卡尤迪生物：以快、准、易为技术核心

张华勇

针对食源性微生物污染引起的食品安全问题，卡尤迪生物为业界带来了前沿的技术支持，和优良的解决方案。为此，《食品安全导刊》记者采访了卡尤迪生物科技有限公司副总经理单长辉先生。

记者：国内食品微生物检测现状如何？都有哪些检测技术？

单长辉：在国内，食品受到食源性微生物污染现象比较严重，食源性致病菌对人体造成伤害甚至死亡，而且近年来微生物引起的食品安全问题呈逐年递增态势，广大老百姓及政府部门对此也十分关注，一旦发生食源性微生物污染事件对食品企业的信誉和形象都会产生不利的影响，公众对政府部门处置的能力也会产生质疑。目前检测方法主要分为传统的微生物培养方法和以金标、酶免和PCR为代表的快速检测方法。

记者：食品微生物检测，卡尤迪有何好的解决方案？

单长辉：由卡尤迪独创的“一步法”免核酸提取荧光定量PCR技术平台针对于各种食源性细菌和病毒，如大肠杆菌O175、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、弯曲菌、诺如病毒等可以进行快速，准确的鉴定。利用卡尤迪“一步法”实时荧光定量PCR系统可以在大型实验室、基层实验室、现场进行食品病原微生物核酸检测，其特点是不需要核酸提取步骤，灵敏度高。在不增菌的情况下直接检测牛奶、鸡蛋、肉类等食品中病原微生物，灵敏度可达102 cfu/mL，符合相关行业标准。对于国标中不得检出的微生物，可以利用市售快速增菌培养基进行4～6小时的增菌过程，增菌过后直接检测，可以达到相关要求。在食品微生物检测中通常是定性检测，卡尤迪“一步法” 实时荧光定量既可以进行定性检测，又可以通过与标准品对比做到绝对定量与相对定量，定量范围在检出限102 cfu/mL以上。

记者：Mini8实时荧光定量PCR仪基于何原理快检？

单长辉：基于的是荧光定量PCR的原理，PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时， 探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5端-3端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。理论上只要加样的样本中有一个致病微生物便可以被检测出来，具有极高的灵敏度，这就大大缩短了前增菌的时间，可以在4个小时左右达到国标不得检出的标准。PCR是聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。理论上只需要有1个DNA分子就可以在1个小时的时间内扩增到数以亿记的DNA分子，我们使用的荧光定量PCR是在PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时， 探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5端-3端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。这样加入Taqman探针的荧光定量PCR具有极高的特异性，产生假阳性的几率非常之低，保证了检测的准确性。

记者：PCR仪相比同类产品有何亮点和竞争力？

单长辉：PCR的方法相对于传统的培养方法和快检中的酶免金标等方法具有速度快、准确性高的特点，由于PCR所检测的是微生物的核酸，而且能在1小时内大量扩增检测，这是其他方法所做不到的，传统的培养方法时间往往需要2～3天，而酶免等方法也需要1天的时间，PCR方法在4～6个小时内完成检测，时间上具有很大优势。在准确性上由于PCR方法检测DNA片段的引物探针具有极高的特异性，在检测的准确性上也要高于酶免金标等方法。

记者：Mini8实时荧光定量PCR仪有何特点与优势？

单长辉：Mini8便携式荧光定量PCR仪，将PCR热循环与荧光检测和各种软件算法有机结合，可实时观察到PCR反应每次扩增中产物的动态变化。PCR之后，即可马上得到定量结果，免去了传统 PCR后续的PCR产物纯化，凝胶电泳分析等费时费力的环节。 通过采用创新性的光学检测系统，Mini8能为用户有效节约单个反应的试剂成本，反应体积可配置15～150UL，一个半小时左右即可得到精准的定量结果。 此外，Mini8是市场上唯一一款可使用12V直流电源，可车载，可在移动环境使用的实时荧光定量PCR，非常适合现场检测，针对突发食品安全事件具有不可比拟的优势。

记者：卡尤迪产品有何检测的成功案例？分享给大家？

单长辉：在不增菌的情况下直接检测牛奶、鸡蛋、肉类等食品中病原微生物，从拿到样本到出结果时间控制在90分钟以内。如果进行快速增菌步骤，经过4小时的增菌，总的检测时间控制在6小时以内。由于卡尤迪一步法技术平台刚上市不久，在食品方面应用还不是很广泛，但在检验检疫、病毒检测上应用十分广泛，卡尤迪研发的基于一步法技术平台的寨卡病毒检测试剂已经在北京、浙江、上海、深圳、广州、福建、辽宁等地检验检疫局和疾病预防与控制中心得到了大面积的应用，可以直接在机场口岸等地对疑似病例进行现场检验。同时我们的一步法技术平台在动物疫病检测、癌症筛查、个性化用药指导、乙肝丙肝检测、突发应急事件中得到了广泛应用。

记者：卡尤迪产品的市场推广情况与客户评价如何？

单长辉：我们现在已经开发了部分食源性微生物检测试剂盒，可以直接对复杂的食品样本进行检测，由于免去了复杂的核酸提取过程，在同类PCR产品中卡尤迪具有操作简便、检测时间短的优势，由于卡尤迪一步法技术平台刚上市不久，在食品方面应用还不是很广泛，但在检验检疫、病毒检测上应用十分广泛，客户的总体评价就是方便、快速、准确。如今在《食品安全导刊》媒体平台的帮助下，把我们的产品推广给了全国各级食监部门、检验所、食品企业、流通、零售终端及更多用户，使得我们的产品获得了越来越广泛的欢迎与赞誉。