抗生素微生物检定法测定注射用磷霉素钠含量的不确定度分析

安贤兰 阚朋甲 王 宇

抗生素微生物检定法测定注射用磷霉素钠含量的不确定度分析

安贤兰1阚朋甲2王 宇3

目的 探讨注射用磷霉素钠含量采用抗生素微生物检定法鉴定的不确定度评定方法。方法 本次研究采用抗生素微生物检定法对注射用磷霉素钠含量测定过程中不确定度的来源及大小进行评定。结果 总合成不确定度u总=100．5%×urel总=2．5%；按置信概率P=0．96，K=1．95，扩展不确定度为U=1．95×u总=4．9%；注射用磷霉素钠含量测定结果为（100．5±4．9）%。结论 在对不确定度进行分析与评估时，应该尽可能地对不确定度所有来源进行密切考察，防止出现遗漏。

注射用磷霉素钠含量；抗生素微生物检定法；不确定度评定方法

抗生素微生物检定法主要是指在摊布特定试验菌的固体培养基内采用抗生素使其呈现出球面形的扩散，从而使其形成一个含有一定浓度的抗生素球形区，最终能够对试验菌的繁殖情况进行抑制，呈现出一个透明的抑菌圈［1］。通过对标准品与试供品产生出的抑菌圈情况对试供品效价进行测定。采用抗生素微生物检定法时，影响其结果的干扰因素较多，因而在操作中要严格按照相关的规则及要求进行，尽可能地缩小试验中造成的误差，确保试验结果的准确性［2］。

1 试验方法

1.1 试药与相关仪器

本次试验采用的试药包括注射用磷霉素钠、磷霉素标准品、抗生素微生物检定培养基II号、藤黄微球菌、磷酸盐缓冲液［3］。其中磷酸氢二钾以及磷酸二氢钾均为分析纯。相关仪器包括：型号为ZY-300G的钢管自动放置器、型号为ZY-300IV抑菌圈自动测量分析仪、隔水式恒温培养箱以及型号为BP-211D电子分析天平。

1.2 制备供试品与标准品

1.2.1 供试品 选取5瓶供试品，精密称定总内容物为7.269 g，平均装置为1.396 g。然后精密称取供试品74.52 mg，将其放置于容量为100 ml的容量瓶中，采用灭菌水溶解并将其稀释至刻度。最后将其制作成含磷霉素1 000单位/ml的标准品溶液，采用相同的方法，制作成含磷霉素20单位及10单位/ml的溶液，将其作为试供品溶液的高低剂量［4］。

1.2.2 标准品 精密称取磷霉素标准品38.09 mg，将其放置于容量为25 ml的容量瓶中，加灭菌水进行溶解后稀释至刻度，并将其制作成含磷霉素1 000 单位/ml的标准品溶液。然后精密地量取此溶液各2 ml，将其分别放置在容量为50 ml以及100 ml的容量瓶中，采用灭菌磷酸盐缓冲液加入其中，将其稀释至刻度。最后将其制作成含磷霉素20单位及10单位/ml的溶液，将其作为标准品溶液的高低剂量［5］。

1.3 制备及培养双碟

按照试验的要求平行制备9个双碟，并将其放置于水平台上。每只双碟的底层应该添加经过配置的记录为20 ml的抗生素微生物鉴定培养基，将其凝固后加入剂量为5 ml的菌层。摊布均匀且冷却后，在每只双碟的等距离处放置4个钢管，并将其稳定5～10 min。然后滴加之前已经制备完成的供试品以及标准品高低剂量溶液，将其盖上陶瓦盖后，放置于隔水式恒温培养箱（37℃）进行长达18 h的培养［6］。

1.4 测量抑菌圈直径与计算效价

对抑菌圈直径采用抑菌圈自动测量分析仪进行测定，按照生物检定统计法对效价进行计算。在计算的过程中需要同时满足三点：偏离平行不显著（P＞0.01）；效价平均可信限率为4.88%，在5%以内；回归项显著（P＜0.01）。

2 评估测量不确定度

供试品含量测定结果由以下数学模型给出：

其中PT表示为供试品效价，AT表示为供试品估价试价，Ws及WT分别表示为标准品与供试品的称样量。Ps表示为标准品的纯度，Vs及VT分别表示为标准品与供试品的稀释倍数，I为高低剂量之比。S1与S2分别表示为标准品低浓度溶液所致抑菌圈直径总和以及高浓度所致抑菌圈直径总和，T1与T2分别表示为样品低、高浓度所致抑菌圈直径总和。

试验结果表明，总合成不确定度u总=100.5%×urel总= 2.5%；按置信概率P=0.96，K=1.95，不确定度为U=1.95×u总= 4.9%；注射用磷霉素钠含量测定结果为（100.5±4.9）%。

3 讨论

本次研究表明，试供品总合成不确定度u总=2.5%；按置信概率P=0.96，K=1.95，不确定度为U=4.9%。这说明，在现有的条件下使测定结果受控，并且可以通过分析各分量不确定度的大小对实验进行优化，从而能够确保测定结果的真实可靠性。并且，合成不确定度数值主要取决因素在于数值较大的不确定度分量［7］。因此，在对不确定度进行分析与评估时，应该尽可能地对不确定度所有来源进行密切考察，防止出现遗漏。为了确保测量结果的准确性，需要采用有针对性的试验设计方法，缩小生物变异对试验结果造成的影响。并且要尽可能地减少稀释过程对测定结果造成的影响，将稀释次数控制在3次内，并尽可能地避免采用小体积量器进行量取及定容［8］。除此之外，还需要严密地控制实验过程中温度的变化情况，避免因温度导致溶剂体积的变化。

［1］ 黄晨，丁一刚，杜治平，等． 左磷右胺盐制备磷霉素钠工艺的优化研究［J］．化学与生物工程，2013，30（1）：32-35．

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［3］ 樊杰，宋永会，张盼月，等． Fenton-水解酸化-接触氧化处理模拟磷霉素钠制药废水［J］． 环境工程学报，2014，8（7）：2741-2747．

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［5］ 董晶晶． 注射用磷霉素钠含量测定条件的改进［J］． 中国药师，2010，13（7）：1059-1060．

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AN Xianlan1KAN Pengjia2WANG Yu31 Chemical Room，Yanbian Institute of Food and Drug Inspection，Yanji Jilin 133000，China，2 Chemical Room，Baicheng Food and Drug Inspection Institute，Baicheng Jilin 137000，China，3 Traditional Chinese Medicine Room，Yanbian Institute of Food and Drug Inspection，Yanji Jilin 133000，China

Objective To explore the evaluation method of uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection by using the microbial assay of antibiotics． Methods The source and size of the uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection were evaluated by the method of antibiotic microbiological assay． Results Total synthesis uncertainty u total =100．5% ×urel total =2．5%，according to the confidence probability P=0．96，K=1．95，extended uncertainty U=1．95×utotal=4．9%． Fosfomycin Sodium for Injection content determination result was（100．5±4．9）%． Conclusion In the analysis and evaluation of uncertainty，it should be possible to make a close investigation of all sources of uncertainty，so as to prevent the occurrence of omissions．

Fosfomycin sodium for injection content，Antibiotic microbiological assay method，Uncertainty evaluation method

R927

A

1674-9316（2016）22-0117-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．070 Determination of the Uncertainty of the Content of Fosfomycin Sodium for Injection by the Method of Microbial Assay of Antibiotics

1 延边州食品药品检验所化学室，吉林 延吉 133000 2白城市食品药品检验所化学室，吉林 白城 137000 3延边州食品药品检验所中药室，吉林 延吉 133000