鹿瓜多肽注射液对脊柱椎体骨折康复过程中骨密度及血管内皮生长因子表达的影响

冯艳琴　姚忠红　秦雪琴（湖北省十堰市太和医院湖北医药学院附属医院，湖北　十堰　442000）



鹿瓜多肽注射液对脊柱椎体骨折康复过程中骨密度及血管内皮生长因子表达的影响

冯艳琴姚忠红△秦雪琴
（湖北省十堰市太和医院湖北医药学院附属医院，湖北十堰442000）

【摘要】目的观察鹿瓜多肽注射液对脊柱椎体骨折愈合过程中骨折椎体骨密度及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将204例患者按随机数字表法分为对照组及治疗组，每组102例，对照组电针夹脊穴，配合血海、足三里、阳陵泉三穴电针刺激20 min，治疗组在此基础上穴位注射鹿瓜多肽注射液。采用图像分析法测定患者治疗前后骨折椎体骨密度，采用免疫组化染色测定患者血清VEGF、VEGF mRNA阳性表达，比较总有效率，评价穴位注射鹿瓜多肽注射液对脊柱椎体骨折临床疗效。结果与对照组比较，图像分析显示治疗组患者骨密度明显提高，血清VEGF及VEGF mRNA阳性表达均明显增强，总有效率90.19%明显高于对照组的73.52%（均P＜0.05）。结论鹿瓜多肽注射液对增加骨钙沉积、促进骨折椎体骨痂形成及椎体骨折愈合过程中VEGF的合成分泌，促使骨折椎体局部组织血管内皮新生，增加局部骨折组织血液供应，调节椎间盘组织细胞代谢并维持平衡等具有明显的作用。

【关键词】鹿瓜多肽注射液脊柱椎体骨折骨密度血管内皮生长因子总有效率

脊柱压缩骨折（OVCF）是以骨质疏松为病理基础，患者成骨、破骨细胞分解与合成代谢平衡失调，以成骨细胞合成增殖减少，破骨细胞合成增殖提高，尤其以脊柱椎体骨格钙、磷代谢紊乱而造成骨质疏松，在外力的作用下，易导致脊柱压缩骨折，且以L1～5腰椎椎体压缩骨折多见，严重可造成瘫痪而影响患者生活质量［1］。流行病学调查显示脊柱椎体压缩骨折以50岁以上的绝经老年妇女多见，发生率在15%左右［2］。近年来研究发现血管内皮生长因子（VEGF）具有增加微、小静脉血管的通透性、促使血管内皮细胞分裂增殖及诱导血管再生等作用［3］。受此启发，在治疗脊柱压缩骨折上取得不少新成果，如利用中医促进骨折局部血液循环，增加局部组织VEGF合成。VEGF与最先发现的血管通透性因子（VPF）的结构功能一致［4］，具有促进多种血管活性物质合成、血管内皮细胞增殖迁移及再生、参与骨折部位动脉侧支循环形成的调节［5］，是一种高度特异性的促血管生长因子，故VEGF在临床上常作为血管内皮生长功能的重要指标。现代医学证实，维持正常骨钙代谢、正常的骨密度对稳定脊柱椎体结构起到至关重要的作用。故本研究以VEGF的分泌及骨密度等指标来观察分析穴位注射鹿瓜多肽注射液对椎体压缩性骨折的影响。现报告如下。

1　资料与方法

1.1病例选择诊断标准：参照1999年《中国人原发性骨质疏松症诊断标准（试行）》［6］有以下之一者可确诊为骨质疏松脊柱压缩骨折病。1）患者年龄大于6岁，有明显的全身乏力、骨痛及腰背痛等临床表现，严重患者出现驼背体症，自述或家属证实有轻微外伤史，CT片显示1～2个胸椎和/或腰椎压缩性骨折，确定为轻微外伤导致的脊柱骨折。2）X线骨密度仪（型号为DEXA，OSTEOCORE-3，法国）检查骨密度低于＜M-2SD，即骨密度检测为阳性患者。3）CT片显示压缩性骨折不超过椎体的1/4的患者，或严重脊柱后突畸形的患者。排除标准［7］：1）患者检查合并有严重心、肝、肾、内分泌系统疾病者；2）CT片显示椎体有3个以上的压缩性骨折；3）患者既往临床资料不全等影响疗效者，或未按规定治疗方案导致无法判断疗效；4）X线骨密度仪检测骨密度示骨质疏松，但CT又无压缩性骨患者；5）患者CT片显示压缩性骨折超过椎体的1/4的。

1.2临床资料湖北医药学院附属十堰市太和医院脊柱外科2013年11月至2015年6月收治的骨质疏松脊柱压缩骨折住院患者204例，按随机数字表法分为对照组与治疗组各102例。对照组中男性33例，女性69例；平均年龄（69.31±7.84）岁；平均病程（37.50± 3.25）d。治疗组中男性35例，女性67例；平均年龄（71.17±8.94）岁；平均病程（36.97±3.52）d。两组病例在年龄、性别比例、病程等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05），且无病例脱落。

1.3治疗方法对照组男性患者静滴降钙素7 d。女性患者采用激素代替疗法7周，静滴降钙素等常规治疗7 d。参照高树中著《针灸治疗学》［9］，根据不同病情痛点循经选穴电针治疗。选脊柱两侧夹脊穴，针刺入2～4 cm，行导气手法，旁开2～3 cm配穴，以夹脊穴齐刺点为正极，配穴为负极，配合胃俞、脾俞、气海俞、肾俞，接G6805-2A型电针治疗仪，连续波，频率10 Hz，电针刺激20 min，刺激强度以患者可以耐受为度，治疗期间减少活动量，疼痛部位加用超短波理疗30 min，TDP照射骨折局部皮肤20 min。电针刺激治疗每日1次，每周治疗6次休息1 d，7 d为1疗程，治疗8个疗程。治疗组在对照组治疗基础上，根据病情循经选穴，也可选择痛点阿是穴2～3个部位，定点后注射鹿瓜多肽注射液（黑龙江江世药业有限公司，规格2 mL/4 mg，批号H20061211）1 mL，每周注射5次，间歇2 d，7 d为1疗程，治疗8个疗程。

1.4疗效标准参照2002年《中药新药临床研究指导原则（试行）标准》［8］评分标准，统计患者临床治愈、显效、有效、无效病例数，计算总有效率，总有效率=（治愈例数+显效例数）/总病例数×100%。临床治愈：疼痛消失，驼背等被动体位基本消失，骨质密度明显增加。显效：疼痛基本消失，驼背等被动体位略有好转，骨密度检查骨质密度有一定的增强。有效：疼痛略有好转，驼背及骨质密度无明显好转和增加。无效：治疗前后体症及骨密度检查无变化。

1.5检测方法参照文献［10］。CT影像检查骨折椎体骨密度采用免疫组化染色及图像分析法测定骨折椎体VEGF、VEGF mRNA阳性表达。采用免疫组织化学法检测两组患者血清VEGF、VEGF-mRNA蛋白等表达。采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定VEGF蛋白表达的光密度（OD）值。分别抽取患者治疗前后静脉血并分别编号置于-20℃冰冻待查。检测时将标本3000 r/min转离心30 min，取上清液（待测样本），将标准品、待测样本加入到预先包被的VEGF单克隆抗体透明酶标包被板中，37℃温育30 min，洗涤后再加入酶标工作液，再于37℃下温育30 min后洗涤除去未结合的成分，依次加入底物A、B，底物在辣根过氧化物酶催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品VEGF浓度呈正比，用SP-Max 3500FL型多功能荧光酶标仪于450 nm波长下测定VEGF的OD值。VEGF mRNA测定方法参照文献［11］，标本进行RNA提取，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定VEGF mRNA表达水平。

1.6统计学处理应用SPSS19.0统计软件分析。实验数据均以（±s）表示，两组间的均数检验采用多因素方差分析，组间构成比差异检验采用Χ2检验，两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组临床疗效比较见表1。治疗组总有效率明显高于对照组（P＜0.05）。

表1　两组临床疗效比较（n）

2.2两组治疗前后VEGF、VEGF mRNA表达及骨密度比较如表2。对照组VEGF、VEGF mRNA治疗后有一定的增强，但治疗前后比较差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后治疗组VEGF、VEGF mRNA表达明显增强，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。X线骨密度仪示对照组骨密度在治疗后增大（P＜0.05）。治疗组骨密度显著升高，与治疗前及对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。

表2　两组治疗前后VEGF、VEGF mRNA表达及骨密度比较（±s）

表2　两组治疗前后VEGF、VEGF mRNA表达及骨密度比较（±s）

与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，△P＜0.05。

组别　时间　骨密度（g/cm2）（n＝102）　治疗后　2.91±0.15*治疗组　治疗前　1.83±0.11 （n＝102）　治疗后　3.89±0.19*△对照组　治疗前　1.87±0.12 VEGF（Pg/mL）VEGF mRNA 23.57±2.89　0.75±0.09 19．24±1．87　0.68±0.05 44．02±4.14*△　1.75±0.11*△21．50±2．03　0.67±0.05

2．3不良事件治疗组所有患者穴位注射鹿瓜多肽注射液治疗无严重并发症发生。

3　讨论

鹿瓜多肽注射液是从鹿科动物梅花鹿的骨骼和葫芦科植物甜瓜的干燥成熟种子中提取的多肽注射液类生物活性因子合成的一种复方灭菌注射液，富含骨形态发生蛋白（BMP）、成纤维细胞生长因子（FGF）等多种骨诱导多肽类因子。鹿瓜多肽注射液中含有的骨诱导多肽类生物因子具有调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，能有效刺激软骨和成骨细胞的分化及增长、促进骨痂形成及骨折修复愈合［12］。鹿瓜多肽注射液中的甜瓜籽提取物中有多种游离氨基酸和有机钙、磷，并具降低骨折局部毛细血管通透性，减少炎性浸润及渗出，调节钙磷代谢，增加骨钙沉积；防止骨质疏松以及抗炎镇痛抗风湿等作用［13］。近年来鹿瓜多肽用于治疗脊柱椎体骨折、强直性脊柱炎、各种类型骨折、创伤修复及腰腿疼痛等取得了一定成效［14］，本文采用穴位注射鹿瓜多肽注射液治疗脊柱椎体骨折，旨在挖掘中医药治疗脊柱椎体骨折优势，探讨其作用机制，以期研究联合治疗的镇痛消炎作用机制，为临床提供安全可靠的治疗方案。

观察发现，治疗组患者骨密度明显提高，血清VEGF及VEGF mRNA阳性表达均明显增强，总有效率明显高于对照组，疗效明显优于对照组。分析认为，在本临床研究中，对照组在治疗后，骨密度提高，说明男性患者静滴降钙素7 d及女性患者采用激素代替疗法7周的治疗方案对促进骨钙沉积、骨痂形成及骨折修复愈合有一定的作用，其VEGF蛋白质及VEGF mRNA阳性表达有不同程度提高，说明椎体椎体骨折创伤可在一定程度上刺激机体VEGF的分泌，但针灸及其他常规治疗不能有效提高VEGF蛋白质及VEGF mRNA阳性表达。而治疗组在肌肉注射鹿瓜多肽注射液治疗21 d后，VEGF蛋白质及mRNA阳性表达明显增强，提示鹿瓜多肽注射液具有促进椎体损伤时VEGF的分秘的作用，这与彭昊研究鹿瓜多肽注射液诱导缺骨折愈合过程中血管内皮生长因子表达，促进骨折局部组织血管再生，促进受损血管内皮修复的功能一致［15］。治疗组骨密度明显增强，这是由于鹿瓜多肽注射液具有多种生物活性，其骨诱导多肽类生物因子促进了机体内影响骨形成和吸收的骨源性生长因子的合成，包括骨形态发生蛋白（BMPs）及FGF等，这些成分可促进骨折部位细胞有丝分裂、分化及趋化作用。BMPs可诱导骨折局部组织血管周围游动的间充质细胞转化为不可逆性的骨系细胞，增加软骨细胞和成骨细胞的活动力，降低破骨细胞分化从而诱导新骨及骨痂形成，进而达到促进骨折修复的目的。FGF可刺激成骨的细胞增值和分化，促进骨胶原蛋白及非胶原蛋白的趋向移动、增加骨钙素的合成，BMPs还可通过与TGF-β和FGF相互之间的协调作用调节细胞外基质而诱导新骨形成，故治疗组患者骨密度较对照组明显增强。有研究表明，在促进骨折早期愈合过程中，甜瓜籽提取物与BMPs、FGF等骨诱导多肽生物因子可促进骨原性生长因子合成，为骨细胞合成BMPs、FGF等骨源性生物因子提供原料，具有明显的协同作用［16］，可促进骨源性生物因子的合成及钙磷代谢，维持骨容量，增加骨钙含量，增强骨密度。

综上所述，鹿瓜多肽注射液可促进椎体骨折愈合过程中VEGF及VEGFmRNA的表达，促使骨折椎体血管内皮新生，增加局部骨折组织血液供应，降低骨折局部毛细血管通透性，减少炎性浸润及渗出，降低破骨细胞分化从而诱导新骨及骨痂形成而达到促进骨折修复的作用。穴位注射鹿瓜多肽治疗脊柱压缩骨折疗效显著，充分发挥中西医结合治疗优势，有一定的临床推广价值。

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The Effect of Deer Melon Polypeptide Injection on Bone mineral Density and Expression of Vascular Endothelial Growth Factor During Rehabilitation of Vertebral Fracture

FENG Yanqin，YAO Zhonghong，QIN Xueqin.Shiyan Taihe Hospital of Hubei province，Hubei Medical College，Hubei，Shiyan 442000，China.

【Abstract】Objective：To observe the effect of Deer melon polypeptide Injection on bone mineral density and expression of vascular endothelial growth factor during rehabilitation of vertebral fracture.Methods：204 patients were randomly divided into the control group and treatment group，each group of 102 cases.Control group were treated with electric acupuncture.Treatment group were treated with point injection of Deer melon polypeptide Injection on the basis of control group.The bone density of patients with bone density was measured by image analysis method.The expression of VEGFmRNA and VEGF was detected by immunohistochemical staining，and the total effective rate was compared.Results：The bone mineral density in treatment group was significantly were higher than that in the treatment group.Compared with control group，the positive expression of serum VEGF and VEGFmRNA were significantly enhanced.And the total effective rate of treatment group was 90.19%，which was higher than that of control group（P＜0.05）.Conclusion：Deer melon polypeptide Injection has a a good effect on Increasing bone calcium precipitation，promoting the formation of bone callus，promoting VEGF secretion during rehabilitation of vertebral fracture，increasing the blood supply of local bone tissue，adjusting the cell metabolism and maintain balance.

【Key words】Deer melon polypeptide injection；Vertebral fracture；Bone mineral density；Vascular endothelial growth factor

中图分类号：R274.15

文献标志码：B

文章编号：1004-745X（2016）04-0699-04

doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2016.04.044

*基金项目：湖北省科技厅项目（B20122418）

通信作者△（电子邮箱：FengYanqin163163@126.com）

收稿日期（2015-11-03）