福建产山药资源的腺苷含量比较研究

高华娟，何文胜，黄玉仙

(福建生物工程职业技术学院，　福建 福州350002)



福建产山药资源的腺苷含量比较研究

高华娟，何文胜，黄玉仙

(福建生物工程职业技术学院，福建 福州350002)

摘要目的：评价不同福建山药种质资源的品质。方法：采用高效液相色谱法测定福建产山药腺苷含量。结果：不同种质山药腺苷含量差异极显著，腺苷含量最高的是福建邵武(0.2163%)；参薯类10份样品未能检出。结论：不同种质来源的山药腺苷含量差异显著，为选种和开发优质的山药品种提供科学依据。

关键词山药；腺苷；比较分析

山药是人所共知的滋补佳品。山药中含有淀粉、蛋白质、游离氨基酸等营养成分以及多糖、尿囊素、腺苷等多种活性成分及化合物[1-3]。腺苷对糖、脂肪代谢，核酸、蛋白质的合成等起着重要的调节作用，在冬虫夏草质量评价中，被作为主要指标性成分[4]。腺苷作为山药中的有效成分之一，可以作为山药及山药相关产品的质量标准的指标性成分，在揭示山药药效物质基础方面具有十分重要的意义。

在福建省，山药种质资源十分丰富，并有悠久的种植历史[5]，历来在民间应用普遍[6]，但是质量参差不一，影响了福建省山药的品质与品牌[7]，但有关福建山药腺苷方面的报道较少，因此，迫切需要开展福建山药质量的评价研究。本文对源自我省的72份山药样品进行研究，检测、比较评价不同种质资源及各类群间腺苷含量，为当前我省山药腺苷含量标准的建立提供更多科学数据，为开发和选用优质的山药品种提供科学依据。

1材料与方法

1.1供试材料

本试验72份材料来自福建省25个县区，所用山药种质资源均由福建省三明市农业科学研究所提供，材料编号及来源地见表1。供试材料通过3年时间观察，参考《中国植物志》(1985年版)、《福建植物志》(1995年版)等相关文献，并经福建农林大学张大鹏教授鉴定可分为4类山药，其原植物分别是薯蓣(D.oppositeThunb.)、参薯(D.alataLinn.)、山薯(D.fordiiPrain et Burkill)和褐苞薯蓣(D.persimilisPrain et Burkill)。

表1　供试山药种质资源

样品预处理：对采收的块茎除去非药用部分，清水洗干净，切成厚约0.5 cm薄片，并迅速在60℃条件下干燥至恒重，磨粉，过40 目筛，密封装袋并冷藏。参照《中国药典》2010 年版一部附录IX H法测定山药水分，含水量为10.64%。

1.2主要试剂

腺苷(中国药品生物制品检定所，批号1131668-26929)，乙腈、甲醇等为国产分析纯。

1.3主要仪器

高效液相色谱仪(DAD检测器，Agilent-1200， 美国Agilent公司)，MIUI-Q型超纯水器(厦门精艺兴业科技有限公司)，KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，电子天平(AR2130, 美国奥豪斯)，微量天平(CP225D, 德国赛多利斯)，超声波提取器(KQ-500E型，昆山市超声仪器有限公司)，低速大容量多管离心机(LXJ-ⅡB，上海安亭科学仪器厂)。

1.4色谱条件

色谱柱：Daisogel SP-ODS-BP C18柱(5μm, 250 mm×4.60 mm)；流动相：乙睛-水(体积比为5：95)；检测波长：260 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL；柱温：30 ℃。参照《中国药典》2010年版一部附录VI 中D项高效液相色谱法，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪。

1.5对照品溶液制备

精密称取干燥恒重的腺苷对照品4.62 mg，置25 mL容量瓶中，用15%甲醇溶解、定容至刻度，摇匀，精确吸取2 mL置20 mL容量瓶中，加15%甲醇溶解，定容至刻度，摇匀制成浓度为0.01848 mg·mL-1，即得腺苷对照品溶液。

1.6供试品溶液的制备

取不同种质资源的山药粉末约1.0 g，精密加入15%甲醇10 mL，称重，摇匀，超声提取30 min后，放冷，再称定质量，不足部分用15%甲醇补足，摇匀，取上清液0.5 mL，0.45 nm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

1.7标准曲线制备

分别精密吸取腺苷对照品溶液1、5、10、15、20、25 μL，微孔滤膜过滤，按“1.4色谱条件”测定峰面积，并以对照品的量X(μg)为横坐标，峰面积 (mAU)为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程Y=3 811.9X-5.962 4，相关系数r=0.999 9。

图1　腺苷对照品的HPLC图谱

图2　安远Ⅰ山药样品腺苷的HPLC图谱

1.8方法学考察

(1) 精密度：精密吸取同一浓度的供试品溶液10 μL，连续进样6次，记录色谱峰面积，测得腺苷峰面积积分值RSD为1.1%。

(2) 稳定性：取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0，4，8，12，16，24 h进行分析，测得腺苷峰面积积分值RSD为0.91%，表明供试溶液在24 h内稳定。

(3) 重复性：取同一批山药样品，按供试品制备项下的方法重复制备6份，进行测定，测得腺苷峰面积积分值RSD为0.9%，表明本方法重复性良好。

(4) 回收率：取已知腺苷含量的山药粉末样品约0.5 g，精密称定，加入新配制浓度为0.2 mg·mL-1的对照品溶液5 mL，按供试品制备方法制备，共6份，测定含量见表2，计算回收率为100.6%，RSD为0.05%。

表2　腺苷加样回收率

1.9样品测定

72样品分别按“1.4色谱条件”测定峰面积，并根据标准曲线计算样品的腺苷含量。

2结果与分析

72份福建山药种质资源包含了薯蓣、褐苞薯蓣、参薯、山薯4个类群，为进一步了解山药腺苷含量是否与栽培地区有关，对其进行方差分析和多重比较，见表3和表4。

表3　福建山药种质资源腺苷含量方差分析

表4　福建山药种质资源腺苷含量差异分析

注：小写字母不同表示差异显著，大写字母不同表示差异极不显著。

在72份资源中，其中32号(泰宁Ⅲ)、33号(建阳Ⅴ)、34号(安溪Ⅱ)、35号(清流Ⅲ)、37号(福安Ⅰ)、38号(将乐Ⅲ)、39号(德化Ⅳ)、41号(云霄Ⅰ)、42号(云霄Ⅱ)、43号(云霄Ⅲ)、45号(漳州Ⅱ)、46号(上杭Ⅰ)等10份样品资源未测定出腺苷，全部为参薯群。对余下60份福建山药资源腺苷含量的差异分析结果表明：不同种质资源间的腺苷含量差异很大，名列前三的分别为53号(邵武Ⅰ，0.2163%)；67号(长汀Ⅱ，0.2086%)和36号(永春Ⅰ，0.2018%)；该3份资源的腺苷含量与其他所有资源均达到极显著水平，含量最低的是9号(连城Ⅰ)，仅含0.0352%，是53号(邵武Ⅰ，0.2163%)的1/6。60份资源腺苷的平均含量为0.1096%。

3讨论

从测定结果可以看出，供试的72份福建产山药不同资源间的腺苷含量差异很大，含量最高的是53号(邵武Ⅰ，0.2163%)，12份参薯类群供试品在本实验中均未检出腺苷，参薯在2006年版《福建省中药材标准》中作为“福建山药”来源之一[8]，是“福建山药”的主流种，具有高产、适应性广、栽培容易等特点[9]。腺苷，对糖、脂肪代谢，核酸、蛋白质的合成等起着重要的调节作用，腺苷含量目前是评价冬虫夏草质量优劣的一个重要指标，2010年版《中华人民共和国药典》冬虫夏草项下明确规定其含量不能低于0.010%[10]。除参薯类供试品外，在60份检出腺苷的供试品中腺苷含量均高于冬虫夏草腺苷规定含量，含量最高的53号(邵武Ⅰ，0.2163%)是冬虫夏草腺苷规定量的20倍多，含量最低的是9号(连城Ⅰ，0.0352%)是冬虫夏草腺苷规定量的3倍多。腺苷作为山药中的有效成分之一，可以作为山药及山药相关产品的质量标准的指标性成分，在揭示山药药效物质基础方面具有十分重要的意义。

福建省山药种质资源丰饶，种植历史悠久，是我国山药主要原产地及重要生产地之一。该省山药种植面积近30 000 hm2[5,11]，其中漳州云霄马铺乡山药种植面积就达到800 hm2，种植户多达3 000多户。所以研究山药不同种质资源腺苷含量具有实际意义，本研究用HPLC方法对72份福建产山药种质资源进行腺苷含量评价，为建立山药质量标准提供更多科学数据，为选择培育、开发和应用优质的山药品种提供了科学依据。

参考文献：

[1]倪少云，宋学华．山药的营养成分分析[J]．江苏药学与临床研究，2002，10(2)：26.

[2]阚建全，王雅茜，陈宗道，等．山药活性多糖抗突变作用的体外实验研究[J]．营养学报，2001，23(1)：76.

[3]白冰，刘绣华，王勇，等．怀山药化学成分研究(Ⅱ)[J]．化学研究，2008，19(3)：67.

[4]振玉．中草药现代研究：第1卷[M]．北京：北京医科大学出版社，1995：100-1l0.

[5]华树妹，周以飞，潘大仁，等.福建山药资源形态标记分析[J].福建农业学报，2011，26(1)：45-49.

[6]倪少云，宋学华．山药的营养成分分析[J]．江苏药学与临床研究，2002，10(2)：26.

[7]黄瑞平.福建山药地方资源主要农艺性状与品质特性比较[J].热带作物学报，2012，33(7)：1309-1315.

[8]福建省食品药品监督管理局.福建省中药材标准(2006版)[M].福州：海风出版社，2006:262

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[10]国家药典委员会.中国药典：一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:106.

[11]黄洪河．福建省山药发展前景分析与探讨[J]．江西农业学报，2007，19(6)：63-65．

Comparative Analysis of Adenosine Contents in the Rhizoma Dioscoreae from Fujian Province

Gao Huajuan， He Wenshenɡ， Huanɡ Yuxian

(Fujian Vocational College of Bio-engineering, Fuzhou 350002, China)

AbstractObject: To evaluate the quality in the Rhizoma Dioscoreae from different germplasm resources in Fujian province. Methods: The adenosine contents of these medicinal materials were determined by the methods of High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Results: The adenosine contents in the different germplasm resources had significant difference. The highest content was 0.2163%, which from Shaowu city in Fujian province. But adenosine in ten samples ofD.alataLinn.types was not detected. Conclusion: The adenosine contents in the different germplasm resources had significant difference, which provided the scientific basis for development and seed selection of high-quality Rhizoma Dioscoreae varieties in Fujian province.

Key wordsRhizoma Dioscoreae; adenosine; comparative analysis

收稿日期：2015-06-12

基金项目：福建省教育厅基金项目(JB13316)—不同山药种质资源的腺苷含量比较研究；福建省科技项目计划(2014Y2008)阶段性研究成果之一。

作者简介：高华娟(1981—)，女，讲师。研究方向：中药与天然产物。E-mail:27011630@qq.com

doi：10.3969/j.issn.1006-9690.2016.01.007

中图分类号：S632.1

文献标识码：A

文章编号：1006-9690(2016)01-0024-04