龙牙楤木多糖在大鼠体内的药代动力学研究

徐　倩　韩真贤　赵　宏3



龙牙楤木多糖在大鼠体内的药代动力学研究

徐倩1韩真贤2赵宏3

【摘要】目的研究龙牙楤木多糖在大鼠体内的药代动力学。方法大鼠单次口服龙牙楤木多糖后，采用高效液相色谱与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生方法测定大鼠血浆中的龙牙楤木多糖。色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），流动相为0.1mol/L磷酸盐溶液（pH6.7）:乙腈=83:17。结果血清样品中，龙牙楤木多糖的线性范围为5.0～100.0 μg/ml（r=0.998 8）；高、中、低3种不同浓度的日内RSD值分别为4.12%、6.28%、6.93%；日间RSD值分别为4.07%，6.50%，6.85%；相对回收率分别为88.0%、93.6%、95.07%。单剂量给药后，大鼠体内的药代动力学过程符合开放2室模型，主要药代动力学参数分别为Cmax：61.15 μg/ml，tmax：94.57 min，AUC：20421.60 min/ （μg·ml），t1/2ka：34.37，t1/2ke：149.17。结论高效液相色谱与PMP柱前衍生法测定大鼠血浆中的龙牙楤木多糖的方法专属性强，结果可靠。

【关键词】高效液相色谱；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮；龙牙楤木多糖；大鼠；血浆

1大庆市第三医院，黑龙江大庆163712

2大庆油田总医院，黑龙江大庆163001

3佳木斯大学药学院，黑龙江大庆154007

【Key words】High Performance Liquid Chromatography;PMP;Rats;Plasma;Aralia elata polysaccharide

龙牙楤木[Aralia elata(Miq.)Seem.]为五加科楤木属植物，别名辽东楤木、刺老鸦，味辛、平，有小毒，据《本草纲目》记载其具有除风疾、治水瘤、补肾腰、壮筋骨等作用[1]，主治神经衰弱、风湿性关节炎、糖尿病、胃痉挛、便秘、外伤出血、阳痿、肝炎。目前，国内外对龙牙楤木的皂苷类化合物、黄酮类化合物、挥发油类化合物及氨基酸等研究较多[2-4]，而对于龙牙楤木多糖（aralia elata polysaccharides,AEPS）的报道相对较少。药理研究表明，AEPS对小鼠艾氏腹水癌、小鼠肉瘤、小鼠网状组织细胞白血病均有抑制作用，可明显延长患病小鼠的生存期并抑制肿瘤细胞增生[5]，具有抗辐射损伤作用[6]。但有关AEPS药代动力学方面的报道[7-11]几乎没有。本研究采用高效液相色谱与PMP柱前衍生方法[11-15]测定口服给药后AEPS在大鼠血浆中的浓度，就AEPS在大鼠体内的药代动力学特点进行探讨，现报道如下。

1　仪器与试剂

1.1仪器美国Agilent 1100 LC（美国安捷伦公司）；TGL-16M台式高速冷冻离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）；DZG-6050型真空干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）。

1.2药品与试剂AEPS由佳木斯大学药学院提供（含量＞99%），批号：20140716；色谱纯乙腈（山东禹王实业有限化工分公司）；色谱纯甲醇（天津市北方天医化学试剂厂）；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP，天津市科密欧化学试剂开发中心）；其他试剂均为分析纯。

1.3动物Wista大鼠，体重（180±10）g，由佳木斯动物实验中心提供。

2　方法

2.1色谱条件色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：0.1 mol/L磷酸盐溶液（pH6.7）:乙腈=83:17；流速：1.0 ml/min；λmax：245 nm；柱温：30 ℃；进样量：50 μl。

2.2血清样品处理取血清1 ml，加入5%高氯酸1 ml，混匀后，10 000 r/min，离心15 min（离心半径为0.1 m），取上清液于55 ℃真空干燥箱内干燥，残渣用1 ml蒸馏水溶解，加入1 ml三氟乙酸（2mol/L）水解110 ℃，2 h；水解后真空干燥，残渣溶于1 ml氨水中。取100 μl氨水溶液与100 μl PMP甲醇溶液（0.5 mol/L）混合，70 ℃下反应30 min，取出后冷却至室温，加入0.5 ml蒸馏水，真空干燥，残渣用1 ml蒸馏水与1 ml氯仿溶解，充分震荡后除去有机相，重复3次，水相过0.22 μm微孔滤膜，取50 μl进样。

2.3标准曲线制备取大鼠血清100 μl，精密加入不同量的葡萄糖贮备液，使其浓度分别为5.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0 μg/ml，按2.2项下方法处理过程分析，以样品峰面积（A）对浓度（C）做线性回归。

泵站机电设备诊断故障的常用方式主要包括温度检测、铁谱诊断、振动检测等。温度检测通过测量机电设备的运行温度和环境温度，当温度发生异常时温度检测系统将发出警报，此刻维护检修人员将按照设备运行状况对设备进行诊断。铁谱诊断方法主要通过观测设备元器件的润滑程度以对机电设备的运行情况进行诊断，润滑油能使得泵站机电设备在高梯度和强磁场环境下维持良好的运行形态，按照所提取的铁屑密度制备光谱片，进而体现设备元件的磨损状况。振动检测主要利用振动频率扩大器以促使传感器振动信号被放大，接着监测振动的峰值情况，设备检修维护人员通过研究振动状况统计结果，可清楚掌握设备的能量转化状况。

2.4回收率与精密度试验取大鼠血清0.5 ml，精密加入不同量的AEPS贮备液，浓度分别为10.0、50.0、75.0 μg/ml。按2.2项下方法处理后，于同日内连续测定5次，5 d内重复测定，评价本方法回收率及日内、日间RSD。

2.5稳定性试验取大鼠血清0.5 ml，精密加入不同量的AEPS贮备液，浓度分别为10.0、50.0、75.0 μg/ml，一份置4 ℃冷藏保存，另一份置－20 ℃冷冻保存，连续5 d取样，按2.2项下方法处理后，考察样品在4 ℃及－20 ℃的稳定性。

2.6试验方案Wista大鼠15只，体重180～240 g，禁食12 h，随机分为5组，按200 mg/kg口服AEPS溶液，于给药前及给药后20、40、60、90、120、150、180、210、240、300、360、720、1080、1440 min取大鼠眼底静脉血，将血样以10 000 r/min离心5 min（离心半径为0.1 m），转移上层血清，按2.2项下方法处理后进样。

3　结果与讨论

3.1标准曲线按2.3项下方法，结果表明血清中AEPS在5.0～100.0 μg/ml浓度范围内线性关系良好，标准曲线回归方程为y=51.097x+521.25（r=0.9988），见图1

图1　大鼠血清中的龙牙楤木多糖血药浓度标准曲线

3.2回收率与精密度按2.4项下方法，大鼠血清中AEPS的高、中、低的相对回收率分别为88.0%、93.6%、95.07%。大鼠血清中，高、中、低3种不同浓度的日内RSD值分别为4.12%、6.28%、6.93%；日间RSD值分别为4.07%、6.50%、6.85%，见表1。

3.3稳定性按2.5项下方法，大鼠血清中AEPS的稳定性见表2。

3.5药代动力学参数大鼠单剂口服龙牙楤木多糖溶液后，血药浓度经3P97生物等效性软件处理，按二室开放模型计算药代动力学参数，见表3。

表1　大鼠体内AEPS日内、日间RSD

表2　大鼠血清中AEPS在不同温度下的稳定性

图2　大鼠灌胃龙牙楤木多糖后血药浓度-时间曲线(n=5)

表3　大鼠灌胃给药AEPS后的药代动力学参数

由表3可知，大鼠灌胃给药后的吸收相和消除相半衰期表明，AEPS在大鼠体内吸收较快，消除较慢，有效血药浓度维持时间较长。本研究所获得的体内药代动力学参数，可为临床药学深入研究提供理论依据。

3.6小结本研究首次建立高效液相色谱与PMP

柱前衍生方法测定AEPS在大鼠体内药代动力学，该方法反应条件较温和[16-20]，样品用量少，RSD和重现性均较好，操作简单，能够满足龙牙楤木的药代动力学研究。

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Pharmacokinetics of Aralia elata Polysaccharide in Rats

Xu QianHan ZhenxianZhao Hong

【Abstract】ObjectiveTo study the Pharmacokinetics of Aralia elata polysaccharide in Rats.MethodsFollowing p.o.administration to rats,the use of high-performance liquid chromatography with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP)were used to determine pre-column derivatization in rat’s plasma polysaccharide Aralia elata.Agilent Zorbax XDB-C18column(5 μm,150 mm×4.6 mm I.D.)was used with a mobile phase consisting of 0.1 mol/L Phosphate solution (pH6.7):Acetonitrile=83:17.ResultsThe linear range of Aralia elata polysaccharide in serum was 5.0～100.0μg/ml (r=0.9988) and the High,the medium and the low concentrations of three different intraday RSD values were 4.12%,6.28%,6.93%;day RSD values were 4.07%,6.50%,6.85%;The relative recoveries were 88.0%,93.6%, 95.07%. After single dosage for medicine,the rats in vivo's medicine generation of dynamics process tallies opens the two room of models,the main medicine generation of dynamics parameter respectively is Cmax:61.15μg/ml,tmax: 94.57min, AUC: 20421.60 min(μg·ml),t1/2ka:34.37,t1/2ke:149.17.ConclusionThe methods of use high-performance liquid chromatography with PMP were used to determine pre-column derivatization in rat’s plasma polysaccharide Aralia elata is specific and reliable.

作者简介：徐倩（1982.11-），硕士学位，主管药师。研究方向：黄铜衍生物的提取及应用

【中图分类号】R774.1

【文献标志码】A【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.02.006