高发区贲门癌KAI1/ CD82的表达及意义*

刘淑慧，周宋霞，谢澳斯，黄燕鹏，陈广灿**

(1.汕头大学医学院病理教研室，广东 汕头 515041 2.汕头大学医学院第一附属医院胃肠外科，广东 汕头 515041)

高发区贲门癌KAI1/ CD82的表达及意义*

刘淑慧1，周宋霞1，谢澳斯2，黄燕鹏2，陈广灿2**

(1.汕头大学医学院病理教研室，广东 汕头 515041 2.汕头大学医学院第一附属医院胃肠外科，广东 汕头 515041)

摘 要:目的:探讨KAI1/ CD82蛋白在贲门癌组织中的表达及其与贲门癌临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学法检测46例贲门癌组织和相应标本的46例非肿瘤性粘膜组织KAI1/ CD82蛋白的表达。结果:KAI1/ CD82蛋白在癌组织中表达较非肿瘤性粘膜明显增强(P＜0.05)。KAI1/ CD82蛋白表达与贲门癌患者的年龄显著性相关(P＜0.05)，与其它临床病理特征没有显著性关系(P＞0.05)。结论:KAI1/ CD82蛋白的表达可能参与了贲门癌的发生发展。检测KAI1/ CD82表达有助于进一步了解贲门癌发生发展的机制。

关键词:贲门癌； 免疫组织化学法； 非肿瘤性粘膜

**通讯作者

Key words: Gastric cardia cancer； Immunohistochemistry； Non-tumor gastric tissue

我国食管癌贲门癌高发区存在着以华北太行山、陕豫秦岭、鄂豫皖大别山、川北、闽粤、苏北为主的六大地理分布区域。近15年来的流行病学资料调查显示在传统的食管癌高发区食管癌的发病呈现下降趋势，而与食管癌地域分布一致的贲门癌发病率则呈显上升趋势[1]。地处闽粤交界的广东潮汕地区是我国南方沿海的食管癌、贲门癌高发区，流行病学资料调查显示1995年至2004年贲门癌的发病率仅次于食管癌居第二位[2]。KAI1/ CD82表达与高发区贲门癌的关系报道较少。本研究应用免疫组织化学技术检测潮汕高发区贲门癌组织和相应标本非肿瘤性粘膜KAI1/ CD82的表达情况，探讨其表达与贲门癌发生发展的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料:收集汕头大学医学院附属医院2011 年9月至2013年1月收治进行外科手术治疗的贲门癌病例46例，分别取癌组织和距离癌组织5cm以上非肿瘤性粘膜标本。建立患者临床病理资料数据库，包括年龄、性别、肿块大小、分化程度和淋巴结转移情况等。

1.2方 法

1.2.1试剂:鼠抗人KAI1/ CD82单克隆抗体(Senta Cruze)及免疫组化二步法试剂盒(福州迈新试剂公司)，AEC显色，抗体均用PBS稀释。

1.2.2免疫组化染色:采用EnVision二步法进行免疫组化染色。高压修复，一抗(工作浓度1∶100)4℃冰箱过夜，滴加辣根过氧化物酶标记的二抗(Ig-HRP)，室温孵育30min，PBS冲洗后AEC显色，苏木素复染。以切片中淋巴细胞胞膜着色为阳性内对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3结果判定:显微镜下观察，KAI1/ CD82表达定位于细胞膜和细胞浆，阳性细胞染色呈棕黄或棕褐色。阳性染色细胞数评分标准:0分为阴性，1分为阳性细胞数≤25%，2分为26%～50%，3分为51%～75%，4分为＞75%；阳性细胞的染色强度评分:0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。两项得分的乘积0为阴性(-)，≤2分为弱阳性(+)，4～8分为阳性(++)，≥8分为强阳性(+++)。在统计学分析时，为避免不同病理医生之间结果判定的差异，将染色结果分成两组进行统计，分别是低表达组(阴性和1+)以及高表达组(2+和3+)[3]。

1.4统计学处理:采用SPSS16.0统计软件(SPSS for Windows 16.0)对所得数据进行分析。组间定性资料比较采用X2检验。绘制患者的年龄和肿瘤最长径ROC曲线以确定年龄和肿瘤最长径分组的界值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1免疫组化检测:KAI1/ CD82蛋白在不同贲门组织中的表达:KAI1/ CD82蛋白主要在细胞膜和细胞浆中表达。KAI1/ CD82蛋白在非肿瘤性粘膜中阳性表达率65.22%(1+以上)，其中高表达率为17.39%(2+和3 +)，在贲门癌组织中的阳性表达率为63.04%，其中高表达率为36.96%。KAI1/ CD82在非肿瘤性粘膜和贲门癌中的阳性率相近，但是在非肿瘤性粘膜中多数为低表达，而在贲门癌中的高表达率明显升高，差别有统计学意义(P =0.035)(表1，图1，2)。

图1　非肿瘤性粘膜KAI1/ CD82的表达(400×)

图2　贲门癌组织KAI1/ CD82的表达(400×)

表1　非肿瘤性粘膜和贲门癌组织KAI1/ CD82表达比较

2.2年龄与肿瘤最长直径ROC曲线绘制:利用Youden index法绘制患者的年龄和肿瘤最长径ROC曲线( receiver operating characteristic curve，ROC curve)，结果显示当年龄＞56岁、最长径≤5cm时，尤登指数分别是0.24和0.17为最大值，表明该点的敏感性和特异性均较好，故确定年龄和最长径的切点值分别为56岁和5cm，利用这两个切点值分组进行卡方检验(图3，4)。

图3　年龄ROC曲线

图4　肿瘤最长径ROC曲线

2.3KAI1/ CD82在贲门癌组织中的表达与临床病理参数的相关性分析:KAI1/ CD82的表达与患者的年龄相关(p = 0.028)，患者的年龄越大癌组织中KAI1/ CD82的表达越强，而与患者的性别、瘤体最长径、淋巴结转移和分化程度等其它临床病理因素无关(P＞0. 05)，见表2。

表2　KAI1/ CD82蛋白表达与贲门癌临床病理参数的关系

瘤体最长径　2.78　0.095 ≤5cm　17　13 ＞5cm　13　3分化程度　0.069　0.793高中分化　12　6低分化　19　8淋巴结转移情况　0.065　0.798 无14　5 有14　6

3 讨 论

KAI1/ CD82基因最早由美国国立环境健康研究院(NIEHS) Dong等从人类染色体上分离，并将其命名为KAI1，该基因定位于人类染色体11P11.2上，其编码蛋白由267氨基酸残基组成，因该蛋白和已发现的CD82结构相同，故kai-1基因又称为KAI1/ CD82基因[4]。起初发现该基因的表达能抑制人前列腺癌细胞的转移，认为该段基因具有抑制肿瘤转移的功能。后来的研究发现其他恶性肿瘤如:黑色素瘤、肺小细胞癌、膀胱癌、胃癌、大肠癌等均存在该基因失活或表达异常，且与肿瘤发生远处转移具有相关性。近年来胃癌与KAI1/ CD82表达关系的研究报道相对较多，但尚存在争论[5]，将贲门癌作为独立疾病研究KAI1/ CD82表达的报道较少。

本研究结果示KAI1/ CD82蛋白在贲门癌组织中的阳性表达率为63.04%(29/46)，在非肿瘤性粘膜中的阳性表达率为65.22%(30/46)，两者的阳性率接近。但是贲门癌组织中kai-1/ cd82的表达较非肿瘤性粘膜明显增强，两者的差异具有统计学意义(P＜0.05)。该结果与在结肠癌和皮肤黑色素瘤中的研究结果相似。但是还有一些研究则得出与本结果相反的结论，认为癌组织KAI1/ CD82蛋白的表达较正常组织下降。造成这种不同结果的原因尚不太清楚，可能与不同肿瘤细胞基因表达不同或标本来源的人群差异等有关。

在本研究中我们采用ROC曲线法为患者的年龄和肿瘤的最长径分组确定界值，使分界值同时具备较好的敏感性和特异性。我们发现KAI1/ CD82蛋白的表达与患者的年龄相关，较年轻的患者KAI1/ CD82蛋白的表达较弱。有研究认为较年轻的贲门癌患者肿瘤生长速度较快，转移发生较早，这是否与较年轻的患者KAI1/ CD82蛋白表达减弱有关还需进一步的研究。我们还发现肿块大、分化差的贲门癌KAI1/ CD82蛋白的表达弱，与胃癌研究结论相似，该结果仅表现为百分率的差异，今后应扩大样本量进一步验证KAI1/ CD82蛋白的表达与贲门癌的演进的关系。

参考文献:

[1] 陈志峰，董稚明.食管-胃交界腺癌地域发病特点与思考[J].中国肿瘤临床，2011，38(1):57～60.

[2] Su M，Liu M，Tian DP，et al. Temporal trends of esophageal cancer during 1995-2004 in Nanao Island，an extremely high-risk area in China[J]. Eur Epidemiol 2007，22(1): 43～48.

[3] Chih-Hung Lin，Chia-Hsing Liu，Chien-Hui Wen，et al. Differential CD133 expression distinguishes malignant from benign papillary lesions of the breast[J]. Virchows Arch，2015，466(2):177～184.

[4] 杜兴龙.Kai-1/ cd82基因在鼻咽癌组织中的表达和意义[J].2011.

[5] Knoener M，Krech T，Puls F，et al. Limited value of KAI1/ CD82 protein expression as a prognostic marker in human gastric cancer[J]. Dis Markers，2012，32(6):337～342.

Clinical Significance and Expressions of KAI1/ CD82 in Gastric Cardia Cancer

LIU Shuhui，ZHOU Songxia，et al
(Medical College of Shantou University，Guangdong Shantou 515041，China)

Abstract:Objective: To investigate the expression of KAI1/ CD82 in gastric cardia cancer tissue and its correlation with clinical pathological parameter. Method: KAI1/ CD82 expression level was detected in 46 cases of gastric cardia cancer tissue and the corresponding non-tumor gastric tissues by the immunohistochemistry. Result: The expression level of KAI1/ CD82 was significantly higher in gastric cardia cancer tissue compared with non-tumor gastric tissues(P＜0.05).The expression of KAI1/ CD82 had no relationship with histological grade.The expression of KAI1/ CD82 correlated with patient age(P＜0.05) and had no relationship with other pathological parameters. Conclusion: The expression of KAI1/ CD82 may participate in the development of gastric cardia cancer. Detecting KAI1/ CD82 will help to learn the mechanism of gastric cardia cancer development.

文献标识码:A

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.01.002

文章编号:1006-6233(2016)01-0004-04

*基金项目:广东省医学科研基金项目资助，(编号:B201511)