CyclinD1和Survivin在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义

钱金锋，杨其昌，谢慧君，张晓娟，沈　屹，高翠玉

(1. 江苏省南通市第一人民医院，江苏 南通 226001；2. 江苏省南通瑞慈医院，江苏 南通 226010)



CyclinD1和Survivin在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义

钱金锋1，杨其昌1，谢慧君2，张晓娟1，沈屹1，高翠玉1

(1. 江苏省南通市第一人民医院，江苏 南通 226001；2. 江苏省南通瑞慈医院，江苏 南通 226010)

[摘要]目的探讨CyclinD1和Survivin在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测118例乳腺浸润性导管癌患者的癌组织及相应30例癌旁正常乳腺组织中CyclinD1和Survivin的表达情况，分析二者表达与乳腺浸润性导管癌患者的临床病理因素(年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、TNM分期)、内分泌表型(ER、PR)及预后之间的关系。结果乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin阳性表达率明显高于正常乳腺组织(P均<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin阳性表达与患者的淋巴结转移、组织学分级和TNM分期呈正相关，与其他临床病理因素和内分泌表型无关。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示，CyclinD1和Survivin阳性表达越强，无瘤生存时间越短(P<0.05)。结论CyclinD1和Survivin的过表达与乳腺浸润性导管癌生物学行为密切相关，对判断肿瘤的侵袭、转移及预后具有一定价值。

[关键词]乳腺浸润性导管癌；CyclinD1；Survivin

乳腺癌居我国女性最常见的恶性肿瘤第2位，每年新发病例达16.9万，每年女性因乳腺癌死亡的病例约4.5万[1]。从微观的角度研究乳腺癌转移的分子机制，寻找乳腺癌转移潜力及影响转移的相关因子，对乳腺癌的诊断和治疗具有十分重要的意义。本研究采用免疫组织化学方法检测了乳腺浸润性导管癌患者的癌组织及相应癌旁正常乳腺组织中CyclinD1和Survivin的表达情况，并分析了二者表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征、内分泌表型(ER、PR)及预后的关系。现将结果报道如下。

1临床资料

1.1一般资料收集2002年11月—2010年8月南通瑞慈医院病理确诊的118例女性乳腺浸润性导管癌患者标本，患者年龄32～84岁，平均51岁。同时切取其中30例癌旁正常乳腺组织作为对照。

1.2方法手术切除标本均用10%福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋切片，并进行HE和免疫组织化学染色。免疫组织化学染色采用SP法[2]，试剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。检测118例乳腺浸润性导管癌患者的癌组织及相应30例癌旁正常乳腺组织中CyclinD1和Survivin的表达情况，分析二者表达与乳腺浸润性导管癌患者的临床病理因素(年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、TNM分期)、内分泌表型(ER、PR)及预后之间的关系。

1.3结果判定标准CyclinD1阳性细胞着色定位于肿瘤细胞胞核，浸润性肿瘤细胞无着色为阴性(-)，≤50%的肿瘤细胞胞核着色为弱表达(+)，>50%的肿瘤细胞胞核着色为强表达()[3]。Survivin阳性细胞着色定位于癌细胞胞浆，浸润性肿瘤细胞无着色为阴性(-)，≤50%的肿瘤细胞胞浆着色为弱表达(+)，>50%的肿瘤细胞胞浆着色为强表达()[3]。ER和PR阳性细胞着色定位于肿瘤细胞胞核，肿瘤细胞无着色为阴性(-)，≤30%的肿瘤细胞胞核着色为弱表达(+)，>30%的肿瘤细胞胞核着色为强表达()[4]。

1.4统计学方法本研究中数据运用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料的比较采用双侧卡方检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。对所有随访结果进行分析，采用Log-rank检验并做出Kaplan-Meier生存曲线。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1CyclinD1和Survivin蛋白表达情况CyclinD1和Survivin在乳腺浸润性导管癌组织中阳性表达的免疫组织化学染色结果见图1～4。乳腺浸润性导管癌癌组织中CyclinD1和Survivin的阳性表达率明显高于正常乳腺组织(P均<0.05)，见表1。

图1　乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1弱表达表现(SP，×200)

图2　乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1强表达表现(SP，×200)

2.2CyclinD1和Survivin蛋白表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理因素及内分泌表型的关系CyclinD1和Survivin蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达与患者的淋巴结转移、组织学分级和TNM分期呈正相关(P均<0.05)，与患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤大小和内分泌表型无相关性(P均>0.05)。见表2。

图3　乳腺浸润性导管癌组织中Survivin弱表达表现(SP，×200)

图4　乳腺浸润性导管癌组织中Survivin强表达表现(SP，×200)

例

2.3乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin蛋白表达的相关关系Survivin在CyclinD1阴性的乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率为43.5%(20/46)，在CyclinD1弱表达的乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率为68.8%(42/61)，在CyclinD1强表达的乳腺浸润性导管癌中的表达率为72.7%(8/11)。相关分析显示，Survivin在乳腺浸润性导管癌组织中的表达与CyclinD1阳性表达呈正相关(P<0.05)。见表3。

2.4乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin蛋白表达与预后的相关性本研究共随访到102例，随访1～98个月，随访率为86.4%。5年、3年、1年总生存率分别为65.7%(67/102)、81.4%(83/102)及95.1%(97/102)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示：CyclinD1(-)、(+)及()表达者5年总生存率分别为80.0%(8/10)、43.4%(23/53)及10.3%(4/39)，CyclinD1阳性表达越强，无瘤生存时间越短(P<

表2　乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin蛋白表达与患者临床病理特征及内分泌表型的关系　例

表3　乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin蛋白

图5　乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1表达对预后影响的生存曲线

3讨论

图6　乳腺浸润性导管癌组织中Survivin表达对预后影响的生存曲线

乳腺癌的发生、发展是一个多基因参与、多阶段、多步骤的复杂过程，包括癌细胞增殖、细胞程序性死亡减少等[5]。近年来的研究表明CyclinD1和Survivin是参与肿瘤细胞增殖与抗凋亡的重要因子[3，6-8]。

CyclinD1是周期素依赖激酶的调节因子，作用于G1期，参与G0/G1期的转换调控，是细胞周期的正性调控因子[9]，能够促进DNA的合成，加速细胞增殖，并且与多种肿瘤发生发展密切相关。CyclinD1是Wnt信号转导通路中重要的靶基因，当Wnt信号通路被激活，使β-catenin在细胞浆中聚集并形成复合物[10]，从而激活CyclinD1基因转录[11]。有研究证实，CyclinD1的扩增与过表达与人体多种肿瘤有关[12-13]。本研究结果显示，CyclinD1在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，表明CyclinD1阳性表达在乳腺浸润性导管癌的发生发展过程中起着关键性作用。CyclinD1阳性表达与乳腺浸润性导管癌患者的淋巴结转移、组织学分级和TNM分期呈正相关，与其他临床病理特征和内分泌表型无显著相关性，并发现随着CyclinD1阳性表达的增强，患者无瘤生存时间缩短。提示CyclinD1的过表达预示着患者的预后不良及低生存率，进一步显示CyclinD1在乳腺浸润性导管癌的发生发展过程中的重要作用，对临床的早期诊断和预后评估具有重要意义。

Survivin是近年来发现的凋亡蛋白抑制因子(IAP)的家族成员之一，在多数肿瘤中均有表达，具有细胞周期依赖性和明显的组织选择性，其与肿瘤新生毛细血管的形成有关[14]。Survivin高表达可抑制肿瘤细胞凋亡的多种诱导途径，比如P53、Fas、 Casepase 等途径，从而促进其增殖，肿瘤病程的进展同Survivin的表达密切相关[15-16]。Wu等[17]研究发现Survivin在肿瘤组织中高表达可以促进VEGF诱导新生毛细血管的形成、血管内皮细胞的增殖和毛细血管网形成，为肿瘤细胞的生长和转移提供丰富的血供。 另外，Survivin在细胞有丝分裂中也有重要作用[18]，如卵裂沟的形成、微管的聚合和胞质的分裂；Survivin在肿瘤组织中强表达可以使肿瘤细胞的周期缩短，跳过G2/M期的检查点，完成异常有丝分裂，使肿瘤细胞逃避凋亡，促进肿瘤细胞增殖[19]。本研究发现，Survivin在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织，提示其可能与乳腺浸润性导管癌的发生相关，是其形成的重要因素；且Survivin表达与乳腺浸润性导管癌患者的淋巴结转移、组织学分级和TNM分期呈正相关，与其他临床病理特征和内分泌表型无显著相关性，提示Survivin在乳腺浸润性导管癌发生、发展和转移等过程中起着重要作用。本研究结果还显示，随着Survivin阳性表达的增强，患者无瘤生存时间越短，提示Survivin基因可作为乳腺癌预后判断的指标，其与患者的预后密切相关。

本研究结果还显示，Survivin和CyclinD1在乳腺浸润性导管癌组织中的表达呈正相关，与文献[20-22]的报道一致，提示Survivin和CyclinD1在细胞周期调控中既有独立的功能，又有协同作用，其机制可能为：CyclinD1过度表达，激活细胞周期依赖激酶4，从而加速细胞从G1期进入S期，在G2/M期，Survivin抑制Caspase-3活性，抑制凋亡，加速增殖，共同导致细胞增殖与凋亡平衡破坏，从而发生癌变[23]。因此，在乳腺浸润性导管癌前病变组织中联合检测Survivin和CyclinD1的表达，对于乳腺浸润性导管癌的早期诊断、治疗以及预后有重要意义。

综上所述，CyclinD1和Survivin的过表达均与乳腺浸润性导管癌生物学行为密切相关，对判断肿瘤的侵袭、转移及预后具有一定价值。临床通过联合检测乳腺浸润性导管癌组织中CyclinD1和Survivin表达情况，能够有效预测患者的预后。

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Expression and significance of CyclinD1 and Survivin in breast invasive ductal carcinoma

QIAN Jinfeng1, YANG Qichang1, XIE Huijun2，ZHANG Xiaojuan1,SHEN Yi1, GAO Cuiyu1

(1.The First People's Hospital of Nantong, Nantong 226001, Jiangsu, China; 2.Nantong RICH Hospital, Nantong 226010, Jiangsu, China)

Abstract:Objective It is to explore the expression and clinical significance of CyclinD1 and Survivin in breast invasive ductal carcinoma. Methods The expressions of CyclinD1 and Survivin in 118 cases of the invasive ductal carcinoma of breast and 30 cases of the corresponding normal tissues adjacent to cancer were detected by immunohistochemistry. The relationship of CyclinD1 and Survivin expressions to age, tumor site, tumor size, lymph node metastasis, histological grade, TNM stage, endocrine phenotype (such as ER, PR) and prognosis of the patients with invasive ductal carcinoma of breast was analyzed. Results The positive rates of the CyclinD1 and Survivin in the invasive ductal carcinoma of breast were significantly higher than those in the corresponding normal tissues adjacent to cancer (P<0.05).The positive expression of CyclinD1 and Survivin in the invasive ductal carcinoma tissue was positively related with the lymph node metastasis, histological grade and TNM stage (P<0.05), not related with other clinical factors and endocrine phenotype (P>0.05). The Kaplan-Meier survival curve analysis showed that the positive expression of CyclinD1 and Survivin were stronger, the tumor free survival time was shorter (P<0.05). Conclusion CyclinD1 and Survivin overexpression were closely related to the biological behavior of breast invasive ductal carcinoma, judging tumor invasion, metastasis and prognosis of a certain value.

Key words:breast invasive ductal carcinoma; CyclinD1;Survivin

[收稿日期]2015-11-02

[中图分类号]R737.9

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)11-1151-05

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.11.003

[作者简介]钱金锋，男，硕士，主治医师，主要从事肿瘤病理方面的研究。[通信作者]杨其昌，E-mail：ntyangqc@163.com