半乳糖修饰苦参素脂质体制备工艺研究

李艳辉　刘卫平

摘 要 目的：考察半乳糖修饰苦参素脂质体的处方和制备工艺。方法：采用逆相蒸发法制备半乳糖修饰苦参素脂质体，以包封率为主要指标，均匀设计法对不同制备条件进行考察，确定最佳工艺。结果：逆相蒸发法最佳工艺制备的脂质体在电镜下呈类圆形，粒径分布均匀，药物包封率为35.67%。

关键词 苦参素 脂质体 逆相蒸发法 包封率

中图分类号：R735.7 文献标识码：A

苦参素是从中药苦参中提取，分离，纯化制得的生物碱。它有多方面的药理作用和功效，临床上主要用于治疗各种原因所致的急慢性肝损害等病症。根据肝实质细胞膜上存在能够专一性识别含有半乳糖基或乳糖基化合物的去唾液糖蛋白受体，本研究采用逆相蒸发法制备半乳糖修饰苦参素脂质体（LML），达到主动靶向肝脏的目的。

1仪器与材料

旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；8200HP型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；SHZ-3型循环水真空泵（河南省巩义市英峪仪器厂）；82—5B型磁力加热搅拌器（南通科学仪器厂）；

苦参素（OXY，宁夏紫荆花药业公司生产）；自制乳糖酰磷脂酰乙醇胺（Lac-PE）；卵磷脂（进口分装，上海源聚生物科技有限公司）；胆固醇（上海源聚生物科技有限公司）；乙腈（色谱纯），其它试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1 Lac-PE 的合成和纯化

将磷脂酰乙醇50mg溶解于5ml2：1的氯仿-甲醇中，然后加入10ml0.2 mol/l、PH 9.0的碳酸氢钠缓冲液，在40℃条件下用旋转蒸发器除去有机溶剂，加入乳糖500mg及硼氢化钠250mg彻底混匀，在25℃恒温箱中温400 h。将反应液装入透析袋，磁力搅拌下室温透析3d。应用硅酸柱纯化，洗脱液为氯仿-甲醇的梯度配比液（9：1、7：3、5：5、3：7）最后用甲醇洗脱。收集3：7所得洗脱液，即为糖脂（Lac-PE）溶液，经冰冻干燥得白色粉末，低温冰箱保存备用。

2.2逆相蒸发法制备LML

取卵磷脂和胆固醇（重量比为4：1）外加10%mol的 Lac-PE，用乙醚溶解，按有机溶媒：水相为4：1的比例加入药液，水浴超声得W/O型乳剂，减压除去乙醚，达到胶态后加入适量缓冲液，继续旋转直至形成均匀的混悬液，即得。

2.3均匀设计优化制备工艺

根据预试验结果，以磷脂/胆固醇质量比（X1）、乙醚与药物溶液的体积比（X2）、超声时间（X3）、超声波功率（X4）和药物量（X5）为主要考察因素，按均匀设计U13（1312）表试验。以包封率（Y）为评价指标， 经综合考虑，确定制备氧化苦参碱脂质体的最佳条件：X1=4：1，X2=16：4，X3=5min，X4=3（250W），X5=10mg/mL。

2.4优化条件验证

2.4.1包封率测定

按优化处方制备3批LML，测定包封率，结果平均包封率为35.67%，RSD为3.51%（n=3）。

2.4.2形态观察

取优化工艺条件下制备的脂质体混悬液，稀释一定倍数后滴至专用铜网上，用1.5%磷钨酸染色，自然晾干，于透射电子显微镜下观察到，氧化苦参碱脂质体呈类圆形，粒度分布窄，均匀圆整，分散性好。

2.4.3粒径分布

将制备的脂质体混悬液稀释至适当倍数，用激光粒度分布仪测定脂质体的粒径大小及分布，氧化苦参碱脂质体的平均粒径278.6nm，粒径分布窄，粒径范围与肝靶向粒径要求非常吻合。

2.4.4稳定性考察

将制备的脂质体分别于室温（25℃左右）、冷藏条件（4℃左右）下放置4个月，观察脂质体外观形态、分散性及包封率变化。

结果发现，在冷藏条件时，脂质体在2个月内外观无变化，在三个月时有分层现象发生，然而轻轻振摇就可基本恢复到初始胶体状态；而在室温条件下贮存时，脂质体在2个月内便出现不可逆性沉淀现象，颗粒变大，包封率变化结果见表1。

结果表明，在室温条件下放置脂质体不稳定，出现沉淀，而在冷藏条件下，粒径有所增加，但仍符合要求，说明脂质体需在冷藏条件下保存。

3讨论

乳糖脂-磷脂比对脂质体的包封率影响不大，而且对脂质体的大小以及外观、颜色、稳定性等影响也不大，原因可能是乳糖脂作为两亲分子插入到脂质体双分子层之间的空隙，疏水性部分与脂质体内层疏水性部分结合，外部亲水性头部与脂质体外部亲水性部分结合，增加了脂质体双分子膜的稳定性，同时使得脂质体外膜具有更佳的亲水性。

参考文献

[1] 黄赞松，周喜汉.苦参素药理和抗肿瘤作用研究[J].医学综述，2009，15（11）： 1701.

[2] Hisashi Yoshioka，Teesushi Ohmura，Mariko Hasegawa，et al.Synthesis of Galactose Derivatives That Render Lectin-induced Ag-glutinating Ability to Liposomes.Journal of Pharmaceutical Sci-ences，1993，82（3）：273-275.