改良混合脱钙液在骨髓活检组织中的应用分析

胡延涛 刘艳峰 于兵兵 王建业

【摘要】目的：分析改良混合脱钙液在骨髓活检组织中的应用。方法：选取2014年6月到2015年6月期间内，我院一共收治的骨髓穿刺活检病例60例。按照随机的方法分为对照组和研究组各30例。进行，对照组主要使用硝酸类脱钙液，研究组主要使用改良混合脱钙液。对两组病例的脱钙时间、切片质量和 HE染色效果进行分析和对比。结果：研究组在脱钙时间、切片质量和 HE染色效果均优于对照组（P<0.05），有统计学意义。讨论：改良混合脱钙液在骨髓活检组织中具有极高的应用价值，值得大力推广以及应用。

【关键词】改良混合脱钙液；骨髓活检组织；应用

在病理检查中内容中，骨髓活检是很重要的检查部分，是临床疾病诊断的主要依据之一。骨组织在日常活检当中，由于其质地比较坚硬，若不能把钙质取出，难以制作成片。为此，脱钙处理是关键。怎样才能在短时间内进行脱钙处理并制作成片，又不会给染色造成影响，确保组织的不丢失以及免疫效果，成为了病理技术一个重视的问题[1-2]。现本文主要对改良混合脱钙液在骨髓活检组织中的应用进行分析，望为临床病理检查提供借鉴和参考，详细过程如下。

1.一般资料和方法

1.1一般资料

选取2014年6月到2015年6月期间内，我院一共收治的骨髓穿刺活检病例60例。按照随机的方法分为对照组和研究组各30例。进行，对照组主要使用硝酸类脱钙液，研究组主要使用改良混合脱钙液。男性患者和女性患者分别为32例和28例.对照组中，年龄范围为18-68岁，平均年龄为37.8岁。研究组中，年龄范围为20-71岁，平均年龄为38.4岁。对于参加本次调查研究者均意识清晰，且自愿参加。均排除患有严重的精神疾病以及不愿参加本次调查研究者。经过医护人员的仔细分析和对比后，两组患者在年龄、背景、学历、病情、文化等方面不存在显著的差异（P>0.05），具有一定的可比性。

1.2方法

活检过程中主要使用的仪器包括有 切片机、染色机、脱水机、包埋机以及自动免疫组化染色机等等。

5%硝酸脱钙液配制：95毫升的蒸馏水中加入5毫升浓硝酸，充分混匀.改良混合脱钙液配制：在70毫升10%中性甲醛中加入30毫升甲酸，把其混匀；在70毫升10%中性甲醛中加入30毫升盐酸，把其混匀；把上述两种液体充分混匀。

选取 10毫升洁净的玻璃西林瓶内并把标本放入，使用10% 中性缓冲甲醛液进行固定 ，固定时间为240分钟 ，把固定液倾去。对照组组采用硝酸脱钙液脱钙（240±60 ）分钟后取出，并用蒸馏水冲洗。研究组组加入适量的改良混合脱钙液，脱钙（120±60）分钟后取出，并用蒸馏水进行冲洗[3]。

对两组标本继续拧脱水以及石蜡包埋处理，然后进行连续切片，切为三张，每张厚度为2μm，然后分别进行染色，对疑似肿瘤病例在进行免疫组织化学染色检验，采用迈新 MaxVisionTM 试剂盒进行，并使用EDTA或者枸橼酸进行修复，DAB进行显色。接着使用苏木精对细胞核进行复染，封固使用中性树胶并在光镜下观察。使用已知阳性片对所有染色进行阳性对照，使用PBS 代替一抗做阴性对照[4]。

1.3效果评价

分析对比两组患者的脱钙时间、切片质量以及HE染色效果。切片质量以及HE染色效果可分为良好以及差两个等级。

1.4统计学处理

将研究结果的数据输入SPSS22.2软件包，采用统计学分析数据，用 用以表示计量，用百分数（%）、例数（n）用以表示计数，如果数据分析结果显示P<0.05，那么可以判断两者差异存在统计学意义。

2.结果

对照组脱钙时间为（120±60）分；切片质量良好的为24例（80%），差的为6例（20%）；HE染色效果良好的为26例（86.7%），差的为4例（13.3%）。研究组脱钙时间为（240±60）；切片质量良好的为28例（93.3%），差的为2例（6.7%）；HE染色效果良好的为29例（96.7%），差的为1例（3.3%）。组间数据对比分析发现，研究组在脱钙时间、切片质量良好率以及HE染色效果良好率均优于对照组（P<0.05），有统计学意义。

3.讨论

在骨髓活检组织中，由于骨髓组织具有细小、疏松、硬脆的特点，加之纤维支架少和富含钙盐，在制片中具有一定的难度。所以，脱钙处理是制片的关键。传统方法中，经常使用的组织脱钙液一般包括有甲酸类、硫酸类、硝酸类、盐酸类以及螯合剂类和三氯醋酸类等等。

经过改良的混合脱钙液一般具有以下几个方面的优点：1.组织不会过度膨胀，去诶不会变腐以及变小。2.组织脱钙和固定能够同时进行，且速度快，街上检查时间。3，。容易控制脱钙时间。4.细胞浆染色以及细胞核都不会受到影响，切抗原不会丢失，疫组织化学染色不会受到影响。5.操作较为简单，配方简单，容易掌握。6.脱钙完成后还可以重复使用，减少成本。需要特别注意的是：在对骨髓组织进行脱钙之前，一定要先做好固定处理，切保证处理时间大于或者等于四个小时，以达到更好保护超微结构和组织抗原的目的[5]。

本次研究结果可知：组间数据对比分析发现，研究组在脱钙时间、切片质量良好率以及HE染色效果良好率均优于对照组（P<0.05），有统计学意义。结果进一步表明，改良混合脱钙液在骨髓活检组织中具有极高的应用价值，缩短了脱钙时间，提高了制片质量和染色质量，该方法值得在临床中大力推广以及应用。

【参考文献】

[1]赵宝忠，张毅，刘志兰.病理组织脱钙液传统组方的比较分析[J].临床与实验病理学杂志.2014，23（06）：556-558.

[2]罗灿峤，莫木琼，钟觉民.不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用[J].中国实用医药.2014，17（19）：88-90.

[3]李玉莲，徐晓艳.临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较[J].山西医科大学学报.2014，12（10）：122-124.

[4]陈世梁，卢志承，董玉英.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用[J].临床与实验病理学杂志.2015，17（05）：88-90.

[5]谢玲，邹丽宜，张志平，崔红晶，林坚涛.改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较[J].中国组织工程研究与临床康复.2015，14（11）：333-335.