子宫内膜异位症相关性卵巢癌组织PIK3CA基因变异情况及蛋白表达变化

闫泓霖，王登兰，李莉

(1新疆医科大学第二附属医院,乌鲁木齐830028；2华中科技大学同济医学院附属同济医院)



子宫内膜异位症相关性卵巢癌组织PIK3CA基因变异情况及蛋白表达变化

闫泓霖1，王登兰1，李莉2

(1新疆医科大学第二附属医院,乌鲁木齐830028；2华中科技大学同济医学院附属同济医院)

目的观察子宫内膜异位症相关性卵巢癌组织磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α基因(PIK3CA基因)基因变异情况和蛋白表达变化。方法 收集30例子宫内膜异位症相关性卵巢癌患者的癌组织和癌旁组织。采用PCR-单链构象多态性法检测PIK3CA基因的热点变异区是否存在变异；采用免疫组化SP法检测癌组织及癌旁组织的PIK3CA蛋白表达情况。结果癌组织和癌旁组织的第1、9和20外显子的构象无显著性差异(提示癌组织PIK3CA基因正常，并未出现变异)。癌组织PIK3CA蛋白阴性12例、弱阳性4例、阳性9例、强阳性5例，PIK3CA蛋白阳性表达率60.00%，癌旁组织分别为26、4、0、0例和13.33%，癌组织PIK3CA蛋白阳性表达率高于癌旁组织，P<0.05。结论 子宫内膜异位症相关性卵巢癌患者癌组织PIK3CA基因无变异，但PIK3CA蛋白表达升高。

子宫内膜异位症相关性卵巢癌;磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α

子宫内膜异位症相关性卵巢癌发病与某些癌基因表达具有相关性[1,2]。磷脂酞肌醇-3-激酶催化亚单位α基因(PIK3CA基因)是一种常见的癌基因。不同恶性肿瘤中PIK3CA基因变异及表达情况存在差异[3～5]。2013年2月～2015年10月，我们检测了30例子宫内膜异位症相关性卵巢癌患者癌组织及癌旁组织中PIK3CA基因变异和表达情况，旨在明确PIK3CA基因变异及异常表达与子宫内膜异位症相关性卵巢癌的关系。现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料 30例子宫内膜异位症相关性卵巢癌患者，均经病理检查证实。患者年龄39.5～58.4岁，平均48.4岁；FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期22例，Ⅲ、Ⅳ期8例；分化程度为高分化19例，中、低分化11例；有淋巴结转移8例，无淋巴结转移22例。患者在手术切除治疗前均未采取放化疗或免疫疗法治疗，均采取手术切除治疗，术中收集患者的癌组织标本和癌旁组织标本。

1.2 PIK3CA基因变异检测方法采用PCR-单链构象多态性法检测PIK3CA基因第1、9和20外显子区域的构象。操作按试剂盒说明书进行。

1.3PIK3CA蛋白检测方法 采用免疫组化SP法。标本均经脱蜡、水化、PBS冲洗；用新鲜配制的4% H2O2封闭灭活15 min，PBS冲洗后进行微波修复；切片滴加家兔血清封闭液，于室温静置30 min后甩干剩余液；切片滴加一抗，于4 ℃环境下放置10 h后用PBS冲洗；切片滴加二抗，于室温静置30 min后用PBS冲洗，并滴加三抗，于室温静置30 min后用PBS冲洗。用DAB显色并在显微镜下观察显色反应，以蒸馏水冲洗终止反应。用苏木素重复染色,蒸馏水冲洗，脱水、透明、封片后观察并照相。以细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性细胞占总细胞的百分比<5%为阴性，5%～<20%为弱阳性，20%～35%为阳性，>35%为强阳性。弱阳性、阳性、强阳性均为阳性表达。

1.4统计学方法采用SPSS12.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

癌组织和癌旁组织PIK3CA基因第1、9和20外显子的构象无显著性差异(提示癌组织PIK3CA基因序列正常，并未出现变异)。癌组织PIK3CA蛋白表达阴性12例、弱阳性4例、阳性9例、强阳性5例，PIK3CA蛋白阳性表达率60.00%，癌旁组织分别为26、4、0、0例和13.33%，癌组织PIK3CA蛋白阳性表达率高于癌旁组织，P<0.05。

3　讨论

子宫内膜异位症相关性卵巢癌的发病率较高，虽然手术切除、放化疗治疗的效果较好，但常导致患者病灶局部形态结构缺失或功能障碍；对此，有必要明确子宫内膜异位症相关性卵巢癌的发病机制，提高对该病的诊治水平，准确评估临床预后，为临床治疗提供依据[6,7]。

PIK3CA基因作为逆转录病毒癌基因的同系物，由多个外显子组成，广泛参与细胞增殖、存活和细胞周期调控等。大量研究表明，PIK3CA基因在多种组织器官中表达，表明PIK3CA基因与机体生理功能密切相关。在生理活动中，PIK3CA基因的激活因子为酪氨酸激酶。有研究指出，PIK3CA基因作为癌基因，与恶性肿瘤的发生和发展有相关性[8]。有文献报道，PIK3CA基因扩增或变异有促癌作用[9]。此外，PIK3CA基因的生物学效应在不同肿瘤中具有显著性差异。在结肠癌、脑肿瘤和胃癌组织中PIK3CA基因变异率较高，与PIK3CA基因的热点变异区被赖氨酸取代有关。女性生殖系统恶性肿瘤的PIK3CA基因变异率极低，可能与生殖系统的精氨酸表达水平较低有关[10]。本研究结果显示，癌组织及癌旁组织PIK3CA基因第1、9和20外显子区域构象无显著性差异，提示癌组织PIK3CA基因序列正常，并未出现变异。子宫内膜异位症相关性卵巢癌发生与PIK3CA基因变异可能无相关性。

在子宫内膜异位症相关性卵巢癌发病期间，依赖PIK3CA基因的激酶可促进癌细胞增殖，并直接抑制癌细胞的凋亡，导致病情持续恶化[11,12]。本研究结果显示，癌组织PIK3CA蛋白表达水平高于癌旁组织，说明PIK3CA基因在子宫内膜异位症相关性卵巢癌中存在扩增或高度表达的情况，进一步提示PIK3CA基因在子宫内膜异位症相关性卵巢癌的发生、发展过程中发挥作用。此外，有学者采取抑制PIK3CA基因表达的方法治疗子宫内膜异位症相关性卵巢癌，结果发现可显著抑制癌细胞的增殖，促进癌细胞凋亡。这进一步证明子宫内膜异位症相关性卵巢癌发生与PIK3CA基因扩增或高度表达有关[13,14]。

综上所述，子宫内膜异位症相关性卵巢癌发生与PIK3CA基因变异可能无相关性，但PIK3CA基因高表达与该病的发生、发展具有相关性，有望作为一项参考指标用于该病的诊断、疗效及预后评估。

[1] 吴雨珂,廖光东,张竹,等.卵巢子宫内膜异位症恶变与卵巢癌的相关性研究及预后分析[J].实用妇产科杂志,2014,30(9):703-707.

[2] 宋建平.子宫内膜异位症与卵巢癌相关性临床分析[J].现代肿瘤医学,2015,23(10):1432-1434.

[3] 张晓霞,费军伟,于晓伟,等.卵巢癌组织中PI3K的表达及意义[J].吉林大学学报(医学版),2008,34(6):1027-1030.

[4] Samartzis EP, Noske A, Dedes KJ, et al. ARID1A mutations and PI3K/AKT pathway alterations in endometriosis and endometriosis-associated ovarian carcinomas[J]. Int J Mol Sci, 2013,14(9):18824-18849.

[5] 乐露露,傅芬.EGFR介导的信号转导通路相关基因突变与卵巢癌发病的关系及其靶向治疗研究进展[J].山东医药,2011,51(30):113-114.

[6] 王洪艳,崔竹梅,刘湘萍,等.原癌基因PIK3CA在宫颈癌组织中的表达及意义[J].青岛大学医学院学报,2008,44(1):48-50.

[7] Matsumoto T, Yamazaki M, Takahashi H, et al. Distinct β-catenin and PIK3CA mutation profiles in endometriosis-associated ovarian endometrioid and clear cell carcinomas[J]. Am J Clin Pathol, 2015,144(3):452-463.

[8] Wu RC, Ayhan A, Maeda D, et al. Frequent somatic mutations of the telomerase reverse transcriptase promoter in ovarian clear cell carcinoma but not in other major types of gynaecological malignancy[J]. J Pathol, 2014,232(4):473-481.

[9] 燕炜,吴淑华,李扬扬,等.大肠癌组织中PIK3CA和PIK3CB的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(1):18-22.

[10] Yamamoto S, Tsuda H, Takano M, et al. PIK3CA mutation is an early event in the development of endometriosis-associated ovarian clear cell adenocarcinoma[J]. J Pathol, 2011,225(2):189-194.

[11] Shigetomi H, Tsunemi T, Haruta S, et al. Molecular mechanisms linking endometriosis under oxidative stress with ovarian tumorigenesis and therapeutic modalities[J]. Cancer Invest, 2012,30(6):473-480.

[12] Yamamoto S, Tsuda H, Takano M, et al. Loss of ARID1A protein expression occurs as an early event in ovarian clear-cell carcinoma development and frequently coexists with PIK3CA mutations[J]. Mod Pathol, 2012,25(4):615-624.

[13] 卢建军,宋建东,张林燕. PIK3CA、TIEG1在老年卵巢癌组织中的表达及意义[J]. 中国老年学杂志,2015,15(10):2719-2721.

[14] 温菲菲,吴淑华,李扬扬,等.大肠癌组织中PIK3CA、PIK3CB蛋白与多药耐药基因产物表达的相关性及其临床意义[J]. 世界华人消化杂志,2015,9(2):202-209.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.26.016

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1002-266X(2016)26-0051-02

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