脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆IL-6、TNF-α的影响*

白海侠　严亚锋

陕西中医药大学 (咸阳 712046)



·实验研究·

脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆IL-6、TNF-α的影响*

白海侠严亚锋

陕西中医药大学 (咸阳 712046)

摘要目的：通过实验观察脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响，以探讨其治疗高血压的作用机制。方法：采用慢性复合电刺激加高脂饮食致大鼠高血压肝热痰瘀证模型，测定大鼠血浆中IL-6和TNF-α的含量。结果：与治疗前及模型组比较，脑清通颗粒各剂量组从治疗第2周后血压均明显降低(P<0.01)，且第3周后降压作用最明显；与模型组比较，脑清通颗粒各剂量组均能降低模型大鼠血浆中IL-6和TNF-α的含量(P<0.01)。结论：脑清通颗粒可降低高血压肝热痰瘀证模型大鼠血压，其降压机制可能与降低血浆中IL-6和TNF-α的含量有关。

主题词高血压/中医药疗法@脑清通颗粒动物，实验大鼠

脑清通颗粒是在首届国医大师、中医内科专家张学文教授临床经验方脑清通汤的基础上研制研发的中药复方制剂。处方由决明子、丹参、姜半夏、川芎、水蛭、山楂、野菊花、神曲、赤芍等11味中药组成，具有清肝活血、涤痰通络的功效，用于眩晕(高血压)、头痛、中风先兆、中风等表现为肝热痰瘀证的疾病。该方在临床中治疗高血压肝热痰瘀证已有20余年，临床效果非常显著，且未发现任何不良反应。本实验通过建立大鼠高血压肝热痰瘀证模型，观察脑清通颗粒对大鼠血浆中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响，以探讨脑清通颗粒治疗高血压肝热痰瘀证的治疗机理。

1实验材料

1.1动物SD大鼠70只，雌雄各半，体重180～220g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号SCXK(陕)2007-001。

1.2药物与试剂

1.2.1受试药物：脑清通混悬颗粒(12g/袋，每克相当于生药2.04g。临床用药剂量：1袋/次，2次/d，即每人每日相当于服生药量48.96g)，由陕西中医药大学附属医院制剂中心制备，批号130120。(制备方法：取决明子、水蛭，混合粉碎成粗粉，备用。其余丹参、姜半夏等九味加8倍量水煎煮三次，每次1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30(60℃)的稠膏，加入决明子、水蛭粉末，减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，加入适量糊精、3.5g阿斯巴甜，混匀，制成颗粒，干燥，共制成1000g，即得)

1.2.2对照药物：卡托普利片、辛伐他汀片、阿司匹林肠溶片。

1.2.3试剂：大鼠IL-6、TNF-α检测试剂盒(96T，美国R&D公司)。

1.3高脂饲料配制[1]取80g猪油、40g胆固醇置500mL烧杯中，在电炉上加热使其融化，再加入4g研细的丙基硫氧嘧啶片和8g胆酸钠，充分搅匀，后加入吐温-80、2-丙二醇各80mL及适量的蒸馏水，不断搅拌，使其均匀，再加蒸馏水至400mL并充分混匀,即生成200g/L猪油、100g/L胆固醇、10g/L丙基硫氧嘧啶和20g/L胆酸钠的脂肪乳剂，置冰箱保存，用时加热融化。

1.4实验仪器MC4000无创大鼠血压测定仪，自然基因科技有限公司；ELx808酶标仪，美国BioTek公司；XP504电子分析天平，梅特勒-托利多公司；CO2培养箱，德国BTNDER公司；KDC-160HR型低温离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司；Forma-86c低温冰箱。

2实验方法

2.1造模将大鼠适应性喂养1周后，每日上午定时用无创大鼠血压测定仪进行测量大鼠血压，连续测量3次，取其平均值作为大鼠造模前基础血压。随机取出60只，参照董艳芬等[2]的方法制造慢性复合应激性高血压大鼠模型。

将60只大鼠分别放在MC4000型无创大鼠血压测定仪系统的电刺激箱中，用低频、低压交流电进行电击大鼠足底部，同时用100dB的噪音进行刺激，连续刺激14d。刺激的电源强度以引起大鼠强烈反应，但不对大鼠造成损伤为准。

在造模过程的第8天起，给模型组大鼠在复合刺激的基础上，开始用高脂饲料乳剂(1mL/100g)灌胃，连续10d。

2.2造模成功标准参照董艳芬等制定的应激性高血压判定标准：造模2周后测量大鼠平均收缩压(SBP)，造模后比造模前大鼠血压升高值≥20mmHg(1mmHg=0.133kPa)，并且高于115mmHg者，即可判定造模成功。

大鼠肝热痰瘀证的判定标准：模型组大鼠可见烦躁，易怒，尖叫，精神萎靡，饮食减少，痰涎增多，口唇、舌质紫暗，毛色晦暗或泛黄、无光泽，甚至体毛结穗，大便秘结等。其中具备4项以上的症状即可判定为肝热痰瘀证。

2.3分组60只大鼠造模成功54只。将造模成功的54只高血压肝热痰瘀证大鼠随机取出50只，分为模型组、西药组、脑清通颗粒低、中、高剂量组，每组10只。另外未造模的10只大鼠作为空白组。

2.4给药分组后各实验组大鼠开始分别灌胃给药。空白组与模型组以0.9%生理盐水灌胃，西药组以卡托普利10mg/kg+辛伐他汀5mg/kg+阿司匹林20mg/kg的混合溶液灌胃，脑清通颗粒大、中、小剂量组分别4.0g·kg-1、2.0g·kg-1、1.0g·kg-1的溶液灌胃。每天均在上午给药1次，给药体积均为10mL·kg-1，连续给药21d。

2.5指标测定

2.5.1血压测量：按照周海哲等[1]的测定方法。实验大鼠均于实验前3d进行适应性测量血压的训练。每次测量血压均在每天上午同一时间进行。将4只大鼠置于固定笼中，放入MC4000型大鼠无创血压测量系统内，将大鼠尾巴穿过尾套，尾套和换能器相连接，36℃预热10～15min，等大鼠尾动脉完全扩张后，给尾套加压，直至脉搏信号完全消失，再缓慢放气至其脉搏信号恢复正常。连续测量3次，取其平均值。

大鼠每给药一周后测量血压一次，测量方法同前。

2.5.2血浆中IL-6和TNF-α的测定：各组末次给药后，测量血压，禁食12 h，用10%水合氯醛(3mL/kg)腹腔注射麻醉，分离腹主动脉取血4～6mL，注入抗凝管中，以备测定IL-6和TNF-α的含量。全部血样在2 h内4℃，3000 r/min，离心10min，取血浆在-80℃下冷冻保存。严格按试剂盒说明书测定IL-6和TNF-α的含量。

3实验结果3.1脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血压的影响见表1。

表1　脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血压的影响

注：与治疗前比较△P<0.05，▲ P<0.01；与模型组比较◇P<0.05，◆P<0.01

表1结果表明：与治疗前及模型组比较，西药组及脑清通颗粒各剂量组从治疗第2周后血压均明显降低(P<0.01)，且第3周后降压作用最明显。说明脑清通颗粒具有降低高血压肝热痰瘀证大鼠血压的作用，其中大剂量组的作用最明显。

3.2脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆中IL-6和TNF-α的影响见表2。

表2　脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆中IL-6和TNF-α的影响

注：与模型组比较△P<0.05，▲ P<0.01；与空白组比较◇P<0.05，◆P<0.01

4讨论中医无高血压病名，根据其头晕、目眩、头痛等主要临床表现，多将本病归属于“头痛”、“眩晕”等的范畴。基本病机为肝肾阴虚，肝阳上亢，痰瘀内阻。中医关于高血压病因病机的研究占主导地位的理论认为：高血压是由于七情所伤，饮食失节，内伤虚损，引起阴阳平衡失调，病损的脏器主要在肝、肾及心。主要病机有肝阳上亢、肝肾阴虚、阴虚阳亢、阴阳两虚等[3]。张学文教授认为高血压患者多具有肝热血瘀，痰浊内阻的病机，治疗宜采用“清肝化瘀涤痰法”。张老以临床使用多年的经验方脑清通颗粒治疗肝热痰瘀型高血压，可使肝火降，血行畅，诸症消，临床疗效非常显著。该经验方由决明子、丹参、川芎、姜半夏、野菊花、豨签草、水蛭、赤芍等组成，具有清肝活血、涤痰通络之功效，用于眩晕、头痛、中风先兆、中风等表现为肝热痰瘀证的疾病。IL-6主要是由单核-巨噬细胞、T细胞和内皮细胞产生的，参与免疫与炎症反应的炎性细胞因子。IL-6含量升高可使成纤维细胞和平滑肌细胞增殖，导致产生大量的血小板源生长因子(PDGF)，最终造成周围血管阻力增高，引起高血压[4]。TNF-α是由主淋巴细胞、单核-巨噬细胞产生的，具有调节机体免疫的功能，是一种参与炎症反应的细胞因子。研究表明,血浆TNF-α浓度与血压水平密切相关。TNF-α可抑制血管内皮细胞中一氧化氮合酶的活性,减弱一氧化氮所导致的血管舒张作用,导致血管收缩,血压升高[5-6]。

本实验通过观察脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血压的影响，发现脑清通颗粒能降低高血压肝热痰瘀证大鼠的血压。通过观察脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆IL-6和TNF-α含量的影响，发现模型组血浆中IL-6和TNF-α的含量明显高于空白组，说明大鼠血压的升高与血管内IL-6和TNF-α的含量有一定关系。脑清通颗粒能明显降低高血压肝热痰瘀证大鼠血浆中IL-6和TNF-α的含量，提示脑清通颗粒可能是通过抑制大鼠血浆中IL-6和TNF-α的释放，从而达到降低血压的目的。

参考文献

[1]周海哲，李香，李军.脑清通混悬颗粒对高血压模型大鼠 ET、AngⅡ、CGRP的影响[J].陕西中医，2015，36(3)：376-379.

[2]董艳芬,梁燕玲,罗艳.慢性应激诱发高血压大鼠模型的建立[J].解剖学研究，2006，28(1)：72-73.

[3]余茂强，童晓云.中医诊治高血压病的思路与方法[J].河南中医，2015，35(2)：315-316.

[4]濮燕屏,廖圣宝.滋阴潜阳方对肾性高血压模型大鼠细胞因子的影响[J].辽宁中医药大学学报,2011,13(11):244-245.

[5]彭云波,王权明,覃永旗.高血压患者血清TNF-α、IL-6和CRP水平的研究[J].中国现代医生,2012,50(17):138-139.

[6]杨进,胡彦伟,李彦民.消肿止痛膏对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型IL-1β、TNF-α炎症因子的影响[J].陕西中医，2015，36(8)：1087-1088.

(收稿2015-08-25；修回2015-09-18)

【中图分类号】R541.1

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.01.062

*陕西省教育厅科学研究项目计划项目(14JK1195，2013JK0831)