气相色谱法测定冬瓜子中4种脂肪酸的含量

李慧峰，荆 然，程艳刚，裴妙荣

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040）

气相色谱法测定冬瓜子中4种脂肪酸的含量

李慧峰1，荆 然1，程艳刚2，裴妙荣1

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040）

●中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂，医方是“除疾保性命之术”，而剂则有“调百药齐，和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术，开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

目的：建立测定不同产地冬瓜子中4种脂肪酸含量的气相色谱方法。方法：色谱柱为HP-FFAP（0.2 mm×50 m）毛细管色谱柱，载气为氮气，流速0.5 mg/mL，分流比为23∶1，空气流速450 mg/mL，氢气流速45 mg/mL。柱温采取程序升温，进样口温度为250℃，FID检测器温度为250℃。结果：冬瓜子中棕榈酸质量分数为2.429%～2.977%，硬脂酸质量分数为1.217%～1.615%，油酸质量分数为3.260%～4.287%，亚油酸质量分数为10.752%～14.562%。结论：该方法准确度高、重复性好，可用于冬瓜子脂肪油中4种脂肪酸的质量控制。

气相色谱法；冬瓜子；油酸；亚油酸；棕榈酸；硬脂酸

冬瓜子为葫芦科植物冬瓜Benincasa hispida（Thunb.）Cogn.的干燥成熟种子。其味甘，性微寒，归肺、大肠经。具有清热化痰、排脓利湿的功效，用于痰热咳嗽、肺脓疡、阑尾炎、白带的治疗［1］。冬瓜子中含有多种脂肪酸，本研究采用气相色谱法，对冬瓜子脂肪油中的油酸、亚油酸、棕榈酸和硬脂酸的含量进行定量分析，现将结果报道如下。

1 实验材料

1.1 实验仪器

Agilent6890气相色谱仪（美国Agilent公司），FID检测器；KQ3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA2014电子天平（万分之一上海精科天平）。

1.2 实验试剂

油酸（批号：111621-201203）、亚油酸（批号：111622-201203）、棕榈酸（批号：190029-201001）、硬脂酸（批号：190032-201202）对照品均购自国家标准物质中心，供含量测定用。其他试剂均为分析纯。

1.3 实验药材

本实验共采集12批冬瓜子药材，均由山西中医学院中药学院中药鉴定教研室裴香萍老师鉴定，见表1。

表1 样品来源

2 方法与结果

2.1 脂肪油的提取

取不同产地冬瓜子样品40 g，粉碎，精密称定，置500 mL圆底烧瓶中，回流提取2次，分别加入石油醚（60℃～90℃）400 mL、300 mL，每次1 h，减压滤过，合并滤液。滤液用蒸馏法回收石油醚（60℃～90℃），得深绿色脂肪油。

2.2 色谱条件

采用毛细管色谱柱HP-FFAP（0.2 mm，50 m），载气为氮气，流速0.5 mL/min，分流比为23∶1，空气流速450 mL/min，氢气流速45 mL/min。柱温采取程序升温［2］，进样口温度为250℃，FID检测器温度为250℃［3］。混合对照品、冬瓜子的色谱峰图见图1、图2。

图1 混合对照品气相色谱图

图2 冬瓜子（20120927）供试品气相色谱图

2.3 对照品溶液的制备

精密称定油酸、亚油酸、棕榈酸、硬脂酸（分别为51.68 mg、31.90 mg、9.21 mg、20.77 mg），置于25 mL锥形瓶中，加入14%BF3甲醇溶液1.5 mL，于60℃水浴锅中加热15 min，取出，放冷，精密加入正辛烷2.5 mL，充分振摇后，加饱和食盐水使正辛烷层置瓶颈处。抽取上层溶液过微孔滤膜，得混合对照品溶液（母液）。油酸、亚油酸、棕榈酸、硬脂酸的质量浓度分别为20.672 mg/mL、12.760 mg/mL、3.684 mg/mL、8.308 mg/mL。

2.4 供试品溶液的制备

取样品脂肪油约80 mg，精密称定，置25 mL锥形瓶中，加入0.5 mol/L KOH甲醇溶液1 mL，于60℃水浴锅中加热30 min，取出，放冷。加入14% BF3甲醇溶液1 mL，于60℃水浴锅中加热15 min，取出，放冷，精密加入正辛烷5 mL，充分振摇后，加饱和食盐水使正辛烷层置瓶颈处。抽取上层溶液，微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

2.5 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8mL，置1 mL容量瓶中，加正辛烷定容。摇匀后分别注入气相色谱仪，测定峰面积。以其进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，并分别得到4种脂肪酸的回归方程。Y油酸= 353.46X+20.206（r=0.999 1），Y亚油酸=334.13X+ 16.348（r=0.999 5），Y硬脂酸=374.28X+6.935 5（r= 0.999 1），Y棕榈酸=433.44X-4.994 7（r=0.999 3）。结果表明油酸在2.067～16.537 μg，亚油酸在1.276～10.208 μg，棕榈酸在0.368～2.947 μg，硬脂酸在0.830～6.646 μg呈良好线性关系。

2.6 精密度实验

取混合对照品重复进样6次，测定峰面积，结果油酸、亚油酸、硬脂酸、棕榈酸的RSD分别为1.968%，1.877%，1.670%，1.829%。表明此法精密度良好。

2.7 稳定性实验

精密称取第10批冬瓜子油样品1份，按2.4项下方法制备，0.45 μm微孔滤膜过滤后，于配制后0、2 h、4 h、8 h进样，测定峰面积积分值，结果棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸的RSD分别为1.53%，2.34%，1.41%，0.86%。表明样品溶液在8 h基本稳定。

2.8 重复性实验

精密称取第10批冬瓜子油样品6份，按2.4项下的方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算4种脂肪酸的含量及RSD，棕榈酸平均含量为2.728%，RSD 2.72%；硬脂酸平均含量为1.462%，RSD 2.67%；油酸平均含量为3.989%，RSD 2.78%；亚油酸平均含量为10.752%，RSD 0.83%。结果表明此法重复性良好。

2.9 加样回收率实验

精密称取已知4种脂肪酸含量的第10批冬瓜子油样品6份，每份40 mg，精密加入棕榈酸1.2 mg、硬脂酸0.6 mg、油酸1.5 mg、亚油酸3.1 mg，按2.4项下方法制备供试品，测定其含量，并计算回收率，结果见表2。

表2 冬瓜子脂肪油中4种成分加样回收实验

2.10 样品测定

取10个不同产地的冬瓜子样品各80 mg，按照2.4项下的方法制备供试品溶液，按2.2项下方法测定峰面积，计算4种脂肪酸含量，结果见表3。

表3 冬瓜子脂肪油中4种脂肪酸成分含量测定 （%）

3 讨论

在供试品脂肪油提取中，考察了提取0.5 h、1 h、1.5 h对提取率的影响，结果表明，0.5 h到1 h提取率升高，提取1 h和提取1.5 h对提取率影响差别不大。因此，为节省时间，选择提取时间为1 h。液料比的选择上，考察了8∶1、10∶1、12∶1，结果10∶1较8∶1的液料比提取率高，与12∶1的液料比提取率相差不大，因此选择10：1的液料比［4］。

先后采用了多种色谱柱，PEG-20毛细管色谱柱（0.5 mm，15 m）、PEG-20毛细管色谱柱（0.25 mm，30 m）、HP-FFAP毛细管色谱柱（0.2 mm，50 m）等，实验结果表明HP-FFAP色谱柱（0.2 mm，50 m）可使供试品中4种脂肪酸达到基线分离，分离度均＞1.5，因此本实验选择了HP-FFAP（0.2 mm，50 m）色谱柱。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：化学工业出版社，2010.

［2］张媛，王喆之.火麻仁挥发油的化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2009（21）：259.

［3］刘海霞，裴香萍，李慧峰，等.气相色谱法测定丝瓜子中4种脂肪酸的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2014，20（14），72-75.

［4］陈易彬，王维，陈萱，等.冬瓜子油的提取及其成分研究［J］.天然产物研究与开发，2014（26）：1 430-1 433.

（编辑：翟春涛）

Determination of content of four kinds of fatty acids in Benincasa hispida seed by GC

Li Huifeng1，Jing Ran1，Cheng Yangang2，Pei Miaorong1
（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024；2.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin Heilongjiang 150040）

Objective：To establish a method for the determination of the content of four kinds fatty acids in benincasa hispida（Thunb.）Cogn.from different origins.Method：The GC was performed on HP-FFAP column（0.22 mm×50 m，0.3 μm），nitrogen gas was used as carrier and flow rate was 0.5 mL/min，split ratio was 23∶1，the air flow rate was 450 mL/ min，the hydrogen flow rate was 45 mL/min.The column temperature was taken programmed，and the temperature of injector and FID detector was both at 250℃.Result：The content of palmtinic acid，octadecanoic acid，oleic acid and linoleic acid in benincasa hispida seed were 2.325%～2.985%，1.198% ～1.771%，2.212%～5.159%，7.383%～13.578% respectively.Conclusion：The method can be used to control the quality of four kinds fatty acids in benincasa hispida seed，which is accurate，convenient and repeatable.

GC；benincasa hispida seed；oleic acid；linoleic acid；palmtinic acid；octadecanoic acid

R285

A

1671-0258（2016）04-0022-03

山西省中药材、中药饮片地方标准研究（2012009A）

李慧峰，助教，硕士，E-mail：lihuifeng2046@163.com

裴妙荣，博士生导师，教授，E-mai：peimr602@163.com