常规生化检验中循环酶法检测血清同型半胱氨酸的临床分析

徐连强 曹毅 曾玉琼 王慧敏

常规生化检验中循环酶法检测血清同型半胱氨酸的临床分析

徐连强 曹毅 曾玉琼 王慧敏

目的 探讨循环酶法检测血清同型半胱氨酸（Hcy）的临床应用价值。方法 选取脑梗死、冠心病、高血压患者及同期进行健康体检的正常人各50例作为研究对象，采用常规生化检验中的循环酶法对所有入组对象进行血清Hcy检测，分析各组的检测结果。结果 循环酶法对血清Hcy检测结果的批内变异系数为1.33%，批外变异系数为3.07%，平均回收率为99.4%；浓度＞10 mmol/L的VC、血红蛋白水平＜1.5 g/L、浓度为380 μmol/L的胆红素对检测结果干扰较小。脑梗死组、冠心病组、高血压组患者的血清Hcy水平均显著高于对照组（P＜0.05），冠心病组的血清Hcy水平最高，显著高于脑梗死组和高血压组（P＜0.05）。结论 临床应用循环酶法检测血清Hcy，具有较高的精密度与灵敏度，抗干扰性好，检测准确性较高，是临床诊断各类心脑血管疾病的有效手段，具有重要的临床价值。

血清同型半胱氨酸；循环酶法；生化检验

血清同型半胱氨酸（Hcy）是人体正常代谢的中间产物，是一种有着高反应活性的氨基酸，由于Hcy与血浆中的蛋白质有强的亲合力，所以较少以游离状态存在[1]。目前，已有研究证实，高Hcy血症的发生主要与遗传缺陷有关，是动脉血栓性疾病的一个独立危险因素。近年来，在生化检验技术的不断进步下，临床对血清Hcy也有了更为深入的认识。循环酶法是临床检测血清Hcy的常用方法，本研究旨在明确循环酶法检测血清Hcy的临床应用价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取江西省人民医院2014年3月～2015年3月收治的脑梗死、冠心病、高血压患者，以及同期进行健康体检的正常人各50例作为研究对象。其中脑梗死组男27例，女23例，年龄42～83岁，平均（60.4±4.8）岁；冠心病组男26例，女24例，年龄44～79岁，平均（62.5±5.4）岁；高血压组男29例，女21例，年龄33～80岁，平均（56.8±4.7）岁。对照组男25例，女25例，年龄45～81岁，平均（63.3±4.7）岁。在平均年龄、性别构成比方面，各组间比较差异均无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法 4组研究对象均采用循环酶法进行血清Hcy检测，血清Hcy的正常参考值为4.0～15.4 μmol/L。采集所有研究对象的晨起空腹静脉血（3 mL），使用离心机以转速3 000 r/ min离心10 min，分离上层血清待检。血清Hcy检测仪器选用HITACHI 7600-120全自动生化分析仪，校准液浓度分别为0.0 μmol/L（试剂1）、28.0 μmol/L（试剂2），质控液浓度分别为7.5、12.0、29.0 μmol/L。检测参数：选用速率法，温度37℃，主波与次波的波长分别为340、405 nm。取13.0 μL血清样本，200 μL试剂1，反应600 s后，加入20 μL试剂2，反应180 s。采用两点定标法进行校准。

1.3 统计学方法 运用统计学软件SPSS 19.0处理数据，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用“n，%”表示，组间比较采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 循环酶法检测的精密度分析 使用低值质控物、中值质控物、高值质控物进行血清Hcy测定，各测定20次，然后每天检测1次，共测定20 d，得出循环酶法对血清Hcy测定的精密度，结果显示，批内变异系数为1.33%，批外变异系数为3.07%。

2.2 回收率分析 取15.8 μmol/L血清标本，分别加入浓度为5.1和25.8 μmol/L的标准液中，计算出回收率分别为99.5%、99.3%，平均回收率为99.4%。

2.3 抗干扰性分析 （1）取不同浓度的VC，与同体积血清混合，采用循环酶法进行血清Hcy检测，结果显示，浓度＞10 mmol/L的VC对检测结果无干扰；（2）配制浓度不同的血红蛋白，与同体积无溶血血清混合，采用循环酶法检测Hcy，结果显示，血红蛋白水平＜1.5 g/L对检测结果干扰最小；（3）分别取0.1 mL浓度不同的胆红素与0.9 mL的血清混合，采用循环酶法检测Hcy，结果显示，浓度为380 μmol/L的胆红素对检测结果干扰较小。

2.4 血清Hcy检测结果对比 脑梗死组、冠心病组、高血压组患者的血清Hcy水平均显著高于对照组（P＜0.05）；冠心病组的血清Hcy水平最高，显著高于脑梗死组和高血压组（P＜0.05）；脑梗死组与高血压组的血清Hcy水平比较，差异无统计学意义。见表1。

表1 4组研究对象的血清Hcy检测结果比较（x±s）

3 讨论

目前，临床检测血清Hcy的方法较多，如HPLC法、FPIA法、氨基酸分析仪法、酶学分析法、ELISA等[2]。HPLC是最为常用的一种方法，但其对设备要求较高，FPIA和ELISA法需在特异性的Hcy甲基转移酶和S腺苷Hcy水解酶催化下将Hcy转化为S腺苷Hcy，然后再水解为Hcy，反应过程十分复杂[3]。循环酶法是将氧化型Hcy转化为游离Hcy，然后在CBS催化作用下，与丝氨酸反应生成L-胱硫醚，再在CBL催化下生成Hcy、NH 3和丙酮酸，该反应过程相对简单[4]。通过进行抗干扰试验、精密度检测，发现循环酶法检测血清Hcy的精密度、回收率均较高，抗干扰性较好，故本次研究就采用了循环酶法进行血清Hcy检测。

大量临床研究表明，心血管疾病的发生、发展与血清Hcy水平有着密切联系，Hcy是心脑血管疾病的一个独立危险因素[5]。有学者提出[6]，检测血清Hcy水平，可以为临床早期诊断、治疗高血压疾病，以及评估高血压治疗效果提供可靠依据。通过本次研究发现，高血压患者的血清Hcy水平显著高于正常人（P＜0.05）。这一结果与前述文献报道结果相符。本次研究结果还显示，脑梗死、冠心病患者的血清Hcy水平均显著高于健康人，并且冠心病患者的血清Hcy水平最高，显著高于脑梗死和高血压患者的血清Hcy水平（P＜0.05）。这也证实了脑梗死、冠心病的发生与血清Hcy水平有着密切联系，并且冠心病患者的血清Hcy水平上升最为显著，临床应对此引起高度重视[7-8]。

综上所述，临床应用循环酶法检测血清Hcy，具有较高的精密度与灵敏度，且抗干扰性好，检测准确性高，是临床诊断各类心脑血管疾病的有效手段，具有重要的临床价值。

[1] 席金瓯,王维鹏.循环酶法检测血清同型半胱氨酸的性能评价及临床应用[J].中国妇幼保健,2012,27(10):1574-1575.

[2] 王兴宁,雷光星,李慧,等.循环酶法测定同型半胱氨酸试剂盒评价[J].标记免疫分析与临床,2014,21(3):318-320.

[3] 钟白云,李腊秀,廖经忠,等.同型半胱氨酸与冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关性研究[J].中国现代医学杂志,2010,20(12):1802-1805.

[4] 焦文学,王洁.循环酶法双试剂测定血清同型半胱氨酸的方法学评价[J].检验医学与临床,2012(18):2352-2353.

[5] 阮桂芝.同型半胱氨酸在临床诊治中的价值[J].国际检验医学杂志,2010,31(10):1151-1152.

[6] 杨军,张红梅,朱元芳,等.自贡地区中老年人群循环酶法同型半胱氨酸水平调查[J].检验医学,2012,27(5):418,423.

[7] 颜敏.同型半胱氨酸循环酶法自动分析仪测定的临床应用研究[J].现代预防医学,2012,39(12):3083-3084,3087.

[8] 梁红梅,黄华,罗奇智,等.两种方法学同型半胱氨酸水平正常值的临床验证及分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(22):2747-2748.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.031

江西 330006 江西省人民医院检验科（徐连强 曹毅 曾玉琼 王慧敏）