补肾健脾 解毒利咽法对IgA肾病模型大鼠血清TNF-a、IL-6的影响

王银萍，张冬梅，王宏安，张洪宝，张守琳

(长春中医药大学附属医院肾病科，长春 130021)



补肾健脾 解毒利咽法对IgA肾病模型大鼠血清TNF-a、IL-6的影响

王银萍，张冬梅，王宏安，张洪宝，张守琳*

(长春中医药大学附属医院肾病科，长春 130021)

摘要：目的探讨补肾健脾、解毒利咽法治疗IgA肾病(IgAN)的作用机制。方法将72只Wistar大鼠随机分为空白组，模型组，洛丁新组，补肾健脾、解毒利咽法高、中、低剂量组。采用口服BSA 和尾静脉注射LPS 方法建立IgAN大鼠模型。观察给药8周后大鼠各时相尿红细胞计数、24 h尿蛋白定量(UTP)、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化。结果与模型组相比，各组大鼠24 h UTP均有所下降，其中中药中剂量组下降最为显著(P<0.05)； 中药各治疗组尿红细胞计数明显减少(P<0.05)，以中药中剂量组减少显著(P<0.01)；洛丁新组尿中红细胞计数无下降(P>0.05)。与空白组比较，模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6均明显升高，P<0.05)。与模型组比较，治疗组大鼠血清中TNF-α、IL-6明显减少(P<0.05)，以中药中剂量组疗效最显著(P<0.01)。结论补肾健脾、解毒利咽法能降低IgAN模型大鼠血尿、蛋白尿，减少血清中TNF-α及IL-6的含量。

关键词：补肾健脾;解毒利咽;IgA肾病;模型大鼠;TNF-α;IL-6

IgA肾病(IgAN)是我国比较常见的肾小球疾病，其发病率较高，约占慢性肾炎的30%～40%,是导致终末期肾病的主要原因之一[1-2]。其病理特征为肾小球系膜区呈弥漫性的IgA沉积伴以系膜增生，临床主要表现为血尿及蛋白尿。补肾健脾、解毒利咽法由我院国医大师任继学教授提出，能有效降低IgAN患者血尿及尿蛋白，延缓肾功能恶化。为进一步探讨该法治疗IgAN的疗效作用机制，进行本实验研究。报道如下。

1材料与方法

1．1动物选择6周龄健康清洁级雄性Wistar大鼠72只，体质量160～200 g，由吉林大学白求恩医学院动物实验室提供，实验动物合格证号：SCXK(辽)2013-000。

1．2仪器、试剂及药物荧光显微镜TXM-500C，上海天省仪器有限公司；全自动酶标仪318C，上海昨非实验室设备有限公司；组织破碎机BIO-950，上海般诺生物科技有限公司。TNF-α及IL-6ELISA检测试剂盒，由上海信裕生物科技有限公司提供；牛血清白蛋白、脂多糖，美国sigma公司；荧光素标记兔抗大鼠IgA抗体，北京博奥森生物技术有限公司。洛丁新由北京诺华制药有限公司提供(国药准字1050423H0)；补肾健脾、解毒利咽法中药由长春中医药大学附属医院制剂室统一煎制。

1．3实验方法

1．3．1造模方法大鼠购买后先饲养1周，以适应环境，随机分为空白组，模型组，洛丁新组，补肾健脾、解毒利咽法中药高、中、低剂量组。参照陆慧渝等[3]报道的方法制备动物模型，于第9周每组各选取2只，取肾组织行光镜检查验证模型是否成功。

1．3．2分组及给药验证模型成功后，对照组给予洛丁新10 mg/(kg·d)灌胃；治疗组给予中药高、中、低32、16、8 g/(kg·d)剂量灌胃；空白组及模型组每天仅给予生理盐水灌胃，4 mL/只。共给药8周。

1．3．3观测指标观察大鼠的一般状态，包括：体质量、毛发、排尿的颜色及尿量、分别于第0、4、6、8、10、12、14、16周末，用代谢笼收集24 h尿液，观察尿液颜色，记录尿量、肉眼血尿次数及程度，取部分尿液行24 h UTP测定，检测尿沉渣尿红细胞计数,采用ELISA法检测血清中TNF-α和IL-6含量(按试剂盒说明书操作)。

2结果

2．1一般情况造模过程中大鼠共死亡7只，另外每组选取2只用于验证模型是否成功。空白组大鼠在实验过程中一般状态始终良好。自造模4周各组大鼠出现进食和活动减少，毛色晦暗，体质量下降、腹泻及尿色变深；自第10周开始给药后治疗组大鼠一般状况明显好转，体质量有所增加。

2．2各组大鼠尿红细胞计数比较见表1。

±s)　p/HP

注：与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，△P<0.05；与洛丁新组比较，▲P<0.05；中药组间比较，◆P<0.052．3治疗前后各组大鼠24 h尿蛋白定量变化的比较见表2。

mg/24 h

注：与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，△P<0.05；与洛丁新组比较，▲P<0.05；中药组间比较，◆P<0.052．4治疗后各组大鼠血清中TNF-α、IL-6含量的比较见表3。

组 别nTNF-αIL-6空白组 81.99±0.12 1.24±0.12 模型组 133.79±0.47# 3.32±0.63# 洛丁新组102.63±0.78△ 1.96±0.74△ 高剂量组102.01±1.05△▲ 1.16±0.63△▲ 中剂量组101.90±0.52△▲◆0.98±0.52△▲◆低剂量组101.95±0.76△▲ 1.05±0.85△▲

注：与空白组比较,#P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与洛丁新组比较，▲P<0.05；中药组间比较，◆P<0.05

3讨论

国医大师任继学教授认为，本病的病机核心为肾虚脾亏，而邪毒蕴结咽喉是本病发病的使动因素。咽喉属肾络肺，为外邪出入之门户，邪毒从口鼻而入，盘踞于咽喉，形成乳蛾，从气血之道侵犯于肾，形成伏邪，久而为毒，居于肾宫，形成咽喉→肺→肾的恶性循环[4-7]。因此，肾炎的发生与复发，以及病情的加重和咽喉密切相关[8-10]。因此任老提出补肾健脾、解毒利咽之大法，临床应用40余年，疗效显著[11-13]。

方中生地黄、黄芪、党参共为君药补肾健脾以固本；金荞麦苦寒，擅长清热解毒、消肿散结，为治疗咽喉肿痛、喉症开关之要药[14]；木蝴蝶、马勃能清肺利咽，可治疗肺热咳嗽、喉痹、音哑；紫荆皮、郁金消肿解毒，活血通经；上药合用能解毒散结，消散咽部邪毒；金樱子酸甘平，入肾经，助君药补肾摄精，土茯苓解毒除湿、消除尿蛋白；白茅根清热利尿、凉血止血；生蒲黄化瘀利尿而止血，使血止而不留瘀；以上4味共为佐使药，助君药补肾摄精，解毒化瘀。

本实验结果表明，中药组可明显减少尿中红细胞计数，明显降低血清中TNF-α、IL-6的含量。笔者认为，补肾健脾、解毒利咽法中药通过降低血清中TNF-α、IL-6的含量，抑制肾小球系膜细胞的增值及细胞外基质的生产，从而延缓肾功能恶化。

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[14]童延清.任继学治疗慢性肾衰竭用药经验采撷[J].中医文献杂志,2004 (1):34-36.

Bushenjianpi and Jieduliyan method to TNF-α,IL-6 of IgA nephropathy rat model

WANG Yinping,ZHANG Dongmei,WANG Hongan,ZHANG Hongbao,ZHANG Shoulin*

(Department of Nephrology,The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130021,China)

Abstract：ObjectiveTo study the effect and mechanism of Bushenjianpi and Jieduliyan method on IgA nephropathy.MethodsThe 72 Wistar rats were randomly divided into blank group,model group,Lotensin group,Bushenjianpi and Jieduliyan high,medium and low dose group (is called traditional Chinese medicine high,medium and low dose group for short).The IgA nephropathy rat model were established by the method of feeding with bovine serum albumin (BSA) and injecting tail vein with lipopolysaccharide (LPS).Eight weeks administration later,each phase’s urine red blood cell count,UTP,TNF-αand IL-6 content were observed.ResultsCompared with model group,every groups’ UTP decreased and traditional Chinese medicine dose group decreased extraordinary(P<0.05).Compared with model group,urine red blood cell count decreased significantly of every traditional Chinese medicine group(P<0.05),especially traditional Chinese medicine medium dose group improved significantly (P< 0.01),but Lotensin group urine red blood cell count no drop (P>0.05).Compared with blank group,TNF-αIL-6 on model group’s in diabetic rats serum were significantly elevated (P<0.05).Compared with model group,TNF-α,IL-6 of treatment groups in diabetic rats serum decreased significantly(P<0.05),compared with every group,traditional Chinese medicine medium dose group’s data is the most significant (P<0.01).ConclusionBushenjianpi and Jieduliyan method can reduce the model rats hematuria and proteinuria of IgA nephropathy,and reduce the content of IL-6 and TNF-αin serum which is better than Lotensin.

Keywords：Bushenjianpi;Jieduliyan;IgA nephropathy;model rats;TNF-α;IL-6

(收稿日期:2015-09-20)

文章编号：2095-6258(2016)01-0022-03

中图分类号：R285.5

文献标志码：A

*通信作者：张守琳,女,博士,主任医师,电话-15948000552，电子信箱-shoulin-z @163.com

作者简介：王银萍(1984-)，女，硕士，主治医师，主要从事中医肾病方向研究。

基金项目：吉林省科技厅自然科学基金项目(2015101214JC)；吉林省中医药管理局科技项目(2014-zd7)；吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(2014第65号)。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.01.007