补阳还五汤对小鼠脑出血后脑组织含水量的影响*

常　盼　单海燕　张明阳　张　亮　杨柳青

西安医学院第二附属医院(西安 710038)



·实验研究·

补阳还五汤对小鼠脑出血后脑组织含水量的影响*

常盼单海燕△张明阳▲张亮◇杨柳青

西安医学院第二附属医院(西安 710038)

摘要目的：通过研究中医益气活血方补阳还五汤对小鼠脑出血脑组织含水量，进一步探讨益气活血中药作用于脑出血的作用机制。方法：将健康雄性ICR小鼠，随机分为以下五组： 假手术组、出血组、出血+益气组、出血+活血组、出血+补阳还五汤组，利用纹状体注射胶原酶IV建立小鼠脑出血模型，假手术组和出血组以蒸馏水灌胃，出血+益气组、出血+活血组和出血+补阳还五汤组分别灌服补阳还五汤益气组分、活血组分及补阳还五汤全方药物。分别在造模结束后24 h和72 h取材，通过干湿重法检测脑组织含水量。结果：益气组、活血组和补阳还五汤组都可以减低小鼠脑出血后24 h 和72 h脑出血基底节区的水肿含量。结论：补阳还五汤主要作用于基底节区以降低其对脑水肿的影响。

主题词脑出血/中医药疗法动物实验小鼠 @补阳还五汤

脑出血(Intracerebral hemorrhage)是一种严重危害人类健康的脑血管疾病， 具有较高的发病率、致残率和病死率[1]。六个月的幸存率只有20%[2]。脑出血的发病率是每年每10万人口中有10～30人发生脑出血，在世界范围内，每年有2百万该病发生[3]。目前，脑出血的治疗仍没有突破性进展。关于脑出血后的大脑损伤机制非常复杂，由于血肿周边的脑水肿是脑出血后最严重的继发性损伤之一，它的发生和发展是导致脑出血病情发展和恶化的重要原因之一[4-5]。补阳还五汤是我国的传统医学名方，具有补气活血通络之功效，本实验通过纹状体注射胶原酶构建脑出血模型小鼠，观察补阳还五汤方剂对脑出血脑水肿的影响，脑水肿检测采用五分法，旨在探讨中药方剂补阳还五汤对脑出血的作用机制，为进一步新药开发精炼处方提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物与分组健康雄性ICR小鼠74只，体重25～30g，购于西安交通大学实验动物中心，将动物随机分为假手术组10只、出血组16只、出血组+益气组16只、出血+活血组16只、出血+补阳还五汤组16只，假手术组和出血组以蒸馏水灌胃，出血组+益气组、出血+活血组和出血+补阳还五汤组分别灌服补阳还五汤益气组分、活血组分及补阳还五汤全方药物，分别于造模灌胃24 h和72 h后取材。

1.2中药制备全部生药材从西安医学院第二附属医院中药房一次性选购，按以下比例进行煎制，益气活血组：补阳还五汤全方(黄芪、当归、赤芍、红花、川芎、地龙、桃仁按20∶3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)；益气组：补阳还五汤益气成分(黄芪按上述比例)；活血组：补阳还五汤活血成分(当归、赤芍、地龙、川芎、桃仁、红花按3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)。用蒸馏水两次水煎，浓缩为1．54，0．81，0.73g/mL，4℃保存备用。

1.3脑出血模型制备小鼠称重后麻醉，剥离右侧颅顶骨膜，固定于小鼠脑立体定位仪上，用颅骨钻刺一小孔，微量进样器于左侧纹状体内注射胶原酶IV，深度为3.5 mm，于5 min内均匀注入后，留针5 min，然后拔针。

1.4试剂和仪器胶原酶Ⅶ(collagenaseIV)购于Sigma公司，鼠脑定位仪购于北京众实科技有限公司。

1.5脑水肿的测定脑水肿的程度可以用脑组织含水量来表示。具体方法如下，小鼠出血后分别在24 h和72 h断头取脑后，迅速取出脑组织，去除嗅球和脑干，放于水平面，然后沿正中线切开，分离脑皮质和纹状体。小脑作为参考标准也予以测重。分离得到五部分脑组织：伤侧及对侧脑皮质，伤侧及对侧纹状体，小脑。迅速将脑组织放到电子精密天平上称重得到脑组织的湿重，并记录，随后，将脑组织放入100℃的烘箱内，24 h或72 h后取出脑组织并测量干重。脑组织含水量(%)的计算方法如下：(湿重-干重)/湿重×100。

2结果

2.1脑出血24 h后脑组织含水量变化出血组与假手术组相比，基底节区脑组织含水量都明显增加，而在皮质、对侧皮质，对侧基底节和小脑区域，出血各组与假手术组脑组织含水量无统计学意义。出血+补阳还五汤组与出血+生理盐水组相比，降低基底节脑组织含水量，而出血+益气组或出血+活血组与出血+生理盐水组相比，均没有降低脑组织含水量。详见表1。

2.2脑出血72 h后脑组织含水量变化见表2。

表1　脑出血24 h后各组脑组织含水量变化情况

注：与假手术组相比，△P<0.05；与出血+生理盐水组相比，▲P<0.05

表2　 脑出血72 h后各组脑组织含水量变化情况

注：与假手术组相比，△P<0.05；与出血+生理盐水组相比，▲P<0.05

3讨论

清代名医王清任在《医林改错》中指出，补阳还五汤具有补气活血通络的功效，在中华医学的运用中发挥积极的治疗作用，尤其是在脑血管等气虚血瘀相关疾病中具有重要作用，但一直缺乏有力的理论证据。

脑出血是是一种严重危害人体健康和生活质量的临床常见脑血管疾病，具有较高的致死率和致残率[1-3]。据文献报告，脑出血后，除出血灶本身会造成的损伤外，还会出现一系列继发性脑组织损伤，这些继发性损伤与炎症反应、血红蛋白裂解产生的毒性物质、细胞坏死和凋亡、凝血素导致的凝血连锁反应等病理生理机制有关，这些病理过程会引起脑水肿、脑实质内神经血管单元及血脑屏障的破坏，从而造成严重的神经损伤及迟发性死亡的发生[6-7]。为了减轻脑出血后的再次损伤对患者预后的影响，关于脑出血后脑组织损伤的病理生理学机制及对其治疗手段的研究成为了近年来人们关注的热点。前期有实验发现补阳还五汤可以降低脑水肿程度[8]，但是具体作用机制不清楚，为此在本次研究中，我们通过将中药方剂补阳还五汤作用在小鼠脑出血模型上，并采取将脑组织分为五个部分，分别检测脑水肿含量的变化，结果发现，补阳还五汤在脑出血24 h和72 h可以缓解基底节区脑水肿程度，而对其他部分脑水肿含量没影响，说明补阳还五汤主要作用于脑出血基底节区。为进一步研究活血化瘀中药在脑水肿治疗中的作用机制，本实验我们将补阳还五汤其中的益气成分和活血成分，分别观察其对脑出血中脑组织中不同部位水肿的影响，结果发现补阳还五汤中的益气和活血成分都有助于降低基底节区脑水肿程度。

综上所述，说明补阳还五汤主要作用于脑出血基底节区，这为活血化瘀中药治疗脑出血提供基础实验依据。同时也为传统中药治疗运用于实际临床提供了理论支持。

参考文献

[1]Egashira Y， Hua Y， Keep RF， et al. Intercellular cross-talk in intracerebral hemorrhage [J].Brain Res， 2015，1623：97-109.

[2]Adeoye O， Broderick， JP.Advances in the management ofintracerebral hemorrhage. NatRevNeurol[J].2010， 6(11)： 593-601.

[3]Xi G， KeepRF.Intracerebral hemorrhage： mechanismsand therapies. TranslStroke Res [J].2012， 3：1-3.

[4]XiG，KeepRF，HoffJT. Mechanisms of braininjury after intracerebral haemorrhage[J]. Lancet neurology， 2006， 5(1)：53-63.

[5]Adeoye O， Clark JF， Khatri P， et al. Do current animal models of intracerebral hemorrhage mirror the human pathology [J]. Translational stroke research， 2011， 2(1)：17-25.

[6]Laurite M，Dreier JP，Fabricus M，et al.Clinical relevance of cortical spreading depression in neurological disorders：migraine，malignant stroke，subarachnoid and intracranial hemorrhage，and traumatic brain injury[J].J Cereb Blood Flow Metab，2011，31(1)：17-35.

[7]林琇.脑出血后周围组织继发脑水肿病理机制研究进展[J].中国医药科学，2015，5(2)：33-35.

[8]孙皓，郭富强，王多姿， 等.补阳还五汤化裁对大鼠脑出血后脑水肿的影响[J].中国医药导报，2013，10(12)：22-26.

(收稿2016-03-16；修回2016-04-08)

The effect of Buyang Huanwu Decoction on brain water content afterintracerebral hemorrhage in mice

Second Affiliated Hospital of Xi’an Medical College(Xi’an 710038)

Chang PanShan HaiyanZhang Mingyanget al

ABSTRACTObjective： To investigate the effects of BuyangHuanwu Decoction ( BHD) from traditional Chinese drug on brain water content after intracerebral hemorrhage (ICH) in mice， further explore the possible therapeutic mechanism of traditional Chinese drug in intracerebral hemorrhage.Methods： Male ICR mice were randomly divided into sham operation group，ICH models group，qi-tonifyingtherapy group，stasis-eliminating therapy group，BHD therapy group.ICH model was established by intracerebral stereotactic injection of collagenaseIV．Sham group and the model group were given distilled water by intragastric administration.tonifyingqi group，eliminating stasis groupand BHD group were given the decoction of qi-tonifying herbs， the decoction of eliminating stasis herbs and BHD respectively.The brain water contents determination was evaluatedby dry/wet method at 24 h and 72 h after theoperation. Results：The decoction of qi-tonifying herbs， the decoction of eliminating stasis herbs and BHD can reduce the brain basal ganglia water contents after ICH in mice at 24 h and 72 h.Conclusion： BHD play a main rolein brain basal ganglia after ICH in mice.

KEY WORDSCerebral Hemorrhage/traditional Chinese medicine therapyAnimal ExperimentationMice @Buyang Huanwu Decoction

通讯作者：△苏州市立医院北区(苏州215008)

【中图分类号】R743.34

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.07.079

*国家自然科学基金(81301039)

中国博士后科学基金(152865)

陕西省教育厅专项科研资助项目(15JK1617)

苏州市科技发展计划项目 (SYSD2015119)

西安医学院第二附属医院科研项目(16KY0102)

▲苏州大学医学部(苏州215123)

◇西安航天总医院(西安710100)