CD10和Bcl-6在Castleman病中的表达及其意义

韩鸿雁　李晓兵　许春伟　张凤霞　乔西平　陈　宁　韩　双

225300 泰州市第二人民医院(韩鸿雁);100071 解放军307医院(李晓兵,许春伟,张凤霞,乔西平,陈　宁,韩　双)



CD10和Bcl-6在Castleman病中的表达及其意义

韩鸿雁李晓兵许春伟张凤霞乔西平陈宁韩双

225300 泰州市第二人民医院(韩鸿雁);100071 解放军307医院(李晓兵,许春伟,张凤霞,乔西平,陈宁,韩双)

【摘要】目的探讨CD10和Bcl-6在Castleman病中的表达及其意义。方法收集经病理诊断的Castleman病10例，反应性淋巴组织增生13例，滤泡性淋巴瘤13例，其中包括手术切除标本和活检穿刺标本，均应用免疫组织化学染色技术检测各组的CD10和Bcl-6的表达情况。结果CD10免疫组化染色结果显示，Castleman病与反应性淋巴组织增生差异有统计学意义(P=0.003)；Castleman病与滤泡性淋巴瘤差异有统计学意义(P<0.0001)。Bcl-6免疫组化染色结果显示，Castleman病与反应性淋巴组织增生及滤泡性淋巴瘤差异均有统计学意义(P<0.0001)。结论CD10和Bcl-6可作为Castleman病的诊断及其与反应性淋巴组织增生和滤泡性淋巴瘤鉴别诊断的免疫学标志物。Castleman病的发病过程可能与Bcl-6基因异常有关；Bcl-6基因异常可能是Castleman病形态学改变的基础。

【关键词】Castleman病；CD10；Bcl-6；病因与发病机制；诊断及鉴别诊断

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:377～379)

Castleman病(castleman's disease,CD)在1954年由Castleman等[1]描述为类似胸腺瘤的纵膈肿块。CD的临床表现具有异质性，单一淋巴结或者全身淋巴结均可被累及，常发生于纵膈、腋窝和腹部，也可发生在咽部、胸膜、肾脏、胰腺和神经系统[2-5]。单中心型CD是最常见的类型，在所有CD中大约占70%的比例，多中心型CD临床较少见，它的临床表现与但中型相比，更加复杂多变，多数病例呈现系统性症状，且预后较差。有报道称UCD也具有潜在的恶变可能[6]。目前没有特异性的免疫组化指标可用于CD的诊断以及与其他疾病的鉴别诊断，所以探索可能的免疫组化指标是非常有必要的。本实验采用免疫组织化学染色检测CD10和BCL-6在Castleman病、反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia，RLH)及滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma，FL)三者中的表达情况，探讨CD10和BCL-6在Castleman病中的作用及其意义。

1材料与方法

1.1材料

收集解放军307医院病理科2000年-2014年经病理诊断的Castleman病10例(患者男女比为6∶4，年龄12～63岁，中位年龄42.5岁)，反应性淋巴组织增生13例(其中12例为滤泡型，1例为浆细胞型，男女比为7∶6，年龄4～70岁，中位年龄58岁)，滤泡性淋巴瘤13例(男女比为10∶3，年龄43～77岁，中位年龄56岁)，包括手术切除标本和活检穿刺标本。

1.2方法

标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚切片，常规HE染色，光镜观察。免疫组化染色采用Envision两步法。兔抗人CD10单克隆抗体，鼠抗人BCL-6单克隆抗体，Envision两步法检测试剂盒均购自于北京中杉金桥公司。操作步骤严格按试剂盒说明书进行。

1.3结果判定

Bcl-6阳性区域为胞核，CD10阳性区域是细胞膜/质。阳性细胞计数10个高倍视野，取平均值。按阳性细胞数占生发中心细胞比例分：<5%为(-)，5%～25%为(﹢)，26%～50%(﹢﹢)，>50%为(﹢﹢﹢)。

1.4统计学处理

统计学分析使用Fisher确切概率法，检验水准α=0.05(SPSS 16.0软件)。

2结果

2.1CD10

CD患者中CD10表达均为生发中心阴性，RLH中CD10阳性率为61.54%(8/13)，FL中CD10阳性率为92.31%(12/13)。经统计学分析显示：CD10在CD与RLH中的表达差异有统计学意义(P=0.003)；CD10在CD与FL中的表达差异有统计学意义(P<0.0001)，见表1。

2.2Bcl-6

CD患者中Bcl-6表达均为生发中心阴性，RLH中Bcl-6阳性率为84.62%(11/13)，FL中Bcl-6阳性率为76.92%(10/13)。经统计学分析显示：Bcl-6在CD与RLH中表达差异有统计学意义(P<0.0001)；Bcl-6在CD与FL中表达差异有统计学意义(P<0.0001)，见表1。

表1　CD10和Bcl-6在CD、RLH和

3讨论

3.1CD10、Bcl-6在CD诊断与鉴别诊断中的作用及意义

目前仍未发现Castleman病特异性的诊断指标。在病理和临床的诊断工作中，常因为CD的形态变异程度比较宽泛，然而鉴别诊断方法有限，特别是当CD与恶性淋巴瘤或者其他类型的淋巴组织增生性疾病鉴别时，更容易产生组织病理学上诊断的分歧。该病难以早期诊断，并且极易误诊。①反应性淋巴组织增生：淋巴结结构保存，在淋巴结的皮质区滤泡较显著，滤泡大小、形状差异显著，并伴有长形、成脚型和哑铃型的形状，反应性生发中心境界清楚，无或仅有中毒的包膜和包膜周围脂肪炎细胞浸润，有轻微或无网织纤维支架的变化，滤泡反应中心由淋巴细胞、组织细胞核王庄细胞组成，有少量或没有不规则细胞或异形的胞核，反应中心吞噬现象活跃，其中可见中度至明显的分裂活性；反应中心外分裂像不可见或者罕见，无非典型分裂像。②滤泡性淋巴瘤：正常结构完全破坏，皮、髓质均布满滤泡，滤泡大小和形态有轻到中度的差异，滤泡呈衰减状，包膜和包膜周围脂肪大量浸润，可有或无包膜外肿瘤性滤泡形成，滤泡周围可有致密的网织纤维出现。滤泡由多型性和不规则细胞核的瘤细胞组成，无吞噬现象，分裂像比较缺乏，滤泡外其数量差异无显著性；可出现非典型的分裂像，滤泡内外的细胞类型相似。免疫组化染色及基因重排分析有助于CD的鉴别诊断[7]。CD的诊断和鉴别诊断一定要结合各方面检查结果做出综合性的考虑分析。

CD10是1种分子量在100kD左右的锌依赖金属蛋白酶，也被称为急性淋巴母细胞性白血病共同抗原，它主要是在细胞膜上发挥其生物学功能，可灭活生物活性肽。CD10除了表达于在前B细胞和GCB细胞外，还表达与某些上皮的细胞，往往将CD10作为GC细胞的标记物来使用[8]。此外，还可以作为1种分子标记物来划分急性白血病的分型，并对恶性淋巴瘤的次级分类起到重要作用。本研究中CD10在10例CD患者均为生发中心阴性，在RLH中表达为61.54%(8/13)，在FL中表达为为92.31%(12/13)。经统计学分析显示：CD10在CD与RLH之间差异有统计学意义(P=0.003)；在CD与FL之间差异有统计学意义(P<0.0001)，结果提示CD10免疫组织化学染色在CD的诊断以及与RLH和FL鉴别诊断时可作为辅助指标和依据。

Bcl-6表达于淋巴滤泡生发中心B细胞，也可表达于来源于GCB细胞的一些淋巴瘤中，Bcl-6在GC外的细胞中不表达。本研究中Bcl-6在10例CD患者均为生发中心阴性，在RLH中表达为84.62%(11/13)，在FL中表达为76.92%(10/13)。经统计学分析显示：Bcl-6在CD与RLH之间差异有统计学意义(P<0.0001)；BCL-6在CD与FL之间差异有统计学意义(P<0.000)。提示Bcl-6免疫组织化学染色在CD的诊断以及与RLH和FL鉴别诊断时可作为辅助的指标和依据。

3.2Bcl-6在CD发病过程中的作用及意义

CD临床较少见，导致了其临床研究局限，目前对这种疾病的理解还不全面。其发病机制尚不明确，诊治较困难。大量证据倾向免疫调节异常导致了淋巴组织中B细胞和浆细胞的过量增殖。目前的研究大多认为CD可能与病毒感染如HHV-8、细胞因子调节异常，如IL-6表达升高，抗原呈递细胞功能的异常及血管增生等有关[9]。 Bcl-6是1种转录抑制因子，位于3q27染色体，也称之为LAZ3或BCL25基因，编码一个锌指蛋白，具有阻止细胞分化、凋亡，并促进细胞增殖发育的作用。Bcl-6是淋巴系统重要的调节因子。在B细胞的发育过程中，Bcl-6参与调节淋巴细胞的分化、细胞周期发育的调控以及免疫反应等重要功能，这些提示Bcl-6在B细胞的发育、成熟、生发中心的形成和淋巴细胞源性肿瘤的发生发展中起着重要的作用。此外Bcl-6还可以阻断BCR结合导致的B细胞活化过程及Blimp/PRDM1介导的B细胞向浆细胞转化过程。Bcl-6蛋白可通过抑制P53蛋白表达来避免生发中心细胞凋亡，保证生发中心形成和维持。目前认为CD的发病与免疫调节异常有关；浆细胞型被认为与感染和炎症有关；还有人认为CD是肿瘤前期病变。HV型CD有退行性转化的生发中心，PC型CD病理上呈炎症样改变，临床上有炎症病变的征象。Bcl-6基因结构的改变可能会影响到癌基因、抑癌基因、免疫系统发育基因以及与炎症有关的趋化因子基因，这些基因的改变可引发上述一系列病理改变。Dent等[10]研究发现去除Bcl-6基因的小鼠B细胞和T细胞发育正常，但是不能形成生发中心，同时还伴有免疫缺陷和炎症性疾病。本实验中Bcl-6在10例CD淋巴结活检标本生发中心均为阴性，与RLH及FL均有统计学差异。提示CD的发病或许与BCL-6基因异常导致的调控失常有关，同时Bcl-6基因异常可能是CD病理形态学改变的基础，需要进一步研究去证实。

参考文献

[1]Castleman B,Towne VW.Case records of the Massachusetts General Hospital:Case No.40231〔J〕.N Engl J Med,1954,250(23):1001-1005.

[2]Moloney F,Twomey M,Hinchion J,et al.Castleman disease:an unexpected cause of a solitary pleural mass〔J〕.Case Rep Radiol,2013,2013:130515.

[3]Cecka F,Ferko A,Jon B,et al.Pancreatic Castleman disease treated with laparoscopic distal pancreatectomy〔J〕.Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2013,12(3):332-334.

[4]隋燕霞,王鸿雁,杨喆,等.Castleman病合并肾脏损害5例临床病理学分析〔J〕.临床与实验病理学杂志,2013,29(8):859-862.

[5]Turek G,Reszec J,Kochanowicz J,et al.A case of a solitary form of Castleman disease:ten-year follow-up〔J〕.Neurol Neurochir Pol,2013,47(2):179-183.

[6]Eszes N,Tamasi L,Csekeo A,et al.Unicentric mixed variant Castleman disease associated with intrabronchial plasmacytoma〔J〕.Diagn Pathol,2014,9:64.

[7]王琳,应建明,薛丽燕,等.Castleman病基因重排分析及其在鉴别诊断中的应用〔J〕.诊断病理学杂志,2013,20(7):397-400.

[8]Dogan A,Bagdi E,Munson P,et al.CD10 and BCL-6 expression in paraffin sections of normal lymphoid tissue and B-cell lymphomas〔J〕.Am J Surg Pathol,2000,24(6):846-852.

[9]韩潇,周道斌.Castleman病的发病机制和治疗进展〔J〕.中国医学科学院学报,2009,31(5):639-643.

[10]Dent AL,Shaffer AL,Yu X,et al.Control of inflammation,cytokine expression,and germinal center formation by BCL-6〔J〕.Science,1997,276(5312):589-592.

(编辑：吴小红)

Expression and Significance of CD10 and BCL-6 in Castleman Disease

HANHongyan,LIXiaobing,XUChunwei,etal.

TaizhouSecondPeopleHospital,Taizhou,100071

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression and significance of CD10 and BCL-6 in Castleman disease.Methods10 cases of Castleman disease,13 cases of reactive lymphoid hyperplasia and 13 cases of follicular lymphoma were selected.Which including surgical resection specimens and biopsy specimens.CD10 and BCL-6 expression were detected by immunohistochemical staining.Results Expression of CD10 was detected by immunohistochemical staining,there were statistically significant difference between Castleman's disease and reactive lymphoid hyperplasia (P=0.003);and there were statistically significant difference between Castleman's disease and follicular lymphoma (P<0.0001).Expression of Bcl-6 by immunohistochemical staining showed that there was statistically significant difference between Castleman's disease and reactive lymphoid hyperplasia and follicular lymphoma (P<0.0001).ConclusionCD 10 and Bcl-6 can be used as immunological markers in the diagnosis of Castleman's disease and differential diagnosis with reactive lymphoid hyperplasia and follicular lymphoma;The pathogenesis of Castleman’s disease may be associated with Bcl-6 gene abnormalities；Bcl-6 gene abnormality may be the basis of morphological changes in Castleman's disease.

【Key words】Castleman's disease;CD10;BCL-6;Etiology and pathogenesis;Diagnosis and differential diagnosis

(收稿日期2015-04-20修回日期 2015-10-08)

中图分类号：R734.5

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)03-0377-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.03.009

通讯作者：李晓兵