忍冬叶环烯醚萜苷类化学成分研究

陈静娴,耿岩玲，于金倩，朱姮，王晓，王岱杰*，牟玉柱，李圣波

(1. 山东师范大学生命科学学院，山东 济南 250014；2. 山东省分析测试中心，山东 济南 250014；3. 烟台张裕葡萄酿酒股份有限公司，山东 烟台 264000；4. 山东亚特生态技术股份有限公司，山东 临沂 276017)



忍冬叶环烯醚萜苷类化学成分研究

陈静娴1,耿岩玲2，于金倩2，朱姮2，王晓2，王岱杰2*，牟玉柱3，李圣波4

(1. 山东师范大学生命科学学院，山东 济南 250014；2. 山东省分析测试中心，山东 济南 250014；3. 烟台张裕葡萄酿酒股份有限公司，山东 烟台 264000；4. 山东亚特生态技术股份有限公司，山东 临沂 276017)

摘要：利用硅胶、Sephadex LH-20以及制备液相色谱等方法进行分离纯化，从忍冬叶中分离得到3个环烯醚萜苷类化合物，以及β-谷甾醇和胡萝卜苷。通过理化性质、波谱数据分析，分别鉴定为裂环马钱素酸、demethylsecologanol、裂环马钱素、β-谷甾醇和胡萝卜苷，其中化合物demethylsecologanol为首次从该属植物中分离得到。

关键词：忍冬叶；环烯醚萜苷；demethylsecologanol；分离

忍冬(LonicerajaponicaThunb.)为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)多年生常绿藤本植物，是我国传统中药，药用部位在历史上经历了茎叶-茎叶花-花的变迁历程[1-3]。长期以来，忍冬的花和藤分别作为药材金银花和忍冬藤被《中国药典》收录[4-5]。忍冬叶为金银花和忍冬藤的副产物，产量约为花的10倍，其黄酮类、环烯醚萜苷类和咖啡酰奎宁酸类成分含量丰富。忍冬叶产量虽较高，却一直被视为非药用部位而未得到充分开发利用，造成资源浪费[6]。

本实验对忍冬叶化学成分进行研究，分离得到3个环烯醚萜苷类化合物，裂环马钱素酸(1)、demethylsecloganol(2)、裂环马钱素(3)以及β-谷甾醇(4)和胡萝卜苷(5)，其中化合物2为首次从该属植物中分离得到。

1仪器与材料

Varian-600核磁共振波谱仪(美国Varian公司)；Agilent 1100/MSD液质联用仪(美国Agilent公司)；R-230旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；L-3000液相色谱仪(北京普源精电科技有限公司)；SB-5200D超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)；TH-II型薄层加热器(上海科哲生化科技有限公司)。

薄层硅胶GF254、薄层硅胶H、200～300目柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20(瑞典GE公司)；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇、甲醇为分析纯，购自济南吉武化学试剂有限公司；液相色谱用乙腈、甲醇(美国TEDIA公司)，水为高纯水。

忍冬叶由山东亚特生态技术有限公司提供，秋季采收，阴干。样品经山东中医药大学李佳教授鉴定为忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的叶。

2提取与分离

将10 kg忍冬叶粉碎，80%乙醇回流提取3次，每次2 h，旋蒸提取液至无醇味，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，减压浓缩、冷冻干燥，得各自萃取部位。正丁醇部位(120 g)采用MCI粗分离，依次用5倍柱体积纯水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇和100%甲醇洗脱，减压浓缩，冷冻干燥。20%甲醇部位经Sephadex LH-20凝胶色谱和制备HPLC分离得到化合物1(38 mg)；40%甲醇部位经Sephadex LH-20凝胶色谱和制备HPLC分离得到化合物2(31 mg)、化合物3(33 mg)。乙酸乙酯部位(150 g)氯仿-甲醇(100:0→0:100)梯度洗脱，得到8个组分。组分2经反复硅胶柱色谱及凝胶色谱Sephdex LH-20分离得到化合物4(75 mg)；组分5经反复硅胶柱色谱及凝胶色谱Sephdex LH-20分离得到化合物5(26 mg)。

3结构鉴定

化合物1：白色粉末。ESI-MS：m/z405.1 [M+H]+，427.1 [M+Na]+，403.1 [M-H]-。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6):δ7.43 (1H, s, H-3), 5.53 (1H, m, H-8), 5.39 (1H, d,J=3.6 Hz, H-1), 5.24 (1H, m, H-10), 5.19 (1H, m, H-10), 4.49 (1H, d,J=7.8 Hz, H-1′), 3.67 (1H, d,J=11.4 Hz, H-6′), 3.61 (3H, br s, -OCH3), 3.43 (1H, m, H-5′), 3.42 (1H, m, H-6′), 3.18 (1H, m, H-3′), 3.14 (1H, m, H-4′), 3.03 (1H, t,J= 9.6 Hz, H-5), 2.97(1H, t,J= 8.4 Hz), 2.78 (1H, m, H-9), 2.76 (1H, m, H-6), 2.13 (1H, dd,J=9.0, 15.6 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6):δ173.8 (C-7), 168.9 (C-11), 152.3 (C-3), 133.8 (C-8), 120.3 (C-10), 108.8 (C-4), 99.0 (C-1′), 95.9 (C-1), 77.8 (C-5′), 77.2 (C-3′), 73.4 (C-2′), 70.4 (C-4′), 61.5 (C-6′), 43.5 (C-9), 51.4 (-OCH3), 34.3 (C-6), 27.4 (C-5)。以上数据与文献报道基本一致[7]，故鉴定化合物1为裂环马钱素酸。

化合物2：白色粉末。ESI-MS：m/z377.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6):δ7.35 (1H,J=2.4 Hz, H-3), 5.47 (2H, m, H-1, 8), 5.30 (1H, d,J=1.8 Hz, H-10), 5.24 (1H, d,J=1.8 Hz,H-10), 4.50 (1H, d,J=7.8 Hz, H-1′), 2.65 (1H, m, H-5), 2.51 (1H, d, H-9), 1.76 (1H, m, H-6), 1.51 (1H, m, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 165.1 (C-11), 151.8 (C-3), 132.8 (C-8), 120.7 (C-10), 105.2 (C-4), 98.5 (C-1′), 96.0 (C-1), 77.8 (C-5′), 76.8 (C-3′), 73.5 (C-2′), 70.4 (C-4′), 68.1 (C-6′), 61.4 (C-7), 41.9 (C-9), 27.2 (C-6), 24.7 (C-5)。以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物2为demethylsecologanol。

化合物3：白色粉末。ESI-MS：m/z389.3 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6):δ9.63 (1H, s, H-7), 7.50 (1H, s, H-3), 5.56 (1H, m, H-8), 5.41 (1H, d,J=4.2 Hz, H-1), 5.21 (2H, m, H-10), 4.51 (1H, d, J=8.4 Hz, H-1′), 3.56 (1H, s, -OCH3), 3.32 (1H, d, m, H-1)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)：δ200.5 (-COOH), 167.0 (C-11), 152.8(C-3), 134.1 (C-8), 120.4(C-10), 108.6 (C-4),99.0(C-1′), 95.8(C-1), 77.8 (C-3′), 77.1 (C-5′), 73.4(C-2′), 70.4 (C-4′), 61.5 (C-6′), 51.5(-OCH3), 44.0 (C-9), 43.8 (C-6), 26.5 (C-5)。以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物3为裂环马钱素。

化合物4：白色粉末。Molish反应和Liebermann-Burchard反应均为阳性，表明为甾体苷类化合物。ESI-MS：m/z413.5 [M-H]-。TLC与β-谷甾醇对照品Rf一致，故确定化合物4为β-谷甾醇(β- Sitosterol)。

化合物5：白色粉末，Molish反应和Liebermann-Burchard反应均为阳性，表明为甾体苷类化合物。ESI-MS：m/z575.5 [M-H]-。TLC与胡萝卜苷对照品Rf一致，故确定化合物5为胡萝卜苷(Daucosterol)。

4结论

忍冬叶虽然产量高、采收周期长且采收方法简单，却一直被视为非药用部位而未得到充分开发利用。环烯醚萜类成分是一些动植物的自身防御物质，同时具有广泛的生物活性，也是植物的有效成分之一。本研究对忍冬叶中环烯醚萜苷类成分进行化学研究，分离得到裂环马钱素酸、demethylsecologanol、裂环马钱素3个环烯醚萜苷类化合物以及β-谷甾醇和胡萝卜苷，其中demethylsecologanol为首次从忍冬属植物中分离得到，该研究为忍冬叶的进一步开发利用提供了理论基础。

参考文献:

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[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2015年版一部 [S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 164.

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[6] 牛晓雪, 崔旭盛, 苏贺, 等. 高效液相色谱法同时测定忍冬中7种成分 [J]. 色谱, 2012, 30(2): 211-214.

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Chemical constituent analysis of iridoid glycosides from leaves ofLonicerajaponicaThunb.

CHEN Jing-xian1,GENG Yan-ling2,YU Jin-qian2,ZHU Heng2,WANG Xiao2,WANG Dai-jie2*, MOU Yu-zhu3,LI Sheng-bo4

(1. School of Life Sciences, Shandong Normal University, Jinan 250014, China;2. Shandong Analysis and Test Center, Jinan 250014, China;3. Yantai Changyu Pioneer Wine Co. Ltd., Yantai 264000, China;4. Shandong Yate Ecological Technology Co. Ltd., Linyi 276017, China)

Abstract∶Three iridoid glycoside compounds were purified and isolated from leaves of Lonicera japonica Thunb. (L. japonica) with silica gel, sephadex LH-20 and preparative HPLC. Through analysis of spectrum data and physicochemical properties, we identified them as secoxyloganin, demethylsecologanol, secologanin,β-sitosterol and daucosterol.Compound demethylsecologanol is originally isolated from Lonicera.

Key words∶leaf of Lonicera japonica Thunb.; iridoid glycosides; demethylsecologanol; separation

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1002-4026(2016)02-0001-03

作者简介：陈静娴 (1991-)，女，硕士研究生，研究方向为天然产物分离纯化与活性研究。*通讯作者。Email: wangdaijie@126.com

基金项目：国家自然科学基金(81473298)；山东省科技发展计划(2014GSF119031)

收稿日期：2015-10-14

DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2016.02.001

【中药与天然活性产物】