CK2β、VEGF和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值研究

陈晓露，张　波，吴蓉宜

(1.乐山职业技术学院病理教研室，四川乐山 614000；2.四川省成都市第六人民医院病理科　610051)



CK2β、VEGF和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值研究

陈晓露1，张波1，吴蓉宜2

(1.乐山职业技术学院病理教研室，四川乐山 614000；2.四川省成都市第六人民医院病理科610051)

[摘要]目的探讨蛋白激酶CK2β、血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值。方法选取成都市第六人民医院妇科宫颈癌手术患者123例作为研究组，同期选取慢性宫颈炎手术患者119例作为对照组，采用免疫组化法检测CK2β、VEGF和p53蛋白表达水平，比较两组阳性表达差异和分析3者对预后的预测价值。结果研究组CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，CK2β、VEGF和p53蛋白表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移具有明显的相关性，其中临床分期和病理分级越高，合并淋巴结转移者CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率越高，差异具有统计学意义(P<0.05)，宫颈癌患者5年生存率为47.97%(59/123)，其中预后状况与临床分期、病理分级、淋巴结转移、CK2β、VEGF及p53表达显著相关，临床分期和病理分级越高，合并淋巴结转移及CK2β、VEGF与p53阳性表达者5年生存率更低，差异具有统计学意义(P<0.05)，其中Cox多因素分析显示，CK2β、VEGF与p53表达是预后状况的独立影响因素。结论宫颈癌组织CK2β、VEGF和p53阳性表达显著上调，其中三者阳性表达预示疾病预后欠佳，对疾病的预后状况具有重要的预测价值。

[关键词]宫颈肿瘤；CK2β；血管内皮生长因子；预后

宫颈癌是妇产科常见的恶性肿瘤，其中发展中国家宫颈癌的发生率约占妇产科恶性肿瘤的20%～30%，严重威胁女性身心健康[1]。目前受性传播疾病和环境改变的影响，宫颈癌发生率呈逐渐增高的倾向，且发生年龄呈逐渐年轻化趋势[2]。蛋白激酶CK2β可能参与恶性肿瘤的发生和发展；血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在恶性肿瘤中的表达明显增加，且与肿瘤细胞浸润、转移和预后具有明显的相关性；即生型p53是一种抑癌基因，p53结构和功能异常改变与宫颈癌的发生和发展具有紧密的关系。但关于CK2β、VEGF和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值研究甚少，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取2008年1月至2010年1月成都市第六人民医院妇科宫颈癌手术患者123例作为研究组，纳入标准：全部患者均经组织病理学检查明确宫颈癌的诊断标准[3]，均经伦理委员会同意，全部患者签署知情同意书，并实施第1次手术治疗，术前未经化疗、放疗和免疫性治疗等辅助治疗措施，随访资料完整，患者年龄23～75岁，平均(49.51±7.65)岁，腺癌21例，鳞癌102例，肿瘤直径测量根据妇科检查和MR检查结果确定，直径小于4 cm 64例，直径大于或等于6 cm 59例，临床分期：Ⅰ期56例，Ⅱ～Ⅲ期67例；病理分级：Ⅰ～Ⅱ级98例，Ⅲ级25例，合并淋巴结转移43例，无淋巴结转移80例。同期选取慢性宫颈炎 [人乳头瘤病毒(HPV)检测排除HPV阳性转化为癌前病变或癌变]手术患者119例作为对照组，年龄24～76岁，平均(50.13±6.98)岁，两组患者年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器与试剂兔抗人多克隆CK2β抗体(1∶200)，鼠抗人多克隆VEGF抗体(1∶200)，鼠抗人单克隆p53抗体(1∶800)，抗体稀释液均由上海基因科技有限公司提供，Elivision二步法工作试剂盒，PBS缓冲液、DAB显色剂均有北京金桥生物技术有限公司提供。

1.3方法采用Elivision免疫组织化学方法检测CK2β、VEGF和p53蛋白表达水平。全部宫颈组织标本均采用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续5 μm厚切片，乙醇梯度水化处理，PBS缓冲液洗涤3次，采用高温高压修复3 min，3%H2O2孵育10 min，PBS缓冲液洗涤3次，滴加CK2β、VEGF、p53一抗，室温下孵育120 min，滴加二抗，室温下孵育60 min，弃PBS缓冲液，采用DAB显色剂显色操作，苏木精复染，中性树胶封片，显微镜下观察，实验步骤严格参照Elivision二步法工作试剂盒操作。

1.4观察指标

1.4.1临床分期评估标准采用2009年国际妇产科协会(FIGO)关于国际宫颈癌分期标准[4]，0期：原位癌；Ⅰ期：癌症病灶局限于宫颈，不累及子宫体部；Ⅱ期：癌症病灶超出子宫颈，但尚未达到盆壁或阴道下1/3；Ⅲ期：癌症病灶累及盆壁及阴道下1/3，合并癌症相关性肾盂积水或肾无功能者；Ⅳ期：癌症病灶扩散超出真骨盆，临床侵犯直肠黏膜或膀胱黏膜。

1.4.2病理分级采用三级分级系统[5]，Ⅰ级：高分化，癌巢中合并多数角化现象；Ⅱ级：中度分化，宫颈上皮中层细胞分化，细胞大小不一，癌巢中无明显角化现象；Ⅲ级：低分化和未分化的小细胞。

1.4.3免疫组化结果判定[6]对于细胞核出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，200倍显微镜下随机选取5个视野，计数100个细胞，采用阳性细胞率与染色强度的半定量积分法评估，阳性细胞率0～10%评定0分，11%～25%评定为1分，26%～50%评定为2分，51%～75%评定为3分，76%～100%评定为4分；染色强度无色评定为0分，染色强度淡黄色评定为1分，染色强度棕黄色评定为2分，染色强度棕褐色评定为3分。阳性细胞率积分+染色强度积分=0～1分为阴性，2～3分为弱阳性，4～5分为中度阳性，6～7分为强阳性，最终阴性和弱阳性作为阴性表达，以中度阳性和强阳性作为阳性表达。

1.4.4随访全部患者均采用信访、电话和门诊等方式实施随访，以出院之日开始实施随访，以死亡、失访及最后1次随访时间(2015年5月1日)作为随访截止日期。生存期是指确诊之日至死亡之日，采用年作为计算单位。

1.5统计学处理采用SPSS18.0统计软件进行分析，两组间的计数资料采用χ2检验，预后生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线，采用Cox风险回归模型分析预后的独立影响因素，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组CK2β、VEGF和p53蛋白表达比较研究组CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1，图1。

表1　两组CK2β、VEGF和p53蛋白表达比较[n(%)]

A：CK2β；B：VEGF；C：p53；→：阳性细胞。

图1CK2β、VEGF和p53蛋白在宫颈癌组织中呈强阳性表达(免疫组织化学法×200)

2.2CK2β、VEGF和p53蛋白表达与临床病理参数的关系CK2β、VEGF和p53蛋白表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移具有明显的相关性，其中临床分期和病理分级越高，合并淋巴结转移者CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率越高，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3宫颈癌预后状况及其相关因素分析研究组5年生存率为47.97%(59/123)，其中预后状况与临床分期、病理分级、淋巴结转移、CK2β、VEGF及p53表达显著相关，临床分期和病理分级越高，合并淋巴结转移及CK2β、VEGF与p53阳性表达者5年生存率越低，不同临床病理特征差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3；CK2β、VEGF与p53表达是预后状况的独立影响因素，见表4。

表2　CK2β、VEGF和p53蛋白表达与临床病理参数的关系

表3　宫颈癌预后状况的单因素分析[n(%)]

表4　宫颈癌预后状况的多因素分析

3讨论

蛋白激酶CK2β广泛存在于真核细胞中的丝氨酸/苏氨酸激酶内，具有高度结构稳定性，存在与细胞核基质相关的半胱氨酸残基，可作为CK2β信号通路细胞内传递间的位点。相关文献报道表明，CK2β通过调节细胞内肿瘤转移侵袭相关的信号通路，促进恶性肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤细胞凋亡，增强恶性肿瘤细胞多重耐药表型，促进肿瘤新生血管形成等[7]。CK2β异常表达与临床病理特征和疾病预后状况具有明显的相关性。食管癌组织CK2β阳性表达率明显高于食管正常组织，且与食管癌临床分期具有紧密的关系[8]。CK2β与恶性肿瘤临床分期、组织学分化程度和浸润深度等临床病理特征紧密相关，可作为恶性肿瘤预后评估指标之一。同时，CK2β在部分恶性肿瘤化疗耐药期间具有一定的作用，化疗药物可通过干扰CK2β因子介导的磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase，PI3K/Akt)途径显著增强恶性肿瘤细胞对化疗药物的敏感程度，从而诱导恶性肿瘤细胞凋亡。但关于CK2β用于预测宫颈癌预后状况的价值研究甚少。本研究结果显示，CK2β表达在宫颈癌组织中显著增强，其临床分期、病理分级越高，CK2β阳性表达率越高；合并淋巴结转移者CK2β阳性表达率更高。本研究进一步的预后相关因素分析显示，CK2β阳性可作为宫颈癌预后的独立预测指标，其中，CK2β阴性表达者5年生存率是CK2β阳性表达者的4.285倍。因此，CK2β阳性表达预示宫颈癌预后欠佳，CK2β表达对宫颈癌患者预后具有重要的预测价值。

VEGF是目前发现的特异性血管内皮生长刺激因子之一，其在肿瘤组织中显著性高表达，通过促进新生血管内皮细胞形成，从而促进肿瘤新生血管形成。大量研究证实，VEGF与肿瘤发生和发展的关系密切，采用免疫组织化学法、原位杂交法和PT-PCR法检测VEGF表达均显示子宫内膜癌、肺癌、甲状腺癌、前列腺癌、食管癌、胃癌、结直肠癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤中的临床分期、病理分级和淋巴结转移程度均与VEGF表达水平具有明显的相关性[9]。相关研究显示，VEGF具有诱导宫颈癌组织周围新生淋巴管形成，增强恶性肿瘤淋巴结转移和浸润侵袭程度。同时，VEGF表达上调现象更容易发生于合并盆腔淋巴结转移者[10]。因此，VEGF过表达和宫颈癌的发生和发展具有明显的关系。VEGF作为下游信号传递关键因子，其通过促进HPV持续感染宫颈上皮过表达增加HPV含量，并促进HPV持续感染形成VEGF，诱导肿瘤细胞新生血管和淋巴管形成过程，参与宫颈上皮内瘤变向宫颈癌的发展过程，同时促进宫颈癌的转移、侵袭和浸润。因此，VEGF在宫颈癌的诊断中具有一定的价值，但关于其对宫颈癌疾病预后的预测价值研究甚少。本研究结果显示，宫颈癌组织VEGF阳性表达率显著增加，其增加程度与临床分期、病理分级和淋巴结转移显著相关，其中VEGF阳性表达的宫颈癌患者5年生存率显著下降，甚至为VEGF阴性表达者的0.334倍(1/2.996)。因此，VEGF阴性表达预示宫颈癌预后状况良好，VEGF表达对宫颈癌预后具有重要的预测价值。

p53基因是目前发现与人类肿瘤发生和发展紧密相关的基因，正常细胞中存在野生型p53基因，具有参与细胞凋亡和细胞周期、细胞分化、血管形成和DNA代谢等生理活动过程。但p53基因突变则导致正常生理功能丧失，且具有癌基因活性，促进细胞恶变和细胞过度增殖，促进肿瘤发生和发展。相关研究显示，人类大部分恶性肿瘤普遍存在突变型p53基因，其产物p53蛋白表达在骨巨细胞瘤恶变或复发者中明显增强，提示p53基因在细胞恶性转化过程中发挥重要的作用，进一步生存分析研究显示，p53蛋白阳性表达患者总生存时间显著缩短，可作为评估骨巨细胞瘤预后的预测指标[11]。但关于p53蛋白对宫颈癌预后预测价值研究甚少，本研究结果显示，p53蛋白表达对宫颈癌预后状况具有重要的预测价值，其中p53蛋白阳性表达者预后状况欠佳，5年生存率显著降低，仅为p53蛋白阴性表达者的0.327倍(1/3.056)，分析其原因可能与p53蛋白阳性表达者临床分期、病理分级及合并淋巴结转移率更高等因素显著相关，最终导致p53蛋白阳性表达的宫颈癌预后状况欠佳，反之，p53蛋白阴性表达者疾病预后状况良好。大量研究表明，p53在恶性肿瘤组织中的表达显著增高[12]。但关于其对宫颈癌临床疗效的评估价值研究甚少。

综上所述，宫颈癌组织CK2β、VEGF和p53阳性表达显著上调，三者均通过调控肿瘤细胞凋亡过程，从而在恶性肿瘤的发生与发展中发挥重要的作用，其中三者阳性表达预示疾病预后欠佳，对疾病的预后状况具有重要的预测价值。

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doi:·经验交流·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.08.027

作者简介：陈晓露(1977-),学士，副教授，主要从事病理学方面的研究。

[中图分类号]R711.74

[文献标识码]B

[文章编号]1671-8348(2016)08-1083-04

(收稿日期：2015-09-15修回日期：2015-11-06)