3种方法测定植物源性农产品中霉灵残留量

李 辉，江泽军，曹维强，杨丽华，邵 华*，金 芬，佘永新，金茂俊，王珊珊，郑鹭飞，王 静*

(1.中国农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所 农业部农产品质量安全重点实验室，北京 100081；2.深圳中检联检测有限公司，广东 深圳 518052)

李 辉1，江泽军1，曹维强2，杨丽华1，邵 华1*，金 芬1，佘永新1，金茂俊1，王珊珊1，郑鹭飞1，王 静1*

(1.中国农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所 农业部农产品质量安全重点实验室，北京 100081；2.深圳中检联检测有限公司，广东 深圳 518052)

1 实验部分

1.1 仪器与设备

7890A气相色谱仪、火焰光度检测器(FPD)、氮磷检测器(NPD)均购自美国Agilent公司；Agilent 1200液相色谱-API 5000三重四极杆串联质谱仪(ESI源)；BiofugeStratos型高速冷冻离心机(德国贺力氏公司)；XL-04B型粉碎机(广州市旭明机械设备有限公司)；Vortex-Genie2型涡旋混合仪(美国Scientific Industries公司)；KQ-500DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；TTL-DCⅡ型氮吹仪(北京同泰联科技发展有限公司)。

1.2 试剂与材料

1.3 GC-FPD 法

1.3.1 样品前处理 准确称取一定量(黄瓜、番茄、油菜、甜菜10 g，糙米、大豆5 g)经捣碎或粉碎的试样(精确至0.01 g)，置于装有5 g NaCl的50 mL离心管中，加入10 mL丙酮-正己烷(1∶1)混合溶剂，涡旋振荡提取20 s，5 000 r/min离心5 min。取上层有机相于另一50 mL离心管中，残渣再分别用10 mL丙酮-正己烷重复提取2次，合并提取液，加入1%聚乙二醇丙酮溶液1 mL，于35 ℃水浴氮吹浓缩至约1 mL。用20 mL 3% NaHCO3溶液将剩余浓缩液转移至250 mL分液漏斗中，加入5 mL饱和NaCl溶液，用40 mL乙醚分两次萃取，每次20 mL，弃去乙醚层。再向水层加入5 mL饱和NaCl溶液，用2 mol/L盐酸调至pH 2.0。用60 mL乙醚分3次萃取，每次20 mL，合并乙醚层，过无水Na2SO4干燥后，加入1 mL 1%聚乙二醇丙酮溶液，于35 ℃水浴氮吹浓缩至约1 mL，待衍生化。

1.3.2 样品的衍生化 在上述步骤处理的样品浓缩液中加入50 μL 25% K2CO3和1 mL 0.2% DECTP丙酮溶液，于30 ℃超声30 min，冷却至室温，用20 mL丙酮转移至梨形瓶中，于35 ℃水浴氮吹至近干，用丙酮定容至2 mL，过0.45 μm滤膜，供GC-FDP分析。

1.3.4 仪器条件 色谱柱：DB-17MS(30 m × 0.32 mm，0.25 μm)；载气：氮气(纯度大于99.999 %)，流速1 mL/min；燃气：氢气，流速75 mL/min；助燃气：空气，流速100 mL/min；尾吹气：高纯氮气，流速60 mL/min；进样口温度230 ℃；进样方式：不分流进样；进样量：1 μL；检测器温度为240 ℃。色谱柱温度：初始温度80 ℃保持0.5 min，以15 ℃/min升至150 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升至230 ℃，保持5 min。

1.4 GC-NPD法

1.4.1 样品前处理 准确称取一定量(黄瓜、番茄、油菜、甜菜10 g，糙米、大豆5 g)经捣碎或粉碎的试样(精确至0.01 g)，置于50 mL 离心管中，加入10 mL丙酮-正己烷(1∶1)，充分振荡1 min，加入4 g无水MgSO4和3 g NaCl，充分振荡1 min，于5 000 r/min离心3 min，待净化。取上述离心的上清液2 mL置于装有0.3 g无水MgSO4和0.1 g C18吸附剂的10 mL离心管中，充分振荡30 s，静置1 min。取上层清液过0.22 μm微孔滤膜后，供GC-NPD分析。

1.4.2 仪器条件 色谱柱：DB-WAX(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；载气：氮气(纯度大于99.999 %)，流速1 mL/min；燃气：氢气，流速3 mL/min；助燃气：空气，流速60 mL/min；尾吹气：高纯氮气，流速4 mL/min；进样口温度240 ℃；进样方式：不分流进样；进样量：2 μL；检测器温度为320 ℃。色谱柱温度：初始温度60 ℃保持0.5 min，以10 ℃/min升至200 ℃，保持5 min，以5 ℃/min升至240 ℃，保持10 min。

根据文化和旅游部非物质文化遗产司的统计，截至2018年4月，前四批1986位国家级非物质文化代表性项目代表性传承人中，去世人数已经超过400位。非物质文化遗产保护主要方式为传承，但现在全国很多非物质文化遗产出现传承断层，因此抢救性保护已经刻不容缓。祥云县傈僳族非物质文化遗产“七人节”和傈僳族传统纺织技艺现在也出现了传承人断层现象，其中就傈僳族传统纺织技艺最为严重，现在整个村能够完整掌握此项技艺的不及10人，且这些传承人平均年龄为62岁左右，年龄最高的为73岁，年龄最小的为51岁。

1.5 LC-MS/MS法

1.5.1 样品前处理 准确称取一定量(黄瓜、番茄、油菜、甜菜10 g，糙米、大豆5 g)经捣碎或粉碎的试样(精确至0.01 g)，置于50 mL离心管中。黄瓜、番茄、油菜和甜菜加入10 mL乙腈，糙米和大豆先加入5 mL超纯水，涡旋30 s，静置30 min后，再加入10 mL乙腈，均涡旋提取5 min，然后加入4 g MgSO4和1 g NaCl，涡旋振荡2 min，于5 000 r/min离心5 min，待净化。取上述离心后的上清液1 mL于装有150 mg无水MgSO4和20 mg GCB(油菜提取液加GCB 50 mg)的10 mL离心管中，充分涡旋振荡1 min，然后于5 000 r/min离心5 min，取上层清液过0.22 μm滤膜后，供LC-MS/MS检测。

1.5.2 仪器条件 色谱条件：色谱柱：HSS T3柱(150 mm × 2.1 mm，3.5 μm)；等度洗脱，流动相：0.2%甲酸水-乙腈(10∶90)；流速：0.2 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：5 μL。

质谱条件：离子源：ESI源；离子源温度(TEM)：550 ℃；扫描方式：正离子模式；喷雾电压(IS+)：5 500 V；气帘气(CUR)：30 psi；碰撞气压力(CAD)：5 psi；雾化气(GS1)：55 psi；辅助气(GS2)：40 psi；去簇电压(DP)：68 V；射入电压(EP)：8 V；碰撞室入口电压(CXP)：12 V；多反应离子监测(MRM)：母离子为100.1，子离子为54.1，28.1。定量离子对100.1>54.1的碰撞能量(CE)为20 V，定性离子对100.1>28.1的CE为26 V。

2 结果与讨论

2.1 方法条件的优化

2.2 方法学评价

2.3 方法比较

2.4 实际样品分析

3 结 论

[1] Song B A，Huang J.Agrochemicals(宋宝安，黄剑.农药)，2001,40(4)：13-14.

[6] MRLs for Pesticides in Foods.Korea Food & Drug Administration.2009.

[7] GB 2763-2014.National Food Safety Standard-Maximum Residues Limits for Pesticides in Food.National Standards of the People's Republic of China (食品安全国家标准-食品中农药最大残留限量.中华人民共和国国家标准).

[8] Tan Z Y，Guo Z Y.Pestic.Sci.Admin.(谭智勇，郭正元.农药科学与管理)，2011，32(4)：29-31.

[9] Tamura Y，Takano I，Kobayashi M，Tomizawa S，Tateishi Y，Sakai N，Kamijo K，Ibe A，Nagayama T.J.FoodHyg.Soc.Jpn.，2008，49(3)：223-227.

[10] Cai K B，Yang R B，Peng X C，Wu Y Y.J.AnhuiAgric.Sci.(蔡可斌，杨仁斌，彭晓春，吴彦瑜.安徽农业科学)，2011，39(34)：21069-21071.

[11] Ban R，Song B A，Yang S，Hu D Y，Wang J，Zeng S，Huang R M.Agrochemicals(班睿，宋宝安，杨松,胡德禹，王俊，曾松，黄荣茂.农药)，2007，46(3)：187-188.

[12] Jin L H，He S M，Hu D Y，Zhang Y P，Huang R M，Cai K，Liu B.Agrochemicals(金林红，何寿明，胡德禹，张钰萍，黄荣茂，蔡凯，刘彬.农药)，2010，49(6)：443-444.

[17] Eun-Young，Kim，Chai S，Park J W，Shim J R，Jung J W，Kim T H.Anal.Technol.Tomorrow，2014，(4)：105.

[18] Cai S Y，Xu X Y，Cai Z B.Chem.Eng.(才绍玉，徐秀玉，蔡之彬.化学工程师)，1999，(3)：50-51.

[19] Zhang G H，Cai S Y.Chem.Eng.(张广海，才绍玉.化学工程师)，2002,(4)：37-38.

[20] Pang Y X，Song B A，Hu D Y，Zhou H，Song Z L.Agrochemicals(庞元勋，宋宝安，胡德禹，周鸿，宋中伦.农药)，2001,40(4)：23.

[21] Jiang Z J，Shi M Q，Liu G Y，Li T F，Li Y F，Shao H，Jin F，Jin M J，She Y X，Wang S S，Zheng L F，Wang J.J.Instrum.Anal.(江泽军，石梦琪，刘广洋，李腾飞，李永飞，邵华，金芬，金茂俊，佘永新，王珊珊，郑鹭飞，王静.分析测试学报)，2015，34(8)：867-873.

[22] Zuo H G，Zhan C R，Wu C H，Li R K，Guo P.Phys.Test.Chem.Anal.：Chem.Anal.(左海根，占春瑞，伍彩花，李如坤，郭平.理化检验:化学分册)，2010，46(10)：1201-1204.

[23] Chen H H，Chen Y H.Lab.Sci.(陈海红，陈宇鸿.实验室科学)，2014，17(1)：171-173.

Determination of Hymexazol in 6 Plant-derived Agro-products by Three Analytical Methods

LI Hui1，JIANG Ze-jun1，CAO Wei-qiang2，YANG Li-hua1，SHAO Hua1*，JIN Fen1，SHE Yong-xin1，JIN Mao-jun1，WANG Shan-shan1，ZHENG Lu-fei1，WANG Jing1*

(1.Key Lab of Agro-product Quality and Safety of Chinese Agricultural Ministry，Institute of Quality Standard and Testing Technology for Agro-product，Chinese Academy of Agricultural Science，Beijing 100081，China;2. Shenzhen Sino Assessment Group，Shenzhen 518052，China)

Three analytical methods were developed for the determination of hymexazol residues in 6 kinds of plant-derived agro-products(e.g.soybean，rice，cucumber，beetroot，cole and tomato) by gas chromatography with a flame photometric detector(GC-FPD)，gas chromatography with a nitrogen-phosphorus detector(GC-NPD) and liquid chromatography tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) ，respectively.In GC-FPD，samples were extracted with acetone-hexane.The extracts were derivated with dimethylthiophosphoryl(DECTP)，and then determined by GC-FPD，and quantified by the external standard method.In GC-NPD，samples were extracted with acetone-hexane.The extracts were purified with octadecylsilane(C18) sorbent，and then determined by GC-NPD，with quantitation by the external standard method.In LC-MS/MS，samples were extracted with acetonitrile.The extracts were purified with graphitized carbon black(GCB) sorbent，and then determined by LC-MS/MS with quantitation by the matrix-matched calibrations.The calibration curves of three methods all showed good linearities，with correlation coefficients(r2) more than 0.998.At three spiked concentration levels，the inter-day average recoveries of hymexazol were found to be in the range of 82%-96% for GC-FPD method with relative standard deviations(RSDs) of 3.4%-12.1%,81%-103% for GC-NPD method with RSDs of 4.1%-14.3% and 74%-110% for LC-MS/MS with RSDs of 2.5%-10.7%.In GC-FPD and GC-NPD，the limits of quantitation(LOQ) in beetroot were 0.05 mg/kg，and LOQs of other five matrices were 0.25 mg/kg.In LC-MS/MS，LOQs of 6 matrix were all 0.05 mg/kg.Three methods are accurate，and could meet the detection requirements of hymexazol residue in plant-derived agro-products.

hymexazol；GC-FPD；GC-NPD；LC-MS/MS；plant-derived agro-products

2016-03-31；

2016-06-15

中国农业科学院科技创新工程“农业化学污染物残留检测及行为研究”创新团队资助；农业行业标准制定项目(523)

10.3969/j.issn.1004-4957.2016.11.011

O657.7；S482.2

A

1004-4957(2016)11-1434-06

*通讯作者：邵 华，硕士，副研究员，研究方向：食品安全检测技术，Tel：010-82106569，E-mail：nkshaohua@163.com 王 静，博士，教授，研究方向：食品安全检测技术，Tel：010-82106568，E-mail：w_jing2001@126.com