甲状腺转录因子及Napsin A在肺腺癌转移至浆膜腔积液脱落细胞中的表达

曾 涛，翁永彬，杨宗梅

(四川省自贡市中医医院病理科，四川 自贡 643000)

甲状腺转录因子及Napsin A在肺腺癌转移至浆膜腔积液脱落细胞中的表达

曾 涛，翁永彬，杨宗梅

(四川省自贡市中医医院病理科，四川 自贡 643000)

目的 探讨甲状腺转录因子(thyroid transcription factor-1，TTF-1)及Napsin A在肺腺癌浆膜腔积液脱落细胞学中的诊断价值。方法 收集胸水及心包积液标本67例，经离心沉淀制作成细胞石蜡块，经HE切片筛检出肺腺癌转移42例、间皮细胞反应性增生16例及乳腺癌转移9例。采用免疫组织化学SP法标记三组细胞中TTF-1、Napsin A的表达。结果 TTF-1在肺腺癌中表达38例(90.48%)，在增生间皮细胞及乳腺癌细胞中无表达；Napsin A在肺腺癌中表达35例(83.33%)，在增生间皮细胞中表达仅1例(6.25%)，肺腺癌中TTF及Napsin A的表达明显高于其他两组，差异有统计学意义(P< 0.001)。结论 TTF-1和Napsin A是两项重要的肺腺癌标记物，对鉴别浆膜腔积液脱落细胞学的组织来源具有重要价值。

肺腺癌；脱落细胞学；细胞块；免疫组化

近年来，肺腺癌的发病呈明显上升趋势并年轻化，且早期多无特异症状，部分患者以胸腔或/和心包腔积液为首发症状，需行积液脱落细胞检查以明确诊断，但在转移的早期，积液中的恶性细胞成分较少，与脱落的增生浆膜腔间皮细胞混合在一起，以常规脱落细胞学及普通HE染色很难鉴别诊断。细胞块是将收集的脱落细胞做成石蜡块，具有组织学的诸多优点[1]，但因缺乏肿瘤特有的间质背景成分，又难以凭间质血管、神经间的关系协助诊断良、恶性。为此，本研究在制作细胞石蜡块的基础上，借助组织起源特异性因子—甲状腺转录因子(thyroid transcription factor-1，TTF-1)及Napsin A对胸水细胞块中的异型细胞成分进行标记，以提高诊断准确率，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2012年1月至2015年6月我院送检的胸腔积液54例及心包积液13例，全部病例均有临床、病理(手术病理诊断史、细胞异型性、免疫细胞化学表达模式结果)、辅助检查(胸水生化酶指标、CT影像资料)等完整的诊断资料。

1.2 方法

1.2.1 细胞块制备方法 将胸水或心包积液标本静置4小时后，适量倾去上部标本、保留其底部胸水约20 ml，摇匀后取10 ml标本于一次性软塑料试管中，离心机2000 r/min离心5 min，弃去上清液(血性胸水需加入适量50%的乙醇溶解红细胞)。若离心后沉淀标本较少，可重复加样离心一次。轻轻倾去上清液，沿沉淀物边缘上2 mm处用剪刀剪去沉淀物外多余的试管，剩余试管底部及标本直接用拭镜纸包裹于塑料包埋盒，固定于中性福尔马林中，然后放入脱水机中进行固定、脱水、浸腊，包埋。并行常规HE染色。

1.2.2 免疫细胞化学方法 步骤同免疫组织化学SP法、DAB染色。抗原修复方法用pH为6.0的柠檬酸盐缓冲液高温高压修复。每次均以已知阳性肺腺癌组织标本做阳性对照、TBS代替一抗做阴性对照。所有一抗、试剂盒均由福州迈新生物技术开发有限公司提供。

1.3 结果判读 TTF-1位于胞核呈棕黄色颗粒状为阳性(胞质非特异着染者视为污染，重新做一遍后仍无改善者，判为阴性)，Napsin A位于胞质呈棕黄色颗粒状为阳性。

1.4 统计学方法 用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。组间比较采用χ2检验。P< 0.05为差异有统计意义。

2 结果

2.1 HE染色结果 可见大量异型细胞，表现为胞核着浓染、核形不规整，排列呈巢团或弥漫成片者共67例，依据病史资料、影像资料、辅助检查资料提示，其中肺腺癌42例，乳腺癌9例，反应性间皮增生16例。

图1 肺腺癌患者心包积液细胞块中TTF-1、Napsin A的表达 a：异型细胞核表达TTF-1；b：异型细胞质表达Napsin A (IHC DAB染色 ×100)

2.2 免疫细胞化学染色 免疫细胞化学检测发现，肺腺癌的TTF-1阳性表达率高达90.48%，特异性达100%；Napsin A的阳性表达率达83.33%，特异性达97.6%，见表1、表2。

表1 肺腺癌及反应性增生间皮细胞、乳腺癌中免疫细胞化学表达结果

表2 肺腺癌及反应性增生间皮细胞表达模式 (n)

3 讨论

由于肺腺癌多起源于肺泡，常发生在周围肺组织，故早期临床多无症状，往往因出现转移特别是胸腔转移引起积液时方就诊，且一旦肺腺癌出现浆膜腔恶性积液时，常因肺压迫性萎缩、肺实变，普通X射线甚至CT也常难以发现病灶，即使在CT引导或超声引导下也难以穿刺到准确病灶并获取到有价值的标本；而此时，胸腔及心包腔的积液穿刺却相对容易得多，可不借助任何影像引导即可获得标本进行脱落细胞学检查。虽然脱落细胞学检查方法因为设备简单，操作简便，患者痛苦少而易于接受；然而由于癌转移的初期患者积液中的恶性细胞成分较少，与脱落的浆膜腔间皮细胞混合在一起，从常规脱落细胞学及普通HE染色很难鉴别诊断。

TTF-1是一种分子量为38～40 KDa的核蛋白，在胎儿肺组织和成人Ⅱ型肺泡上皮、甲状腺滤泡上皮中存在，而在Ⅰ型肺泡上皮中不表达。由于甲状腺来源的癌超过95%的类型为乳头状癌，其预后良好，几乎不发生胸腔及心包腔转移，故在鉴别是否为肺源性腺癌中TTF-1具有理论上的特异性。由于TTF-1阳性定位在胞核，故在免疫细胞化学的定位分析上具有技术上的特异性。事实上，我们的实验结论显示阳性均为胞核，即使有极少量的异型细胞，也能很好的表达TTF-1(如图1)。

Napsin 是一种胃酶样天冬氨酸蛋白酶，有两种密切相关的Napsin A和Napsin B，其中Napsin A是一种分子量接近38 KDa的单链蛋白，在人类的肺和肾内高表达。因此在肺的转移性腺癌的组织起源上有重要的应用价值，有报道Napsin A和TTF-1在转移性肺腺癌中表达率分别达87.0%和81.5%[2]，虽然二者间差异没有统计学意义，但Napsin A的评分高于TTF-1(P< 0.001)，且在肺原发性腺癌中表达亦如此。而我们的资料分别达83.33%和90.48%，且特异性均较高：Napsin A的表达特异性达97.6%，TTF-1的特异性达100%。当然也有的通过组织芯片方法研究了1674例含鳞癌及小细胞癌在内的大宗病例，而发现Napsin A比TTF-1在鉴别原发性肺癌中更敏感且特异[3]，说明与癌的类型有关。但该报道表达率也均较高，研究表明在肺腺癌与肺鳞癌的鉴别中也有重要价值，说明该两项标记在肺源性癌的脱落细胞学中也有重要的病理诊断价值。同时研究中发现，有2个病例TTF-1阴性表达，而Napsin A阳性，由此可见联合应用二者可提高阳性检出率。有报道[4]用双染法同时标记胸水中肺腺癌细胞，发现TTF-1和Napsin A在83%的肺腺癌病例中同时表达TTF-1及Napsin A，4%的病例单表达TTF-1，9%的病例单表达Napsin A。也支持我们的实验。

但需注意的是，TTF-1和Napsin A在肺外组织起源性肿瘤中亦有报道，比如结肠、子宫内膜、宫颈和卵巢等[3，5，6]，因此诊断上最好联合应用二者并且必须结合临床病史、尤其是继往手术病理诊断史、影像学(超声及CT、MRI、X射线)甚至是重要的生化指标(肿瘤酶谱)，这样的诊断才更可靠。同时，我们在今后的研究中要积累非肺源性肿瘤的免疫组化表型以提高对该标记的全面应用性认识。

[1] 刘福川，王小兵，陈守菊，等.胸腹水细胞块的免疫细胞化学研究[J].中国肿瘤，2004，13(1)：42-44.

[2] Kim WH，Chung DH，Kim MY，et al.Napsin A is a useful marker for metastatic adenocarcinoma of pulmonary origin[J].Histopathology，2014，65(2)：195-206.

[3] Turner BM，Cagle PT，Sainz IM，et al.NapsinA，a new marker for lung adenocarcinoma，is complementary and more sensitive and specific than thyroid transcription factor 1 in the differential diagnosis of primary pulmonary carcinoma：Evaluation of 1674 cases by tissue micorarray[J].Archives of pathology﹠laboratory medicine，2012，136(2)：163-171.

[4] Liu L，Cohen C，Siddiqui MT.Thyroid transcription factor 1 and napsin A double staining in lung adenocarcinoma in plerual fluid[J].Acta Cytologica：The Journal of clinical cytology and cytopathology，2012，56(4)：425-430.

[5] Fan L，Li F，Memahon L，et al.Diagnostic utility of PAX8，TTF-1 and NapsinA for discriminating metastatic carcinoma from primary adenocrcinoma of the lung[J].Biotechnic and Histochemistry，2012：87(8)：30-34.

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The expression of TTF-1 and Napsin A in metastased tumor cells in pleural effusions of pulmonary adenocarcinoma

ZENG Tao，WENG Yong-bin，YANG Zong-mei

(Department of Pathology，Zigong City Hospital of Traditional Chinese Medical，Zigong 643000，China)

Objective To investigate the diagnostic value of thyroid transcription factor-1(TTF-1) and Napsin A for identification of pulmonary adenocarcinoma cells in pleural effusions.Methods The samples of pleural effusions and pericardial effusions were collected from 67 patients and made to be paraffin cytoblocks after precipitation by centrifugation.From these samples，42 cases were identified as lung adenocarcinoma，16 cases as mesothelial cell reactive hyperplasia and 9 cases as breast adenocarcinoma by using HE staining.Then，expressions of TTF-1 and Napsin A in the three types of diseases were examined with immunohistochemical SP method.Results TTF-1 expression was positive in 38 cases with pulmonary adenocarcinoma but negative in cases with hyperplasia mesothelial cells and breast adenocarcinomas.Napsin A expression was positive in 35 cases with pulmonary adenocarcinoma and one case with hyperplasia of mesothelial cells.The differences were all significant (P< 0.001).Conclusion These data suggest that TTF-1 and Napsin A are two important markers for the pulmonary adenocarcinoma.They are very usefully to identify the cells in pleural effusions.

Pulmonary adenocarcinoma； Exfoliative cytology； Paraffin cytoblock； Immunohistochemistry

R446.8； R734.2

A

1672-6170(2016)03-0062-03

2015-09-15；

2016-02-26)