某种猪场伪狂犬病血清流行率的横断面研究

杨 涛（厦门市动物疫病预防控制中心，福建厦门 361009）



某种猪场伪狂犬病血清流行率的横断面研究

杨 涛
（厦门市动物疫病预防控制中心，福建厦门 361009）

摘 要：[目的] 制定科学的猪伪狂犬病净化策略，估计猪场伪狂犬病的流行率和群间分布情况。[方法] 通过科学合理抽样，采用针对性的检测方法，使用猪伪狂犬病病毒gE-ELISA试剂盒，对采自厦门市一种猪场不同猪群的1561份样品进行了血清学检测。[结果]该猪场伪狂犬病血清学真实流行率为90.8%（95% CI：87.9% ～ 93.7%）；不同猪群中，种公猪的gE抗体阳性率最低，其次为育肥猪，哺乳仔猪的gE抗体阳性率最高；不同品种间，黑猪的gE抗体阳性率最高，其次为大白和长白，杜洛克的gE抗体阳性率最低。[结论]该种猪场可能感染了新的伪狂犬病毒，导致血清学流行率较高；在今后类似的伪狂犬病血清学流行率研究中，可以考虑把哺乳仔猪排除在研究群外；如无法在短期内淘汰所有PRV gE抗体阳性种猪，建议首先要淘汰阳性种公猪，其次要探索合理的免疫程序，定期加强监测。

关键词：猪伪狂犬病；血清学；流行率

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）又称奥耶斯基氏病（Aujeszky’s disease），是由伪狂犬病病毒（PRV）引起的一种急性、发热性传染病，可感染各生长阶段的猪群，对养猪业危害极大。除澳大利亚外，该病在世界各地有养猪业的国家都曾发生。目前许多国家普遍使用gE基因缺失疫苗来控制该病，美国和一些欧盟国家还实现了净化和根除[1-2]。我国于上世纪70年代从匈牙利引进了PRV Bartha K61株。随着gE基因缺失苗的普遍应用，该病得到了有效控制。《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020）》将猪伪狂犬病列为优先防治的动物疫病之一，并将其作为重点净化的种畜禽疫病，要求到2020年全国所有种猪场都要达到净化标准。中国动物疫病预防控制中心于2014年启动了规模化养殖场伪狂犬病净化示范场和净化创建场评估工作。为切实做好这项工作，参照国内外动物疫病净化经验，在厦门市某种猪场开展了猪伪狂犬病净化工作。

该种猪场是一家存栏上万头的大型规模场，场区环境优美，生产管理规范，防疫和生物安全工作开展较好，长期使用PRV gE基因缺失苗预防猪伪狂犬病。在2012年之前的垂直传播性疫病监测和日常监测中，从未检测到伪狂犬病野毒感染抗体，但从2013年开始，陆续检测到了PRV gE抗体。为了掌握该种猪场伪狂犬病的感染状况，估计其流行率和群间分布，2015年6月初至9月中旬，在该猪场开展了血清流行病学调查，为下一步净化策略的制定提供理论依据。

1　材料与方法

1.1目标群

采用横断面研究方法对厦门市某种猪场进行抽样检测和问卷调查，估计其猪伪狂犬病血清学流行率。该猪场6月初存栏10 032头，包含种公猪、生产母猪、后备母猪、哺乳仔猪、保育猪和育肥猪等6大猪群，所有猪群都被纳入调查范围。

1.2抽样策略和样本量

针对不同猪群，采取不同的采样策略。对种公猪、生产母猪和后备母猪全部采样。对哺乳仔猪、保育猪和育肥猪，根据猪场内各猪群的个体数量（N），用估计流行率的方法计算抽样数量。按95%置信水平（CL）和10%可接受绝对误差（d），设预期流行率为50%（p），根据计算公式：n=（1.96）2p（1-p）/d2，群体规模较小时再通过校正公式：na=n/ （1+n/N），确定需要抽取的样本量（na）[3]。现场抽样时采取系统随机抽样，即按一定的栏位间隔进行抽样。

1.3血样收集和检测

将从猪场采集的全血样品置于一次性采血器中，送至厦门市动物疫病预防控制中心兽医实验室进行血清分离。检测前置于-20℃冷冻保存。血清样品用ID.vet公司生产的猪伪狂犬病毒gE-ELISA试剂盒检测PRV gE抗体。

1.4数据分析

表观流行率（AP）为检测到的阳性猪与抽样研究群的占比。首先通过直接标化法计算出全场的表观流行率（AP’），标准化计算公式为：AP’=Σ（Ih*Th），其中Ih是不同猪群的阳性率，Th是不同猪群在总群中的分布比例，总体比例的95%置信区间（CI）根据公式：CI=AP’± Z*Sp计算，。式中，Sp是总体抽样误差，ph是第h层样本中阳性率，Wh是第h层权重，nh是第h层样本量，fh是第h层抽样比例；然后结合敏感性（Se）和特异性（Sp）计算真实流行率（TP），计算公式：TP=(AP+Sp-1)/(Se+Sp-1)。阳性率的95%CI根据公式计算，其中p是阳性率，Z为标准正态分布中概率为0.05所对应的值，n为抽样数量。

2　结果与分析

2.1不同阶段猪群gE抗体阳性率分布

在耗时3个半月的调查中，共采集了1 561份不同猪群的血清样品。其中在计划全群抽样的生产母猪中，实际采样数量未达到抽样有求，而哺乳仔猪、保育猪和育肥猪的采样数量均超过了抽样有求。从不同猪群gE抗体阳性率分布情况来看，种公猪的gE抗体阳性率最低，其次为育肥猪，哺乳仔猪的gE抗体阳性率最高，具体数据见表1。

表1　不同阶段猪群gE抗体阳性率分布

2.2流行率估计

在1 561份血清样品中，检出gE抗体阳性样品1 412份，阳性率为90.5%。通过直接标准化法，得到该猪场伪狂犬病的血清学表观流行率为89.0% （95% CI：86.1% ～91.9%）。根据ELISA诊断试剂盒的试验敏感性（Se）为98%，特异性（Sp）为99.9%[5]，得到该猪场伪狂犬病的真实流行率为90.8%（95% CI：87.9% ～ 93.7%）。

2.3不同品种猪群gE抗体阳性率分布

该场共有4个品种的猪群。分品种计算后，黑猪的gE抗体阳性率最高，其次为大白和长白，杜洛克的gE抗体阳性率最低。经c2检验，p = 0.097，说明各品种间的差异没有统计学意义，各品种的不同阶段猪群gE抗体阳性率差异也不显著，具体数据见表2。

表2　不同品种猪群gE抗体阳性率分布

3　讨论

本研究通过科学抽样，采用合适的统计学方法，对某种猪场伪狂犬病血清学流行率进行了估计。在现场采样中，考虑到采血行为会导致怀孕初期和重胎母猪流产，因而对生产母猪采样时，避开了这两类怀孕母猪，因此导致了生产母猪的抽样数量未达到研究设计的要求。但如果采用估计流行率的方法计算生产母猪的抽样数量，本次研究抽取的生产母猪数量，还是远远超过了理论采样量，因而生产母猪的调查结果是可靠的。调查发现哺乳仔猪的gE抗体阳性率最高，这个结果影响了对猪场伪狂犬病血清学流行率的估计。导致其血清学流行率偏高的原因是由于哺乳仔猪携带母源抗体。即使出生健康未感染伪狂犬病病毒的仔猪，也能检测出gE抗体阳性。因此建议在今后类似的猪伪狂犬病血清流行率研究中，可以考虑把哺乳仔猪排除在研究群外。调查结果显示，该种猪场伪狂犬病的血清学流行率较高，这可能与猪场感染了新流行的伪狂犬病毒有关。在2011年底，北方部分省份在一定范围内暴发了猪伪狂犬病[6-7]，甚至一些免疫过伪狂犬病疫苗，伪狂犬病控制较好的规模化猪场也出现了疑似伪狂犬病的流行。安同庆、徐秀玲[8-9]等研究表明，新流行的伪狂犬病毒致病性有所增强，现有的商用疫苗Bartha K61株对其仅有50%的保护率。调查中了解到，该猪场曾在2012年12月下旬从广州引进一批种公猪，但未对其进行伪狂犬病检测，此后在2013年的垂直传播性疫病监测结果中出现了很少几例母猪PRV gE抗体阳性。当时并未引起重视，直到2014年初开始发现母猪流产，才意识到有可能因此传入了伪狂犬病。

动物疫病防控主要分为3个阶段：控制、净化和消灭。目前我国在《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》中，明确要求到2020年所有种猪场要达到伪狂犬病净化标准。按照该猪场目前的伪狂犬病血清流行率，建议首先要控制猪伪狂犬病流行，降低流行率。只有将流行率降低到一定程度，才能进一步做到疫病的净化。考虑到该猪场的经济效益，无法在短期内淘汰所有PRV gE抗体阳性种猪，建议首先要坚决淘汰阳性种公猪，其次是探索最合理的免疫程序，定期加强监测。另外，在条件允许的情况下，可以建立猪伪狂犬病野毒抗体阴性的生产核心群，以生产核心群为轴心，逐步扩大净化效果，最终建立净化场。

参考文献：

[1] Komaromi M，Szabo I. Eradication of Aujeszky’s disease from a large-scale pig farm[J]. Acta Veterinaria Hungarica，2005，53（4）：515-524.

[2] Elbers A R W，Braamskamp J，Dekkers L J M，et al. Stegeman Aujeszky’s disease virus eradication campaign successfully heading for last stage in the Netherlands[J].Veterinary Quarterly， 2000，22（2）：103-107

[3] 沈朝建，王幼明. 兽医流行病学调查与监测抽样技术手册[M]. 北京：中国农业出版社，2013：43.

[4] 孙向东，刘拥军，王幼明. 兽医流行病学调查与监测：抽样技术[M]. 北京：中国农业出版社，2011：85-86.

[5] Morenkov O S， Fodor N， Fodor I. Indirect ELISAs based on recombinant and affi nity-purifi ed glycoprotein E of Aujeszky’s disease virus to differentiate between vaccinated and infected animals[J]. Acta Vet Hungarica，1999，47（1）：137-150.

[6] 彭金美，安同庆，赵鸿远，等. 猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J]. 中国预防兽医学报，2013，35（1）：1-4.

[7] 解伟涛，梁跃，乔松林，等. 猪伪狂犬病实验室检测与控制净化常见问题[J].今日养猪业，2015（9）：80-81.

[8] An T Q，Peng J，Tian Z，et a1. Pseudorabies Virus Variant in Bartha K61-Vaccinated pigs，China，2012[J]. Emerging Infectious Diseases，2013，19（11）：1749-1755.

[9] Yu X L，Zhou Z，Hu D M，et a1. Pathogenic Pseudorabies Virus，China，2012[J]. Emerging Infectious Diseases，2014，20 （1）：102-104.

（责任编辑：朱迪国）

A Cross-sectional Study on Sero-prevalence of Pseudorabies in a Pig Breeding Farm

Yang Tao
（Xiamen Animal Disease Prevention and Control Center，Xiamen，Fujian 361009）

Abstract：[Objective] To formulate scientifi c purifi cation strategies of pseudorabies in pigs，to estimate the prevalence rate of pseudorabies and its distribution in swine herds by scientifi c and reasonable sampling and specifi c test methods. [Methods]A total of 1 561 serum samples from a pig breeding farm in Xiamen were collected and tested by PRV gEELISA kits. [Results] The true prevalence of pseudorabies in the pig farm was 90.8%（95% CI：87.9% ～ 93.7%）. In different swine herds，the breeding boars’ positive rate of gE antibody was lowest，the following was fattening pigs，and the suckling pigs’ positive rate of gE antibody was the highest. In different species of pigs，the Black Pigs’ positive rate of gE antibody was the highest，the following was Large White and Landrace，and the Duroc’s positive rate of gE antibody was lowest. [Conclusions] The breeding pig farm might be infected with the new pig pseudorabies virus causing the higher serological prevalence rate. In the future，the lactation piglets should be count out of the research groups in the similar pig pseudorabies serology prevalence rate studies. If all breeding pigs with PRV gE positive antibody couldn’t be eliminated in the short term，it was suggested that the positive breeding boars could be eliminated fi rstly，and then should explore reasonable immunity procedure and strengthen monitoring on a regular basis

Key words：porcine pseudorabies；serology；prevalence rate

中图分类号：S851.3

文献标识码：A

文章编号：1005-944X（2016）05-0014-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.005

基金项目：厦门市科技计划项目（3502Z20154095）