SU Shanshan，ZHANG Mingrui，HE Haiying，FAN Dandan，LI Yang，LI Fuqiu
Second Hospital of Jilin University，Changchun 130000，China

Abstract:ObjectiveTo observe curative effect and safety of the compound Xiaoyin-ointment in the animals model of psoriasis.MethodsThe mice models of psoriasis were established with topical imiquimod inunction on back skin of mice. After8 days of treatment with topical compound Xiaoyin-ointment A（Xiaoyin-ointment：sclobetasol propionate=1：1），B（Xiaoyinointment：clobetasol propionate=1：2）and control drug on the mice models，the curative effects of each group were observed.The skin irritation test，skin allergic test，acute toxicitic test and chronic toxicitic test were carried out by using compound Xiaoyinointment on mice models.ResultsCompound AandBcanimprovetheconditionofthepsoriasismice modelssignificantly，and therewasnostatisticalsignificance（P＞0.05）.Bothcompletedordamagedskinwerenon-irritatingandtherewasnoacuteorchronic toxicityoranaphylacticreactions.ConclusionCompound A and B have accurate and equivalent effect，and both of them have high security.

Key words:Compound Xiaoyin-ointment；Psoriasis；Curative effect；Safety

中图分类号：R758.63

文献标识码：A

文章编号：1672-0709（2016）01-0022-04

基金项目：吉林省科技发展计划项目（20130727016YY）

通信作者：李福秋，E-mail：Lifuqiu@medmail.com.cn

收稿日期：（2015-09-12）