ERCC1在局部区域晚期鼻咽癌中的表达及临床意义

曹轶林 邱小芬 邓恋 屈元姣

作者单位：541002 桂林 广西壮族自治区南溪山医院肿瘤科

临床研究

ERCC1在局部区域晚期鼻咽癌中的表达及临床意义

曹轶林 邱小芬 邓恋 屈元姣

作者单位：541002 桂林 广西壮族自治区南溪山医院肿瘤科

目的 探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complementing 1，ERCC1）在局部区域晚期鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）组织中的表达及其临床意义。方法 收集2013年1月至2015年6月收治的以接受顺铂为基础化疗的102例局部区域晚期NPC癌组织标本作为观察组，同时选取其中31例局部区域晚期NPC癌旁上皮组织为对照组。采用免疫组化法检测两组组织中ERCC1的表达，并分析ERCC1表达与局部区域晚期NPC患者临床病理参数及化疗疗效的关系。结果 观察组和对照组ERCC1的阳性表达率分别为62.7%和90.3%，差异有统计学意义（P<0.05）。ERCC1表达与局部区域晚期NPC患者年龄有关（P<0.05），与性别、T分期、N分期无关（P>0.05）。ERCC1表达阳性的患者化疗有效率为35.9%，ERCC1表达阴性患者为63.2%，差异有统计学意义（P＝0.019）。结论 ERCC1在局部区域晚期鼻咽癌癌组织中低表达，ERCC1表达与化疗疗效呈负相关，检测ERCC1有助于预测局部区域晚期NPC患者对顺铂化疗的敏感性。

鼻咽肿瘤；局部区域晚期鼻咽癌；核苷酸切除修复交叉互补基因1；顺铂；化疗；疗效；敏感性

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国南方及东南亚地区常见的头颈部恶性肿瘤，局部侵袭力强、易发生远处转移，就诊时多属中晚期［1］。放疗联合铂类为基础的诱导及同步化疗是局部区域晚期NPC的主要治疗方式，然而对铂类药物耐药常导致化疗失败，探讨其耐药性有重要的临床意义。近年研究发现，DNA修复异常与肿瘤多药耐药关系密切，切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complementing 1，ERCC1）是核苷酸切除修复系统最关键的基因，其正常表达是维持该修复酶功能分子的基础，过度表达可使停滞在G2/M期的损伤DNA迅速修复，导致其对顺铂耐药［2，3］。本研究采用免疫组化法检测局部区域晚期NPC癌组织中ERCC1的表达，分析其与临床病理特征及顺铂化疗敏感性的关系，为临床制定个体化化疗方案提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取广西壮族自治区南溪山医院2013年1月至2015年6月NPC患者病理标本，纳入标准：⑴初治且病理确诊为NPC，均为非角化性癌；⑵按照中国鼻咽癌2008分期判定为局部区域晚期NPC，具有完整的临床资料；⑶预期生存期大于6个月；⑷ECOG PS分级为0或1级；⑸中性粒细胞≥2×109/L，血小板≥100×109/L，血红蛋白≥90 g/L，肌酐清除率≥60mL/min，总胆红素、ALT、AST均不超过正常值2.5倍，AKP不超过正常值5倍。共筛选病理标本102例（观察组），其中男性69例，女性33例，年龄31～67岁，中位年龄57岁。按照中国鼻咽癌2008分期：T211例，T349例，T442例；N110例，N253例，N339例；M0102例；Ⅲ期70例，Ⅳ期32例。选取其中31例局部区域晚期NPC患者癌旁上皮组织（距癌灶0.5～3 mm）为对照组，其中男性24例，女性7例，年龄29～68岁，中位年龄55岁。本研究获得本院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法

患者均接受2个周期诱导化疗+序贯同期放化疗。诱导化疗方案：顺铂70mg/m2，d1（或分3 d），静脉滴注；5-Fu 600mg/m2，d1～5，静脉滴注，21 d为1个周期，完成2个周期后评价化疗疗效。采用直线加速器调强适形放疗，PGTV nx和PGTV nd处方剂量为69.96～74.09 Gy，PCTV1为60.0～65.1 Gy，PCTV2为51.62～57.60 Gy，分割次数为29～33次；顺铂30mg/m2同期化疗，1次/周，共6～7次。

1.3 免疫组化检测ERCC1的表达

浓缩型鼠抗人ERCC1单克隆抗体（一抗）、即用型快捷免疫组化MaxvisionTM鼠/兔-HRP广谱检测试剂盒（二抗）及DAB显色试剂盒均购自福建迈新公司。组织切片常规脱蜡水化，置入0.01 mol/L、pH6.0柠檬酸盐缓冲液中行高温高压抗原修复，自然冷却后取出切片用自来水及PBS冲洗；滴加3%过氧化氢，室温下孵育10 min，PBS冲洗；滴加一抗ERCC1（按1∶50稀释）置4℃冰箱过夜，PBS冲洗；滴加二抗，室温下孵育15min，PBS冲洗；DAB显色，苏木素复染色，中性树胶封片。

1.4 判定标准

1.4.1 免疫组化染色结果判定 以细胞核出现棕黄色颗粒为ERCC1阳性细胞。采用双盲法统计实验结果，由两位病理科医生读片，镜下随机选取5个高倍视野（×400），观察其阳性细胞染色强度并计算阳性细胞数（总细胞数不少于1 000个），按阳性细胞在同类细胞中所占百分数判定结果：阳性细胞百分率＜10%为阴性（-），10%～24%为弱阳性（+），25%～75%为中度阳性（++），＞75%为强阳性（+++）。

1.4.2 化疗疗效评定标准 按照RECIST 1.1标准进行评价，完全缓解（CR）：所有目标病灶完全消失，维持4周以上；部分缓解（PR）：可测量目标病灶的直径总和低于基线≥30%，维持4周以上；疾病稳定（SD）：基线病灶长径总和缩小但未达PR或增加但未达进展（PD）；PD：可测量目标病灶的直径总和增大≥20%或出现新病灶。以CR+PR计算总有效率。

1.5 统计学处理

采用SPSS17.0统计软件对数据进行处理，组间差异采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ERCC1在局部区域晚期NPC组织中的表达

观察组ERCC1阳性表达率为62.7%（64/102），其中12.5%（8/64）为强阳性（+++），29.7%（19/64）为中度阳性（++），56.7%（37/64）为弱阳性（+），见图1。对照组ERCC1阳性表达率为90.3%（28/31），其中42.9%（12/28）为强阳性（+++），28.6%（8/28）为中度阳性（++），28.6%（8/28）为弱阳性（+）。两组ERCC1阳性率比较差异有统计学意义（χ2=4.743，P=0.036）。

2.2 ERCC1表达与局部区域晚期NPC患者临床病理特征的关系

ERCC1在＜60岁年龄组中的表达明显高于≥60岁年龄组（P＜0.05），但在不同性别、T分期、N分期组中的表达差异均无统计学意义（P＞0.05），提示ERCC1表达与患者年龄有关，而与性别、T分期、N分期无关。见表1。

图1 局部区域晚期NPC癌组织中ERCC1的表达（ABC法，×400）

表1 ERCC1表达与局部区域晚期NPC患者临床病理特征的关系［n（%）］

2.3 ERCC1表达与化疗疗效的关系

102例局部区域晚期NPC患者化疗总有效率为46.1%（47/102）。64例ERCC1阳性表达的患者获CR 0例，PR 23例，SD 41例，化疗有效率为35.9%（23/64）；38例ERCC1阴性表达的患者获CR 1例，PR 23例，SD 14例，化疗有效率为63.2%（24/38），两者化疗有效率比较差异有统计学意义（χ2=5.493，P=0.019），提示ERCC1表达与化疗疗效呈负相关。

3 讨论

放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段之一，随着IMRT在临床上的应用，早期NPC单纯放疗5年生存率为90%～95%，中晚期为50%～70%［4］，局部区域晚期NPC局控率得到明显提高，但局部复发和远处转移仍然是治疗失败的主要原因，放疗辅以化疗是近年研究较多的综合治疗方法。研究表明，采用诱导化疗序贯同期放疗治疗局部区域晚期NPC，有利于缓解症状、减少肿瘤荷负、改善乏氧情况、消灭亚临床转移灶、降低远处转移率等。目前的诱导化疗方案中顺铂联合5-氟尿嘧啶被认为是治疗头部肿瘤较有效及安全的方案，有效率为40%～50%［5］；而同期放化疗方案则采用单药顺铂［6］。由此可见，铂类药物在头颈部肿瘤化疗中占据重要地位，但肿瘤对其存在原发或继发耐药，给临床治疗带来了较大困扰。此外，个体之间的异质性，使化疗敏感性亦存在差异，因此，对于局部区域晚期NPC，如何筛选合适的化疗人群，对提高疗效有重要意义。

ERCC1基因位于染色体19q13.2-13.3，全长15 kb，由10个外显子组成，基因编码一种含有297个氨基酸的蛋白质，是核苷酸切除修复活性标志性基因［7］。研究表明ERCC1表达水平与非小细胞肺癌顺铂化疗耐药及中位生存期呈负相关［8］。Zwenger等［9］在子宫颈癌中亦有类似报道。在头颈部肿瘤中ERCC1低水平表达者中位生存期高于高水平表达者，提示其对顺铂抗药性增加［10～12］。本研究采用免疫组化法检测102例接受顺铂为基础化疗的局部区域晚期NPC患者组织中ERCC1的表达情况，结果显示，局部区域晚期NPC患者癌组织中ERCC1的阳性表达率显著低于癌旁上皮组织，可能与ERCC1基因表达能在上皮细胞内积聚有关。同时发现ERCC1基因表达与患者年龄有关，＜60岁年龄组的患者其表达水平明显高于≥60岁组，但与患者性别、T分期、N分期无关，与李文华等［13］研究报道一致，原因不明，有待进一步研究。

目前有国外学者将化疗药物敏感试验用于指导肿瘤患者化疗，在减少临床治疗盲目性、延长患者生存期中取得良好效果［14，15］。有报道ERCC1阳性表达反映了肿瘤组织中DNA修复活性较低，而修复DNA能力较弱，使肿瘤细胞易于逃避免疫和凋亡监控［16］。李文华等［17］研究发现中晚期NPC患者ERCC1低表达顺铂化疗有效率较高。为此本研究进一步分析ERCC1阳性表达与阴性表达者的化疗疗效，结果发现ERCC1阴性表达的患者其化疗有效率显著高于ERCC1阳性表达者，分析原因可能由于ERCC1使顺铂诱导的DNA络合物的清除增加，从而降低了疗效。提示ERCC1表达与局部区域晚期NPC顺铂敏感性有关，可作为顺铂治疗鼻咽癌的有效筛选指标，与Hu等［18］报道一致。

本研究结果显示，ERCC1在局部晚期鼻咽癌患者癌组织中明显低表达，阳性表达患者的化疗疗效亦明显低于阴性表达者，提示其表达水平可能与患者顺铂化疗敏感性有关，有望成为铂类化疗疗效的预测指标，为局部区域晚期NPC患者制订化疗方案提供一定依据。但因本研究病例数较少，有关结论仍需进一步开展大样本临床试验加以证实。

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［2016-06-27收稿］［2016-07-24修回］［编辑 罗惠予］

ERCC1 expression in local regionally advanced nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance

Cao Yilin，Qiu Xiaofen，Deng Lian，Qu Yuanjiao（Department of Oncology，Nanxishan Hospital of Guangxi Zhuang Automomous Region，Guilin 541002，P.R.China）

Objective To determine the status of ERCC1 protein expression and its potential clinical significance in patients with local regionally advanced nasopharyngeal carcinoma（NPC）.M ethods Nasopharyngeal endoscopy biopsies were collected from 102 patientswith local regionally advanced NPC at diagnosis，and biopsies of cancer-adjacent normal nasopharyngeal tissueswere collected from 31 patients.ERCC1 expression in the two sets of samples was compared by immunohistochemistry using monoclonal antibody. Results Rate of ERCC1 expression was 90.3%in NPC tissues and 62.7%in adjacent tissues（P<0.05）.Rate of response to cisplatinbased chemotherapy was 35.9%in patients positive for ERCC1 expression and 63.2%in patients negative for ERCC1（P<0.05）. ERCC1 expression correlated significantly with age，but notwith gender or TN stage.Conclusion ERCC1 is expressed at low levels in local regionally advanced NPC，and its expression correlates negatively with chemosensitivity.ERCC1 may be useful for predicting sensitivity of NPC patients to cisplatin-based chemotherapy.

Nasopharyngealneoplasm；Local regionally advanced nasopharyngeal carcinoma；Excision repair cross complementing 1；Platinum；Chemotherapy；Efficacy；Sensitivity

R739.6

A

1674-5671（2016）04-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2016.04.05