薄层色谱法鉴别“复方甲亢片”中的甲巯咪唑

朱田密

(湖北省中医院药事部，湖北 武汉　430061)



薄层色谱法鉴别“复方甲亢片”中的甲巯咪唑

朱田密

(湖北省中医院药事部，湖北 武汉430061)

摘要：目的建立一种鉴别复方甲亢片中甲巯咪唑的新方法。方法采用薄层色谱法，将供试品用浓氨试液润湿，用乙酸乙酯提取，经硅胶GF254薄层层析，在紫外光灯254 nm下观察以及用稀碘化铋钾试液显色，与甲巯咪唑对照品色谱对照。结果复方甲亢片色谱中甲巯咪唑斑点清晰，阴性无干扰。结论该方法可用于对中西药复方制剂复方甲亢片中西药成分甲巯咪唑进行鉴别，从而替代原质量标准中的试管化学反应鉴别法。

关键词：甲巯咪唑/分析；色谱法,薄层；复方合剂

复方甲亢片(鄂药制字Z20111106)为湖北省中医院医疗机构制剂，是根据湖北省中医院陈如泉教授的经验方，以炙黄芪、白芍等益气养阴中药为主配以少量西药甲巯咪唑组成的中西药复方制剂[1-3]。具有滋阴益气，清热平肝的功效，用于治疗甲状腺功能亢进症。临床应用30年中，质量标准逐步提高，但是现行质量标准中对西药成分甲巯咪唑的鉴别仍然模拟2005年版以前《中国药典》对甲巯咪唑化学药的试管化学反应鉴别法[4-5]，即样品提取液与二氯化汞试液、亚硝基铁氰化钠试液以及三硝基苯酚试液分别反应产生相应的现象。由于复方制剂中成分多，为纯化出甲巯咪唑进行试管反应，步骤很复杂，反应现象也不如单纯西药典型。并且，实验方法所用的二氯化汞是剧毒试剂，对操作人员健康有害，又严重污染环境。因此，有必要对此鉴别方法进行改进。研究发现，能用薄层色谱法(TLC)鉴别复方甲亢片中的甲巯咪唑，方法简便、快速、效果好。

1仪器与试药

KQ-500VDE型双频数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HWS-26电热恒温水浴锅(上海齐欣科学仪器有限公司)；ZF-7型暗箱三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)。复方甲亢片(湖北省中医院制剂中心生产，批号为20150616，20150909，20151029)；缺甲巯咪唑的阴性样品(湖北省中医院制剂中心提供)；甲巯咪唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100030-200504)；薄层层析硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司)，硅胶GF254预制板(青岛海浪硅胶干燥剂有限公司)；浓氨溶液、乙酸乙酯、无水乙醇、环己烷、甲醇、碘化钾、碱式硝酸铋等试剂均为分析纯。

2方法及结果

2.1溶液的制备

2.1.1供试品溶液的制备取复方甲亢片5片，除去糖衣，研细，加浓氨试液3 mL润湿，加乙酸乙酯15 mL，超声处理30 min(80 KHz，300 W)，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2阴性对照溶液的制备取缺甲巯咪唑的阴性样品，按“2.1.1”同法制成阴性对照溶液。

2.1.3对照品溶液的制备取甲巯咪唑对照品，加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2薄层板的制备薄层层析硅胶GF254，用0.5%羧甲基纤维素钠溶液作为黏合剂，手动铺板，铺成厚度0.5 mm的薄层板，平放晾干，105 ℃干燥30 min，备用。

2.3薄层层析参照《中国药典》2015年版四部的薄层色谱法(通则0502)试验[6]，吸取“2.1”项下制备的供试品溶液、阴性对照溶液各5 μL，对照品溶液2 μL，分别点于上述薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(3∶5∶0.8∶0.2)作为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯254 nm下检视。供试品色谱中，在与甲巯咪唑对照品色谱相应的位置上，显相同黑暗斑点；再喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与甲巯咪唑对照品色谱相应的位置上，显相同红色斑点，见图1。

注：1.缺甲巯咪唑阴性样品；2.甲巯咪唑对照品；3～5.供试品。

图1复方甲亢片中甲巯咪唑的薄层色谱鉴别图

3讨论

薄层色谱法鉴别甲巯咪唑在国外药品标准中已有先例：《英国药典》和《欧洲药典》收载甲巯咪唑(硫酮式)质量标准都采用了薄层色谱鉴别法[7-8]。《中国药典》收载甲巯咪唑(硫醇式)质量标准未采用薄层色谱鉴别法，却也将薄层色谱用于与甲巯咪唑有关的杂质检查[9]。薄层色谱法鉴别混合物中的目标成分具有优势，本研究将薄层色谱法应用于中西药复方制剂中甲巯咪唑的鉴别，获得满意效果。

本方法的建立依赖于甲巯咪唑的两个性质特征：(1)甲巯咪唑能使GF254薄层板面发生荧光猝灭。这是由于甲巯咪唑的紫外最大吸收波长位于252 nm[9]，对紧邻的254 nm紫外光也有强烈吸收，导致GF254薄层板荧光背景出现暗斑;(2)甲巯咪唑是含氮有机化合物，与生物碱类似，在薄层板上遇稀碘化铋钾试液显红色斑点。基于这两个现象，经过系统的研究考察，包括供试品提取方法、点样量、检视条件、展开系统、薄层板规格、温湿度的考察(见“3.1～3.6”)，建立了该鉴别方法。经过数批样品验证，方法可行。

3.1提取方法考察设计4种方法提取供试品，分别为浓氨试液润湿后乙酸乙酯超声提取；水润湿后乙酸乙酯超声提取；直接用乙酸乙酯超声提取；直接用无水乙醇超声提取。结果：直接用乙酸乙酯没有提取出甲巯咪唑；直接用无水乙醇提取出微量的甲巯咪唑；经浓氨试液或水润湿后用乙酸乙酯都能提取出甲巯咪唑，但水润湿带入的杂质较多，故选择浓氨试液润湿。结果见图2。

注：1.甲巯咪唑对照品；2.浓氨试液润湿后乙酸乙酯提取；3.水润湿后乙酸乙酯提取；4.乙酸乙酯提取；5.无水乙醇提取。

图2供试品提取方法考察薄层色谱图(日光)

3.2点样量考察将供试品溶液分别点样1、2、4、6、8、10 μL，将对照品溶液分别点样1、2 μL。结果供试品溶液点样4～8 μL均合适，对照品溶液点样2 μL合适，见图3。

注：1～2.甲巯咪唑对照品溶液(1、2 μL)；3～8.供试品溶液(1、2、4、6、8、10 μL)。

图3点样量考察薄层色谱图(日光)

3.3检视条件选择考察3种检视条件，将展开后的GF254薄层板分别置于紫外光灯254、365 nm下检视以及喷以稀碘化铋钾试液后在日光下检视。结果：甲巯咪唑在365 nm下不显荧光斑点，在254 nm下显示清晰的暗斑，用稀碘化铋钾试液显色后立即呈现红色斑点，见图4。

注：1.缺甲巯咪唑阴性样品；2.甲巯咪唑对照品；3～5.供试品。

图4检视条件考察薄层色谱图

注：1.缺甲巯咪唑阴性样品；2.甲巯咪唑对照品；3～5.供试品。

图5展开系统考察薄层色谱图(左图：254 nm;右图：日光)

注：1.缺甲巯咪唑阴性样品；2.甲巯咪唑对照品；3～5.供试品。

图6薄层板规格考察薄层色谱图(左图：254 nm;右图：日光)

注：1.缺甲巯咪唑阴性样品；2.甲巯咪唑对照品；3.供试品。

图7温湿度考察薄层色谱图(左图：254 nm;右图：日光)

3.4展开系统考察考察4种展开系统，分别为三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶1∶1)，三氯甲烷-丙酮-浓氨试液(5∶2∶0.03)，乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(10∶0.4∶0.2)，环己烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(3∶5∶0.8∶0.2)。第1种展开系统在254 nm下阴性样品有干扰；第2种展开系统斑点略拖尾；第3种展开系统斑点圆整，但色谱背景较模糊；第4种展开系统分离效果最佳,色谱图见图5。

3.5薄层板考察采用自制薄层板(厚度0.5 mm)和预制板(厚度0.2～0.25 mm)试验，结果都能取得良好效果,色谱图见图6。

3.6温湿度考察在不同温湿度环境中试验(温度介于9～32 ℃，湿度介于21%～79%)，按本方法展开色谱，结果均能得到清晰的斑点,色谱图见图7。

参考文献

[1]陈求芳.复方甲亢片的药学研究[D].武汉：湖北中医学院， 2006.

[2]刘建,向楠,陈如泉,等.复方甲亢片治疗甲状腺机能亢进症的临床观察[J].湖北中医杂志,2008,30(5):24-25.

[3]左新河.复方甲亢片治疗Graves亚临床甲亢状态的疗效相关因素及机理研究[D].武汉：湖北中医药大学,2010.

[4]湖北省食品药品监督管理局.复方甲亢片审定标准(201401699)[S],2014.

[5]国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2005:128.

[6]国家药典委员会.中国药典(四部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:57.

[7]British Pharmacopoeia 2007(volume Ⅱ) [S].London:The Stationery Office,2006:2025.

[8]European Pharmacopoeia 8.0(volume Ⅱ)[S].Strasbourg:European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare,2013:3401.

[9]国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社,2015：184，220.

Identification of thiamazole in fufang jiakang tablets by thin-layer chromatography

ZHU Tian-mi

(DepartmentofPharmacy,HubeiProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Wuhan,Hubei430061,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a new method for identification of thiamazole in fufang jiakang tablets.MethodsThin-layer chromatography(TLC) was used.Wetting the sample with ammonia solution,then extracted with ethyl acetate,developed on TLC silica gel GF254plate,examined under ultraviolet light at 254 nm,sprayed with dilute potassium iodobismuthate solution,and compared with the chromatography of thiamazole standard.ResultsThe spot of thiamazole in fufang jiakang tablets on TLC was clear and the negative test showed no interference.ConclusionsThe method can be used to identify thiamazole in the Chinese-Western combination preparation of fufang jiakang tablets,thereby substituting the chemical reaction identification test in current drug quality standard.

Key words:Methimazole/analysis;Chromatography,thin Layer;Drug combinations

基金项目:湖北省中医院2014—2015年度科研专项计划项目(JDZX2014Y24)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.06.016

(收稿日期：2015-12-24,修回日期:2016-03-16)