谷精草总黄酮抑制亚硝化反应活性研究

王庆，薛天乐

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800)

叶敏

(贵州工程应用技术学院，贵州 毕节 551700)



谷精草总黄酮抑制亚硝化反应活性研究

王庆，薛天乐

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800)

叶敏

(贵州工程应用技术学院，贵州 毕节 551700)

[摘要]目的：观察谷精草总黄酮抑制亚硝化反应活性。方法：采用超声提取法对谷精草总黄酮进行提取，通过分光光度法测定谷精草总黄酮抑制亚硝化反应活性。结果：当谷精草总黄酮浓度达到16.5μg/mL时，对亚硝胺合成的阻断率为80.9%，当谷精草总黄酮浓度达到13.5μg/mL时，对亚硝酸钠清除率最大，达到73.2%。结论：谷精草总黄酮具有较强的抑制亚硝化反应活性。

[关键词]谷精草；总黄酮；抑制；亚硝化反应

恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，亚硝胺类化合物是一类强致癌原，能引起包括胃癌、肝癌在内的多种器官的肿瘤 ，减少或阻断亚硝胺的生成是预防恶性肿瘤的重要措施之一[1]。有研究表明，从植物中提取的某些黄酮类化合物对亚硝化反应有抑制作用，因此成为抗癌新药研究的一个热点[2]。

谷精草是谷精草科(Eriocaulaceae)植物谷精草Eriocaulon buergerianum Koern的干燥带花茎的头状花序，在我国分布范围较广，江苏、安徽、浙江、江西、福建等省区均有种植[3]。谷精草味辛、甘，性平，具有祛风散热、明目退翳的功效[4]。谷精草主要含有黄酮及其苷类、有机酸、植物甾醇等化学成分[5]，其中黄酮类化学成分含量较高，本实验对谷精草总黄酮提取物抑制亚硝化反应活性进行了研究，希望为谷精草的开发提供依据。

1材料与仪器

1.1材料

谷精草(购于安徽省毫州市三义堂药业有限公司，经安徽中医药大学王效山教授鉴定为谷精草科(Eriocaulaceae)植物谷精草Eriocaulon buergerianum Koern的干燥带花茎的头状花序)、芦丁标准品(购于中国药品生物制品检定所)、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、硫酸亚铁、柠檬酸、磷酸二氢钠、对氨基苯磺酸、a-萘胺、N-1-萘乙二胺盐酸盐等(均为分析纯)。

1.2仪器

圆盘粉碎机、旋转蒸发仪、循环水式真空泵、HS-3120超声波清洗机、UV-9200型紫外可见分光光度计等。

2方法与结果

2.1芦丁标准曲线绘制

精称50.0mg芦丁标准品，加入60%的乙醇溶解并定容到250mL容量瓶中。精确吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL芦丁标准溶液于25mL容量瓶中，加入0.05g/mL亚硝酸钠溶液0.2mL，摇匀后放置6min，加入0.1g/mL 硝酸铝溶液0.2mL，摇匀后放置6min，加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2.0mL，再用60%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置15min。在波长为510nm处测定吸光度，并以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，绘制标准曲线[6]。

2.2谷精草总黄酮的提取

图1　芦丁标准曲线

将谷精草烘干后粉碎成粗粉,取谷精草粗粉若干，石油醚回流脱脂6h，晾干备用。精确称取脱脂晾干后的谷精草粗粉4.06g置于平底烧瓶中，加入60%乙醇100mL，超声提取25min，超声温度60℃，将提取液进行抽滤、洗涤，减压浓缩，定容到50mL容量瓶中，再从中精密吸取5mL溶液定容到250mL容量瓶中，测量吸光度(A=0.39)[6]。

2.3谷精草提取液总黄酮浓度的含量测定

将吸光度A=0.39带入线性回归方程中，计算出谷精草提取液中黄酮的浓度(250mL容量瓶)为0.037mg/mL。

2.4谷精草总黄酮提取液对亚硝胺阻断作用

分别取pH3.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液10.0mL置于12只25mL比色管中，分别加入1.0mmol/L NaNO21.0mL、1.0mmol/L二甲胺1.0mL，然后分别加入谷精草总黄酮提取液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0mL，将反应体系分别用蒸馏水稀释至刻度，在37℃水浴下恒温1h后，用移液管分别吸取1.0mL该溶液加到7cm2的培养皿中，分别加入0.5%的Na2CO3溶液0.5mL，在254nm紫外灯照射15min，取出后分别加1%对氨基苯磺酸溶液1.5mL、0.1%a-萘胺1.5mL，加蒸馏0.5mL，摇匀放置15min后，用分光光度计在525nm处分别测吸光度值，计算阻断率[7～9]:

阻断率=[(A0-AX)÷A0]×100%

(1)

式中，A0为未加提取液的比色管中NaNO2的吸光度；AX为加提取液的比色管中NaNO2的吸光度。

结果如表1、图2。由表1和图2可以看出，谷精草总黄酮提取液对亚硝胺的阻断活性较强，随着浓度的上升，其对亚硝胺的阻断率呈现明显的量效关系，当总黄酮提取液浓度达到16.5μg/mL时，阻断率为80.9%。

图2　谷精草总黄酮对亚硝胺的阻断结果

加入提取液量/mLA0AX阻断率/%10.2250.19712.420.2250.17920.430.2250.14436.040.2250.11250.250.2250.08860.960.2250.06969.370.2250.05774.780.2250.05177.390.2250.04679.6100.2250.04480.4110.2250.04380.9

2.5谷精草总黄酮提取液对亚硝酸钠清除作用

分别吸取谷精草总黄酮提取液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0mL于12只25mL比色管中，再分别加入10.0mL柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶(pH=3.0)、50mg/L NaNO2溶液1.0mL，在37℃水浴下恒温1h。分别加入0.4%的对氨基苯磺酸溶液2.0mL，摇匀，5min后加入0.2%的N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液1.0mL，分别用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15min后用分光光度计在540nm处测吸光度值，计算清除率[7～9]:

清除率=[(A0-AX)÷A0]×100%

(2)

式中，A0为未加提取液的比色管中NaNO2的吸光度；AX为加提取液的比色管中NaNO2的吸光度。

结果见表2、图3。由表2和图3可知，谷精草总黄酮提取液浓度达到13.5μg/mL时对亚硝酸钠清除率最大，为73.2%，表明谷精草总黄酮可以有效清除亚硝酸钠。当浓度达到13.5μg/mL以上时，清除率基本不再增加。

图3　谷精草总黄酮对亚硝酸钠清除作用

加入提取液量/mLA0AX清除率/%10.7460.62216.720.7460.40346.030.7460.32656.340.7460.29760.250.7460.24167.760.7460.21870.870.7460.21271.680.7460.20572.590.7460.20073.2100.7460.20372.8110.7460.20173.1

3结语

超声辅助提取可使植物细胞破壁，提取率高，速度快，耗能低。本实验利用超声辅助提取法考察了谷精草总黄酮提取液对亚硝胺合成的阻断率和亚硝酸钠的清除作用，结果表明，谷精草总黄酮提取液具有较强的抑制亚硝化反应活性，当总黄酮浓度达到16.5μg/mL时，其对亚硝胺合成的阻断率为80.9%，浓度为13.5μg/mL时，对亚硝酸钠清除率最大，为73.2%。随着浓度的上升，谷精草总黄酮提取液在0～16.5μg/mL的范围内抑制亚硝化反应活性呈现出明显的量效关系。

谷精草种植广泛，价廉易得，其总黄酮提取液具有显著的抑制亚硝化反应活性，可作为一种新型抗癌剂进行开发，应用前景广阔。

[参考文献]

[1]于慧,宋爱云,丁兰萍,等.恶性肿瘤病因研究进展[J].河南肿瘤学杂志，2003，16(5)：388～390.

[2]张庆乐,吴守林,张丽青,等.植物黄酮在抑制亚硝化反应中的应用[J].医药导报，2009，28(6)：733～734.

[3] 温小琴.谷精草及其伪品鉴别[J].时珍国医国药,2001,12(4):300.

[4] 孙克,缪珠雷.《本草纲目》中的谷精草的原植物[J].医古文知识,2002,19(2):32.

[5] 张菲,王斌.谷精草属植物的化学成分和药理活性的研究进展[J].中成药，2014，36(11):2372～2376.

[6] 冯丽娟,陈芳,孙智勇,等. 超声波法提取谷精草中总黄酮的条件优化[J].江西农业学报，2014，26(6):84～86.

[7] 吴春.杜仲提取物对亚硝化反应的抑制作用[J].食品科技,2005,23(6):34～37.

[8] 吴佳,解成喜.石榴皮总黄酮的提取工艺及抑制亚硝化反应[J].食品科学，2011，32(2):112～114.

[9] 傅茂润,陈庆敏,茅林春.黄花菜提取物对亚硝化反应的抑制能力研究[J].食品科学，2009，30(15) ：114～119.

[编辑]一凡

82 A Study of Inhibition Activity of Total Flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern on Nitrosation

Wang Qing，Xue Tianle

(BozhouVocationalandTechnicalCollege，Bozhou236800,China)

Ye Min

(GuizhouUniversityofEngineeringScience,Bijie551700，China)

Abstract：Objective：To observe inhibition activity of total flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern on nitrosation Methods：The total flavonoids of Eriocaulon buergerianum had been extracted by ultrasonic extraction, and then spectrophotometry had been used to measure inhibition activity of the total flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern on nitrosation.Results：The results showed that when the concentration of total flavonoids reached 16.5μg/mL, the blocking rate of nitrosamine synthesis was as high as 80.9%; when the concentration of total flavonoids reached 13.5μg/mL, the clearance of sodium nitrite was highest, 73.2%. Conclusion：The total flavononid of Eriocaulon buergerianum Koern has significant acitivity to inhibit nitrosation and clear sodium nitrite.

Key words:Eriocaulon buergerianum Koern; total flavonoids; inhibition; nitrosation

[中图分类号]R965

[文献标志码]A

[文章编号]1673-1409(2016)12-0082-03

[作者简介]王庆(1982-)，女，讲师，硕士，主要从事天然药物活性成分分离纯化研究工作；通信作者：薛天乐，84181713@qq.com。

[基金项目]安徽省高等学校自然科学重点课题(KJ2015A358)；亳州市中药科技创新团队(BZ2013zzb06)。

[收稿日期]2015-12-27

[引著格式]王庆，薛天乐，叶敏.谷精草总黄酮抑制亚硝化反应活性研究[J].长江大学学报(自科版)，2016，13(12)：82～84.