蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究

董祺，高志惠

(1.山东老来寿生物集团股份有限公司，山东 济南 250014；2.山东中医药大学，山东 济南 250355)



【药理与毒理】

蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究

董祺1，高志惠2*

(1.山东老来寿生物集团股份有限公司，山东 济南 250014；2.山东中医药大学，山东 济南 250355)

摘要：采用小鼠腋下S180实体瘤模型，通过检测抑瘤率、免疫器官重量以及血清NSE、CEA、CA72-4等指标，全面评价蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠的抗肿瘤作用。结果表明，蛹虫草子实体胶囊中、高剂量能明显抑制S180实体瘤的生长(P<0.05)；高、中、低剂量均可延长S180腹水瘤小鼠的生存时间；高、中、低剂量组均能降低血清NSE的值；中、低剂量组均能增加血清CEA的值；高剂量组能增加血清CA72-4值，而中、低剂量则减少血清CA72-4值。研究认为，蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠具有一定的抗肿瘤作用。

关键词：蛹虫草子实体胶囊；S180肉瘤小鼠；抗肿瘤

蛹虫草Cordycepsmilitaris(L.ex.Fr)Link也称北虫草，与冬虫夏草同为虫草属，是一种具有较高医用价值的药用真菌。临床报道蛹虫草对胃癌、肝癌以及鼻咽癌等多种癌症具有一定的治疗作用[1-2]，但有关蛹虫草抗肿瘤的实验研究目前未见报道。为了验证“老来寿牌蛹虫草子实体胶囊”的抗癌功能，并模拟子实体胶囊在临床上出现的一些问题，探讨药物的治疗机制，我们进行了子实体胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究，为下一步的市场开发和临床应用提供理论依据。

1材料

1.1药品与试剂

老来寿牌蛹虫草子实体胶囊(济南老来寿生物股份有限公司，生产批号：20140630)；

复方环磷酰胺片(天津A制药有限公司，生产批号：20140301)；神经元特异性烯醇化酶(NSE)试剂盒(武汉华美生物工程有限公司，生产批号：E11136914)；癌胚抗原(CEA)试剂盒(武汉华美生物工程有限公司，生产批号：C16136913)；糖链抗原72-4(CA72-4)试剂盒(上海西唐生物科技有限公司，生产批号：1210251)

1.2实验动物与瘤株

昆明种小鼠，雌雄各半，300只，体重均为18～22 g，购自山东大学实验动物中心，合格证号：鲁动质scxk(鲁)20130009。S180肉瘤腹水型荷瘤小鼠，由山东省医科院药物所提供。

1.3主要仪器

GB303基本型电子天平(Mettler-Totado公司)；恒温水浴(上海医用电子设备厂生产)；DDL-5型离心机(上海安亭科技仪器厂生产)。

2方法

2.1剂量配制依据

蛹虫草每天每次用量为0.35 g，共4次。设计给小鼠灌胃剂量为按体表面积比值折算给药剂量，高剂量给药0.364 g/kg、中剂量给药0.182 g/kg、低剂量给药为0.091 g/kg。

复方环磷酰胺片：按日用量200 mg(环磷酰胺)计，按体表面积比值折算给药剂量为等效剂量，小鼠给药量为0.026 g/kg。

2.2裸鼠移植S180模型建立及动物分组

取S180肉瘤腹水型荷瘤小鼠[3-8]，消毒腹部皮肤，用5 mL一次性无菌注射器抽取腹腔积液，所抽腹水放入无菌三角烧瓶内，用0.9%生理盐水调整细胞浓度至1×107mL-1，0.5 h内每只小鼠右侧腋窝皮下接种肿瘤细胞悬液0. 2 mL。24 h后称重随机分为5组(每组10只)：模型对照组、蛹虫草高、中、低剂量组，复方环磷酰胺片组，分别给予水，蛹虫草子实体胶囊(0.364、0.182、0.091 g/kg)以及环磷酰胺26 mg/kg，灌胃给药，0.04 mL/g，每天1次，连续14 d。

2.4指标检测和结果评价

观察动物至第14天，最后一天灌胃后取血，3 000 r/min分离血清，采用酶联反应试剂盒检测血清NSE、CEA、CA72-4 的值。取血后后采用颈椎脱臼法处死小鼠，称量并记录体重，剖取肿瘤组织，称重、计算抑瘤率[9-16]。剖取胸腺组织，称量并记录其重量。

抑瘤率 =(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100%。

2.5统计学方法

3结果

3.1蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠肿瘤重量和胸腺的影响

由表1可知蛹虫草子实体胶囊高、中、低剂量组均能明显抑制 S180实体瘤的生长，其中，与模型对照组相比，蛹虫草子实体胶囊高、中剂量组小鼠的瘤体重量有极其显著性差异(P<0.001)；蛹虫草子实体胶囊低剂量组小鼠的瘤体重量有非常显著性差异(P<0. 01)。从瘤重抑制率分析，3个剂量组有明显的剂量依赖性，说明蛹虫草子实体胶囊高、中剂量对于S180肉瘤小鼠抑制肿瘤的效果优于复方环磷酰胺片(见表1～2)。

由表2可知蛹虫草子实体胶囊高、中、低剂量组均能增加S180小鼠的胸腺重量，提高肿瘤小鼠的免疫能力。从胸腺重量值分析，蛹虫草子实体胶囊高剂量组大于蛹虫草子实体胶囊中剂量组大于复方环磷酰胺片组等于蛹虫草子实体胶囊低剂量组大于模型对照组。

表1　蛹虫草子实体胶囊对S180肉瘤小鼠肿瘤重量的影响±s，n=10)

注：**P<0.01，***P<0.001，vs.模型组。

表2　蛹虫草子实体胶囊对S180肉瘤小鼠胸腺重量的影响±s，n=10)

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型组。

3.2蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠的血清NSE的影响

由表3可知，蛹虫草子实体胶囊高、中、低剂量组均能降低血清NSE的值。复方环磷酰胺片组能显著降低NSE值，与模型组比较具有非常显著性差异(P<0.01)高剂量组与模型组比较无显著性差异(P>0.05)，中低剂量组与模型组比较均能降低NSE值(P<0.05)，3个剂量组有明显的剂量依赖性。

表3　蛹虫草子实体胶囊对S180肉瘤小鼠血清NSE的影响±s，n=8)

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型组。

3.3蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠的血清CEA 的影响

由表4可知，蛹虫草子实体胶囊中、低剂量组均能增加血清CEA的值。复方环磷酰胺片组能明显提高小鼠血清CEA值，与模型组比较具有非常显著性差异(P<0.01)，高、中剂量组也能增加CEA值，与模型组比较具有非常显著性差异(P<0.01或P<0.05)，但效果差于复方环磷酰胺片组，低剂量组与模型组比较无显著性差异(P>0.05)，3个剂量组有明显的剂量依赖性。

表4　蛹虫草子实体胶囊对S180肉瘤小鼠CEA的影响±s，n=8)

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型组。

3.4蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠的血清CA72-4 的影响

表5　蛹虫草子实体胶囊对S180肉瘤小鼠CA72-4的影响

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型组。

由表5可知，蛹虫草子实体胶囊高剂量组能增加血清CA72-4值,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，而中、低剂量则减少血清CA72-4值。从数值上分析，复方环磷酰胺片组大于蛹虫草子实体胶囊高剂量组大于模型对照组和蛹虫草子实体胶囊中剂量组大于蛹虫草子实体胶囊低剂量组。

4讨论

目前肿瘤的主要治疗方法为化学治疗、手术和放射治疗，但是这些方法副作用大、价格昂贵，效果也不十分理想，极大地限制了其使用范围。传统中医认为肿瘤是“积之始生，得寒乃生”及“内伤于忧怒”，即外感和情志所伤是积聚的病因，但发病与否决定于人之正气。

中医通常采用扶正固本、活血化瘀和清热解毒法发挥抑瘤作用，尤其在调整机体功能、增强机体免疫力方面有着独特的优势。蛹虫草为虫草属的模式种，含有虫草素、虫草多糖、腺苷和氨基酸以及微量元素等，其独特的药理作用已日益引起药学界的高度重视。由于蛹虫草具有以上诸多优点，成为虫草属中药用虫草菌中的佼佼者，目前是天然虫草的最佳代替品。本实验采用裸鼠移植S180模型，发现其能抑制 S180实体瘤的生长，非常适合开发成抗肿瘤药物。实验还发现，小样本动物血清检测时，蛹虫草子实体胶囊能降低血清NSE、CA72-4、CEA的值，其规律性有待进一步研究。

NSE是神经元和神经内分泌细胞所特有的一种酸性蛋白酶，是小细胞肺癌最敏感最特异的肿瘤标志物；CA72-4通过乳腺癌肝转移灶的癌细胞膜免疫所制备，也是胃肠道和卵巢癌的肿瘤标志。蛹虫草子实体胶囊能有效降低NSE和CA72-4数值，从分子生物学方面显示了其抑制肿瘤的能力。下一步，课题组需继续进行大样本动物检测，从而建立蛹虫草子实体胶囊与血清NSE、CEA之间的关联性，为临床应用提供实验依据。

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Experiments of antitumor effect ofCordycepsmilitariscapsules on S180mouselet

DONG Qi1,GAO Zhi-hui2*

(1.Shandong Laolaishou Biology Group Co. Ltd., Jinan 250014, China;2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)

Abstract∶We employ S180solid tumor model at the armpit of mouselet to comprehensively evaluate antitumor effect of Cordyceps militaris capsules on S180mouselet through the test for such parameters as tumor inhibition rate, immune organ weight and serum NSE, CEA and CA72-4. Results show that medium and high dosage Cordyceps military capsule can significantly inhibit the growth of S180solid tumor (P<0.05). High, medium and low dosage Cordyceps military capsule can all extend survival time of S180ascites sarcoma mouselet. High, medium and low dosage Cordyceps military capsule can all reduce the value of serum neuron specific enolase (NSE). Medium and low dosage Cordyceps military capsule can increase the value of serum CEA. High dosage Cordyceps military capsule can increase the value of serum CA72-4, but medium and low dosage Cordyceps military capsule can reduce the value of serum CA72-4. These experiments show that Cordyceps militaris capsule has certain antitumor effect on S180mouselet.

Key words∶Cordyceps militaris capsules; S180mouselet; antitumor

中图分类号：R965.1

文献标识码：A

文章编号：1002-4026(2016)02-0025-05

作者简介：董祺(1973-)，男，中药师，研究方向为中药新药研究。Tel：0531-87165709，Email：13361009188@189.cn；150271091@qq.com*通讯作者，高志惠(1990-)，女，硕士研究生，研究方向为中药药理。Tel：0531-82949847，Email：gaozhihui8800@163.com

基金项目：山东省国际科技合作计划(2012GHZ21903)；山东省自然科学基金(ZR2015HM061)；山东省科技发展计划(2014GSF118026)；

收稿日期：2015-12-23

DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2016.02.006