食管胃结合部癌表皮生长因子-2基因扩增及蛋白表达与临床病理的关系

韩鸿彬　王公平　陈　晔　金灿辉

(河南科技大学第一附属医院胃肠肿瘤外科，河南　洛阳　471003)

食管胃结合部癌表皮生长因子-2基因扩增及蛋白表达与临床病理的关系

韩鸿彬王公平陈晔金灿辉

(河南科技大学第一附属医院胃肠肿瘤外科，河南洛阳471003)

〔摘要〕目的探讨表皮生长因子-2(Her-2)在胃食管结合部癌中的蛋白表达和基因扩增情况及其与胃食管结合部癌患者的临床病理关系。方法采用免疫组织化学法(IHC)和荧光原位杂交技术(FISH)检测80例手术切除的胃食管结合部癌组织中HER-2的蛋白表达和基因扩增情况，并分析与胃食管结合部癌的病理分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移的关系。结果应用FISH技术检测显示在胃食管结合部癌组织中Her-2的蛋白阳性表达率22.5%，应用IHC技术检测其在癌组织表达率为15%，Her-2基因扩增和蛋白阳性表达与胃食管结合部癌的分化程度和临床TNM分期有关(P<0.05)，而与年龄、性别和浸润深度及淋巴结转移无相关性。结论Her-2蛋白过表达和基因扩增是胃食管结合部癌患者的一个预后指标，与其发生发展有关，联合检测HER-2蛋白表达水平及基因扩增程度对于胃食管结合部癌的治疗和预后评估有一定指导意义。

〔关键词〕胃食管结合部癌；表皮生长因子-2；免疫组织化学；荧光原位杂交

胃食管结合部是指食管末段和近侧胃相连接的部位。胃食管结合部癌是指肿瘤中心位于解剖学上贲门远近5 cm这段范围内的腺癌〔1，2〕。近年来胃食管结合部癌发病率在我国逐年增高，关于其发病率及发病机制的研究尚少。本研究通过检测胃食管结合部腺癌组织中的表皮生长因子-2(Her-2)蛋白表达和基因扩增情况探讨其临床意义。

1资料与方法

1.1一般资料收集2009年12月至2012年12月在郑州大学附属洛阳市中心医院手术切除并经病理组织学确诊的胃食管结合部腺癌组织蜡块标本80例。所有病例术前未行化疗或放疗等抗肿瘤治疗。男51例，女29例；年龄41～82岁，中位年龄61岁；分化程度为低分化50例，中-高分化30例；有淋巴结转移62例，无淋巴结转移18例；按AJCC(2010)病理学分期(pTNM):Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期27例。

1.2实验方法

1.2.1免疫组化染色(IHC法)手术切除标本经郑州大学附属洛阳中心医院病理科用10%甲醛溶液固定。常规石蜡包埋、存档。选取需要的蜡块，使用切片机连续3～5 μm厚度切片，将组织切片置入56℃温箱，烘片45 min，供免疫组化染色。运用二步法免疫组织化学检测，按二步法免疫组化检测试剂盒说明书进行操作。鼠抗人Her-2单克隆抗体用已知Her-2阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照，用PBS液代替一抗作为阴性对照。结果判定标准由两位病理科医师双盲法进行。评分标准:-：无染色或<10%肿瘤细胞有膜染色；+:≥10%肿瘤细胞膜有微弱或勉强可见的膜，或细胞只有部分膜染色；:≥10%肿瘤细胞有弱到中度的完全或基底外侧膜染色；:≥10%肿瘤细胞有中等到强的完全或基地外侧膜染色，-、+为阴性,为可疑阳性、为阳性，IHC判定为Her-2阳性。

1.2.2荧光原位杂交GLP Her-2/CEP17双色荧光探针及杂交缓冲液，购自北京金菩嘉公司。切片65℃烘烤过夜，甲醛固定液固定10 min,梯度乙醇脱水。①切片置于78℃甲酰胺变性液中变性15 min,依次置于-20℃预冷的70%、85%、100%乙醇脱水；②用16 μl GLP Her-2/CEP17探针和4 μl杂交缓冲液混匀制成探针混合液，78℃变性5 min后，45℃水浴箱中备用。切片自然干燥，加探针，置湿盒42℃恒温箱杂交过夜，0.3%NP40和0.1%NP40分别洗涤后，DAPI复染，荧光显微镜下观察结果。Her-2评判标准：高倍油镜下计数20个肿瘤细胞，红色信号为Ratio>2.2判定为阳性。上述结果均由两名病理医师依据以上标准进行双盲法判定。

1.3统计学方法应用SPSS13.0统计软件包进行χ2检验。

2结果

2.1IHC法检测Her-2蛋白表达情况IHC法检测80例胃食管结合部癌组织标本中，20例Her-2表达-，44例表达+，4例表达，12例表达，HER-2蛋白表达阳性率为15%。见图1。

图1　胃食管结合部癌组织Her-2蛋白表达(IHC法，×400)

2.2FISH法检测Her-2的扩增情况FISH法检测80例胃食管结合部癌标本，62例无基因扩增，18例呈点状或簇状扩增，与IHC对应表达的12例相对应的FISH检测均Her-2基因扩增，阳性率为22.5%。

图2　胃食管结合部癌组织Her-2扩增检测(FISH法,×1 000)

2.4Her-2的表达与胃食管结合部癌的临床病理体征的关系Her-2蛋白表达与患者的性别、年龄、浸润深度、淋巴结有无转移无明显相关性(P<0.05)，而与肿瘤分化程度及临床分期明显相关(P<0.05)。见表1。

表1　Her-2的蛋白表达与胃食管结合部癌临床

3讨论

Her-2定位于人17号染色体，属于表皮生长因子受体家族成员，毗邻于拓扑异构酶Ⅱa基因旁，Her-2调节基因对各种蛋白的表达来影响细胞分化、增殖和生存，从而可以促进肿瘤生长并诱导其恶性转变〔3〕。在一些胃癌的研究中已显示HER-2在胃腺癌中有过表达，并且与胃癌的发生发展密切相关〔4〕。其高表达与胃癌的预后和侵袭有关。在乳腺癌研究中已经证实有15%～25%的病例发生Her-2基因的扩增和Her-2蛋白的过表达，这类患者往往是肿瘤恶性程度高、进展迅速的病例，且化疗缓解期短，对标准化疗和内分泌治疗易产生耐药，患者的无病生存和总生存期缩短，针对Her-2的抗肿瘤靶向治疗药物,批准用于胃癌临床的有Her-2抑制剂郝赛汀，主要针对胃癌组织Her-2高表达的患者，并在临床治疗应用中取得了一定的疗效〔5,6〕。

目前世界许多国家和地区均出现胃远端肿瘤发病率降低，而近端胃癌特别是胃食管结合部腺癌的发病率却呈上升的趋势，而且近年来的研究表明胃食管癌结合部腺癌的预后较单纯食管癌和胃癌都差，示两者生物学行为存在显著差异〔7,8〕。Tanner等〔9〕认为在解剖学上贲门远近5 cm这段范围内的胃癌发生率要远高于胃部的胃癌，两者Her-2的阳性表达率为24%vs12%，有显著差异性。但在国内也有研究表明：Her-2的阳性表达率和肿瘤的发生部位无关〔10〕。另有文献报道Her-2蛋白在食管癌组织中的表达与分化程度相关，而与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、浸润深度和临床分期等临床指标之间，均未见明显相关性〔11〕。

本研究结果表明IHC法检测Her-2在癌旁组织中无表达，而在胃食管结合部癌组织中过表达阳性率为15%，采用FISH检验的HER-2蛋白表达阳性率为22.5%，这与国内和一些国外研究结果基本一致〔12〕。本文通过用FISH检测法和IHC法检测Her-2基因扩增情况结果显示，胃食管结合部癌IHC检测为的病例完全不需再行FISH检测即可判定为阳性病例，IHC检测-和+的病例无需再行FISH检测可判定为阴性病例，IHC的病例归为可疑类型，需再行FISH检测。此外本结果研究还显示：Her-2蛋白表达与食管胃结合部腺癌的发生有密切关系，说明Her-2参与了食管胃结合部腺癌的增殖、侵袭、转移等行为〔13〕。

综上所述，Her-2蛋白过表达及基因扩增可能有助于胃食管结合部癌恶性程度的判断和预后情况的初步评估，随着对胃食管结合部癌疾病的发生、发展的深入研究，Her-2在胃食管结合部癌的作用机制、蛋白表达和基因扩增状况会进一步明确，这将为胃食管结合部癌的个体化治疗提供更多的理论基础和临床依据。

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〔2015-01-10修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

〔中图分类号〕R735.2

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)11-2678-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.050

第一作者：韩鸿彬(1970-)，男，硕士，副主任医师，主要从事胃肠道肿瘤的临床及基础研究。