一株非A~ F群沙门菌的鉴定与分析

余慧宏，曹健，宋建新，吴建英，闵文光，黄洁琼

(景德镇市疾病预防控制中心，江西　景德镇333000)



·病例报告·

一株非A~ F群沙门菌的鉴定与分析

余慧宏，曹健，宋建新，吴建英，闵文光，黄洁琼

(景德镇市疾病预防控制中心，江西景德镇333000)

摘要：目的对一株来源于本市饮食服务行业从业人员肛拭标本中的沙门菌，探求其鉴定方法，为非A~F群沙门菌的判定提供参考。方法采用噬菌体检验方法，在现有只涵盖A~F群沙门菌诊断血清未能分型的情况下，结合培养基生长特性、全面生化试验进行分析。结果该菌生化反应符合肠道沙门菌定义，能被沙门菌O-I噬菌体裂解，连续数代纯培养物进行血清凝集试验均为A~F多价O血清（-），Vi（-）。结论该菌是一株罕见的非A~F群旺兹沃思沙门菌。

关键词：非A~F群沙门菌；噬菌体检验；血清学试验

沙门菌是重要的肠道病原菌，根据其抗原结构和生化试验，目前已有2000多种血清型。沙门菌的分型鉴定，主要采用血清学的方法，系用O、H 和Vi因子血清与待检菌株作玻片凝集试验。常见的肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌等血清型，均归属于沙门菌A~F群，位于非A~F群的其他群沙门菌仅约占5%[1]。本中心于2013年9月，在对饮食服务行业从业人员健康体检中，检出一株非A~F群沙门菌，现报告如下。

1　材料与方法

1.1样品来源景德镇市某饮食服务行业从业人员汪某，在本中心进行健康检查时，采集的肛拭标本。由专业人员采集后，立即置于亚硒酸盐胱氨酸

增菌液中，经过增菌培养，分离后获得该菌株。

1.2主要试剂和仪器亚硒酸盐胱氨酸增菌液、WS琼脂、三糖铁琼脂、M-H琼脂、药敏纸片均由杭州微生物试剂有限公司生产；科玛嘉沙门菌显色

培养基购自广东环凯微生物科技有限公司；ID32E肠杆菌科生化鉴定试剂条购自法国生物梅里埃公司；沙门菌诊断噬菌体由广州虎克生物技术有限公司生产；沙门菌属诊断血清（60种、59种）分别由宁波天润生物药业有限公司和兰州生物制品研究所提供；沙门菌参考菌株（H9812）和大肠埃希菌标准菌株（ATCC25922）由江西省疾控中心提供。法国生物梅里埃ATB细菌鉴定仪、菌液比浊仪。

1.3方法

1.3.1传统培养将该菌株分别接种于WS琼脂、科玛嘉显色培养基平板、普通营养琼脂、三糖铁琼脂上。选用普通营养琼脂、三糖铁琼脂进行传代培养，培养至第四代。同时将沙门菌参考菌株（H9812）进行接种。

1.3.2细菌生化鉴定采用梅里埃生化分析系统（ATB），选用ID32E肠杆菌科生化鉴定试剂条对其进行生化鉴定。

1.3.3噬菌体试验按照国家标准检验方法，GB/ T4789.31-2003食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法中，快速检验沙门菌的噬菌体简化诊断法进行。

1.3.4血清学鉴定挑取该菌第一代至第四代三糖铁、营养琼脂上的培养物，分别与两个生产厂家出品的沙门菌属诊断血清，作玻片凝集试验；取第一、第四代营养琼脂上的纯培养物制成浓菌液，置于100℃加热30min，取菌液与沙门菌诊断血清做玻片凝集，并设生理盐水，对照组观察。应用人工培养基传代和加热的方式，消除有可能存在Vi抗原以外的M抗原、5抗原等因素的影响[2]。

1.3.5药敏试验采用WHO推荐的K-B纸片法，参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）药物敏感试验执行标准判断结果，用于试验的药敏纸片分别含有抗微生物药庆大霉素、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢噻肟、萘啶酸、环丙沙星、四环素、利福平、复方新诺明。用ATCC25922大肠埃希菌做质控。

2　结果

2.1培养特性WS琼脂上生长出中心黑色，周边无色透明，中等大小的圆形菌落；科玛嘉沙门菌显色培养基上生长出紫红色、表面湿润的圆形菌落；普通营养琼脂平板上生长出圆形、半透明、边缘整齐的菌落。三糖铁琼脂生化反应为：K/A、产气、硫化氢阳性。沙门菌参考菌株（H9812)具有典型菌落，菌株经梅里埃生化分析系统（ATB）鉴定为沙门菌（%ID：99.9 T值：0.68）。

2.2噬菌体试验该菌呈现出O-I噬菌体裂解，C多价、E多价噬菌体均不裂解模式。但尚未得出血清分型，为沙门菌未分型[3，4]。

2.3血清学鉴定取三糖铁培养基、普通营养琼脂上的第一至第四代纯培养物，与两个生产厂家的沙门菌诊断血清做玻片凝集，A~F多价O血清（-），Vi（-），A~F多价O血清中所包含的O因子血清、O复合血清均为（-）。H多价1（+），Hb（+），H多价4（+），H1，2，3，5(+)，H2(+)。

经血清凝集鉴定为非A~F群沙门菌，同时送江西省疾控中心进一步鉴定[5]，经过江西省疾控中心鉴定该菌株为旺兹沃思沙门菌，属Q群沙门菌（O39：b：1，2）。

2.4药敏试验该菌株对利福平、复方新诺明耐药，庆大霉素、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢噻肟、萘啶酸、环丙沙星、四环素均为敏感。

3　讨论

沙门菌分布广泛，可从人和世界各地的动物中分离得到，人体携带的沙门菌可通过食品等多种途径传播。沙门菌携带者不仅会给自身带来各种健康危害，同时也是一个潜在的引起沙门菌传播的公共卫生危险因素[6-8]。因此，应加大从业人员食品卫生知识宣传教育，改变食品安全行为，自觉的提高安全食品意识[9，10]。加强从业人员沙门菌的监督管理工作；加强对饮食（服务）行业从业人员的健康检查。

在健康体检监测工作中，确定为沙门菌携带者的从业人员，大多数无临床症状，仅有少数出现轻度腹泻，往往是通过肛拭检查才被发现，因此沙门菌实验室检测工作尤为重要。在运用噬菌体诊断检验方法进行沙门菌鉴定时，出现O-I噬菌体裂解，其他噬菌体不裂解模式的情况下，继而初步判定为沙门菌，经沙门菌血清分型后报告。一般情况下，血清学分型中，常用的是只涵盖A~F群沙门菌的诊断血清，部分基层单位选择沙门菌诊断血清时，会从特异性、使用率、经济实惠等方面考虑购买这类血清，进行沙门氏菌血清学鉴定。虽然可对大部分沙门菌进行鉴定，但对比较罕见的O抗原在A~F群之外的旺兹沃思沙门菌，存在无法鉴定的先天不足，易导致诊断和甄别困难。国内很少有关于旺兹沃思沙门菌的文献报道，对于此次菌株的检出，噬菌体检验方法起到了重要作用，再辅以全面系统的生化试验，有效地避免了因其非A~ F群特性可能存在的漏诊或漏报。

旺兹沃思沙门菌于20世纪70至80年代曾在香港有多重耐药菌的流行，并曾一度因直肠体温计的交叉污染引起医院儿科病房持续院感暴发。2007年美国23个州报告69例食源性病例(除3例成人病例外，其余为10月龄至3岁的学龄前儿童)，确认为旺兹沃思和鼠伤寒混合感染的暴发病例[11，12]。因此，在沙门菌监测工作中，不能忽视罕见血清型沙门菌对公共卫生的威胁。

致谢：感谢江西省疾病预防控制中心杨梦主任技师、徐晓倩主管医师给予的支持和帮助。

参考文献

[1]许学斌，冉陆，朱超.沙门菌分型血清对比研究(上海市，1999至2007年)[J].检验医学，2010，25(1)：21-25.

[2]何晓青.卫生防疫细菌检验[M].南昌：新华出版社，1989，(1)：10-11，301-317.

[3]中华人民共和国卫生部. GB/T4789. 31-2003食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法[S].北京：中国标准出版社，2012，(1)：309-318.

[4]中华人民共和国卫生部. GB4789. 4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验[S].北京：中国标准出版社，2012，(1)：25-44.

[5]中华人民共和国卫生部. WS271-2007感染性腹泻诊断标准[S].北京：人民卫生出版社，2008，(1)：6-7.

[6]付汉维，熊建辉，吴凯，等.深圳市饮食及服务从业人员肠道沙门氏菌带菌调查[J].公共卫生与预防医学，2012，23(6)：113-114.

[7]郭仲辉，陈冬雅，黎毓光，等.沙门菌的检测及耐药性分析[J].实验与检验医学，2013，31(1)：63-64.

[8]黄凯，段荣，余晓君. 16例婴幼儿败血症猪霍乱沙门菌感染的耐药性分析[J].实验与检验医学，2012，30(5)：466-487.

[9]李玉莹.饮食(服务)行业从业人员肠道沙门氏菌检测结果分析[J].中国卫生产业，2015，12(4)：25-26.

[10]朱超，刘忠民，李成志，等.一株新的沙门氏菌[J].检验检疫学刊，2009，19(1)：26-27.

[11]张雯霞，陈敏，张曦，等. 2009-2011年上海市旺兹沃斯沙门菌的耐药分析及分子分型[J].中国食品卫生杂志，2012，24(5)：424-427.

[12]黄峥，刘芸，汤泓，等.旺兹沃思沙门菌耐药分子流行病学特征研究[J].疾病监测，2015，30(1)：50-57.(收稿日期2016-01-21；修回日期2016-03-14)

中图分类号：R446.5，R516.3，R378.2+2

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0405-03

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.051