金标法在无偿献血者HBsAg 检测中的应用

王淑芳

金标法在无偿献血者HBsAg 检测中的应用

王淑芳

目的：了解金标法在无偿献血者HBsAg检测中的应用情况及方法学的优缺点，查找和分析其原因，探讨其对减少血液报废及保障无偿献血者的身体健康和临床用血安全的意义和价值。方法：对2009-2013年文山州无偿献血者血样检测HBsAg采用金标法试纸条做初筛，用两种不厂家的酶联免疫试剂进行批初、复检，并将检测结果进行统计学处理分析，比较强阳性标本（即酶联免疫吸附法检测结果OD值＞2.0的标本）与金标法检测结果，评估金标法筛选HBsAg的效果。结果：5年间无偿献血96008人份血样HBsAg不合格395份，占0.41%（395/96008）。其中酶联免疫试剂强阳性（即S/OD值≥2.0）的有135份，其余部分为S/OD值＜2.0和单边阳性标本。在135份酶联免疫吸附试验强阳性中金标法能够检测出阳性的有91份。检出率为67.4%，且各年间金标法对OD值≥2.0的检出率分别为：100.0%，94.4%，67.5%，54.5%，52.0%，阳性率逐年下降。结论：文山州无偿献血人群HBsAg阳性者占有较高的比例，金标法漏检率增加，是导致血液淘汰增多的重要原因之一。应注意采用更敏感的方法不断提高检出能力，最大限度地控制输血传播，保证输血安全。

无偿献血者；乙型肝炎肝表面抗原；金标法；酶联免疫吸附试验

乙型肝炎病毒是一种严重威胁人类健康的世界性流行病毒，在我国约有1亿左右HBV感染者[1，2]，而HBsAg又是乙型肝炎病毒感染最主要的病原标志和直接证据之一[3]，故此我国献血法将HBsAg列为献血者健康检查的必检项目之一。目前国内各采供血机构检测HBsAg的主要方法是酶联免疫吸附试验，而金标法因其简单、快速、特异性高、试剂稳定等特点被作为献血者采血前的初筛方法。为了解文山州无偿献血人群HBsAg检测金标法的作用及效果，观察与酶联免疫吸附试验的符合程度，探讨其漏检情况，为本地区无偿献血招募策略提供依据，对保障无偿献血者的身体健康和临床用血安全也具有重要的意义。我们对文山州中心血站2009-2013年无偿献血因HBsAg阳性报废的血液的检测结果进行总结分析，现将结果报道如下。

1 材料与方法

（1）资料来源文山州2009年1月-2013年12月96008名无偿献血者HBsAg检测的结果。

（2）试剂与仪器EVO全自动加样仪EVO150-8由长沙泰肯生物技术有限公司提供、FAME全自动酶免分析仪FAME16/20；FAME24/20烟台奥斯邦生物工程有限公司提供、SUNRISE温控酶标仪由长沙泰肯生物技术有限公司提供、实验室管理系统liswell-4.01海深威软件有限公司提供；HBsAgELISA诊断试剂盒由北京万泰生物技术有限公司提供，HBsAgELISA诊断试剂盒和胶体金试纸条均为厦门英科新创生物技术有限公司产品。所有试剂均在有效期内使用。

（3）检测方法严格按照GB18467_2001《献血者健康检查要求》、《全国临床检验操作规程》(第三版)[4]及试剂说明书进行操作。金标法取左手无名指指尖末梢血50μl，滴加至金标试纸条玻璃纤维上，待血样渗透过滤膜后，加样本稀释液1滴，室温反应30min内观察结果。检测线和质控线出现2条带者为HBsAg阳性;只在质控线出现1条带者为HBsAg阴性;检测线和质控线均不出现反应者为试验无效，应重新检测。阴性者献血后用两种酶联免疫试剂进行批初、复检，2种均为阳性且S/OD值≥2的标本再次做金标法检测。

2 结果

文山州无偿献血者2009-2013年HBsAg检测结果见表1。

表1 文山州无偿献血者2009-2013年HBsAg检测结果

3 讨论

乙型病毒性肝炎是常见的传染性疾病，由乙肝肝炎病毒（HBV）引起[5]。HBV流行在我国比较严重，输血相关感染仍是输血安全性的第一问题[6]。无偿献血者献血前筛查HBsAg，可以减少HBsAg阳性血液的采集，降低血液报废率，减少献血者和工作人员医源性感染的风险[7]。故在献血前用金标法筛查HBsAg是目前国内较为常用的做法，已常规用于街头献血前筛查[8]，血液采集后用ELISA法进行初、复检[9]。但金标法影响因素较多，常导致阳性结果漏检，而出现HBsAg假阴性的结果。

从我们的结果来看，无偿献血96008人份血样HBsAg不合格395份，占0.41%（395/96008）。其中酶联免疫试剂强阳性（即S/OD值≥2.0）的有135份，其余部分为S/OD值＜2.0和单边阳性标本。在135份酶联免疫吸附试验强阳性中金标法能够检测出阳性的有91份。检出率为67.4%，且各年间金标法对OD值≥2.0的检出率分别为：100.0%，94.4%，67.5%，54.5%，52.0%，金标法阳性率自2011年起明显降低，因而使HBsAg阳性报废的血液自2011年起也有所增多。

分析主要原因有以下方面：①我站自2011年3月按照国家食品药品监督管理局新规定将乙肝表面抗原检测由原来的一步法改为两步法，两步法在一定程度上降低了HOOK效应，同时也因其模式改为血清温育1小时后不洗板直接加酶的方式，延长了抗原抗体反应时间和显色时间，在降低HOOK效应的同时，也应提高了ELISA检测的灵敏度[10]。但有文献报道，新两步法虽然较一步法更加敏感，但也增加了假阳性率[11]。②在我国的HBV感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平状态存在[12]，而且乙肝病毒常易发生基因突变也会影响到HBsAg的表达，这种变异使得常规试剂对HBsAg检测能力降低，这些标本易造成漏检给输血安全带来威胁，为切实保障血液安全，提高对这些HBsAg呈低水平状态存在的标本的检出率，我站一方面使用灵敏度较优的新两步法试剂，另一方面将HBsAg检测灰区值由原来的S/CO≥0.8降低至S/CO≥0.6。这也可能是致乙肝表面抗原阳性报废的血液增多的因素之一。③从金标法对强阳性标本的检出率看，自2011年后，金标法对强阳性标本检出率明显低于之前，而且仅能检测出酶免OD≥3左右的标本，这说明酶联免疫吸附检测方法从一步法改为新两步法，其检测能力显著提高，进一步减少了HBsAg漏检的可能性，大大提高了血液安全性。

总之，我国是乙型肝炎高发区，HBsAg携带者达10%左右［12］，因输血感染乙型肝炎的风险不言而喻。对无偿献血者献血前进行HBsAg筛查在降低献血者和工作人员医源性感染的风险、减少血液报废、保障临床安全用血等方面意义重大。我们的任务主要是加强筛选和提高筛查技术，要建立标准操作规程，人人掌握并严格执行，避免人为因素造成漏检。同时也建议相关部门促进提高金标试剂质量，在敏感性、特异性等方面进一步提高，适应无偿献血现场HBsAg初筛的要求，最大限度地减少血液报废。还有就是采用更先进的检测方法（如核酸检测技术），提高乙型肝炎病毒检出率，进一步保障血液安全[14，15，16]。

(作者单位：文山州中心血站)

[1]Liang TJ.Hepatitis B:the virus and disease.Hepatology,2009,49 (5suppl):S13-S21.

[2]Liang X,Bi S,Yang W,et al.Epidemiological serosurvey of hepatitis B in China—declining HBV prevalence due to hepatitis B vaccination.Vaccine,2009,27(6):6550-6557.

[3]Courouce AM,Drouet J,LeMarrec N,et al.Blood donors Positive for HBsAg and negative for anti-HBc antibody.Vox sang,1985,49(2):26-33.